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        熒光定量PCR法檢測HBV-DNA與ELISA法乙肝免疫學(xué)指標的相關(guān)性

        2020-08-13 11:18:55盧宇婷
        健康之友 2020年5期

        盧宇婷

        【關(guān)鍵詞】熒光定量PCR法;HBV-DNA;ELISA法;乙肝免疫學(xué)指標

        【中圖分類號】R446.6 【文獻標識碼】B 【文章編號】1002-8714(2020)05-0127-02

        乙肝全稱為乙型肝炎,指的是因乙肝病毒造成患者肝臟發(fā)生炎性病變,如未得到及時有效治療,會對多器官造成損害。另外,該病具有較強的傳染能力,且患者長時間保持帶病毒狀態(tài),對其健康、日常生活等均造成不良影響。由于早期乙肝患者癥狀表現(xiàn)缺乏代表性,很容易出現(xiàn)誤診、漏診情況,因而,找尋一種及時、準確的診斷方法至關(guān)重要[1]。傳統(tǒng)臨床多采取酶聯(lián)免疫吸附法檢測患者病毒感染情況,通過測定患者血液內(nèi)含有的抗體、特異性抗原從而判定是否出現(xiàn)感染。最近幾年,隨著醫(yī)療水平的提高,分子生物學(xué)不斷發(fā)展,熒光定量PCR法廣泛用于臨床疾病診治中,效果良好。通過該方法測定乙肝患者感染病毒的DNA,可有效表現(xiàn)出感染活性[2]。本文以2017.7-2019.7我院收治70例乙肝患者為例,闡述ELISA法及熒光定量PCR法的具體操作過程及結(jié)果關(guān)聯(lián)性,如下。

        1 資料與方法

        1.1一般資料

        此次研究時間為期2年,自2017年7月開始,至2019年7月結(jié)束,研究對象選擇我院收治乙肝患者70例,包括男患45例,女患25例,年齡最低者16歲,最高者84歲,平均年齡(44.5±1.4)歲,經(jīng)臨床診斷34例患急性乙肝,36例患慢性乙肝,病程時間短則8日,長則89日,平均病程(45.3±1.3)日。所有病患入院均表現(xiàn)出程度不一的發(fā)熱、惡心、腹部不適、身體疲乏等狀態(tài),少數(shù)患者伴有黃疸、肝區(qū)疼痛感。

        1.2方法

        在檢驗前一天通知患者提前8h禁食、6h禁飲,在檢驗當天早6:00至8:00空腹狀態(tài)下提取靜脈血樣本。樣本獲取后以離心的方式分離血清,并將其放置在恒溫箱內(nèi)保存,溫度設(shè)定在4℃即可。

        檢驗所需設(shè)備為熒光定量分析儀、全自動酶標儀,所需試劑則包括FQ-PCR配套試劑盒、ELISA試劑。進行HBV(乙肝病毒)的DNA定量檢測時選擇FQ-PCR(熒光定量PCR)法,嚴格按照設(shè)備和試劑盒配套的說明書進行操作,如結(jié)果顯示乙肝病毒DNA指標超過1.0×102IU/ml則判斷為陽性[3]。乙肝病毒血清標志物檢驗時采用ELISA方法,要求所有受檢對象的樣本均采用統(tǒng)一試劑盒進行檢驗,以免出現(xiàn)數(shù)據(jù)偏差,所有操作均需嚴格按照配套說明書內(nèi)容開展,主要檢測對象包括HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb。

        1.3觀察指標

        分別記錄ELISA檢測患者乙肝免疫指標結(jié)果及熒光定量PCR檢測患者HBV-DNA結(jié)果,探究二者關(guān)聯(lián)性。

        1.4統(tǒng)計學(xué)分析

        整理研究所得數(shù)據(jù),輸入SPSS19.0軟件內(nèi)處理,結(jié)果間差異以p<0.05形式表達。

        2 結(jié)果

        2.1乙肝免疫學(xué)表達與HBV-DNA陽性率間關(guān)系分析

        此次經(jīng)ELISA檢驗顯示,22例患者血清標志物呈大三陽表現(xiàn),占比31.43%,29例患者血清標志物呈小三陽表現(xiàn),占比41.43%,4例患者呈慢性HBsAg攜帶表現(xiàn),占比5.71%,6例患者呈急性轉(zhuǎn)復(fù)表現(xiàn),占比8.57%,9例患者呈乙肝恢復(fù)期表現(xiàn),占比12.86%。經(jīng)熒光定量PCR檢測以大三陽患者HBV-DNA陽性率最高(p<0.05),見表1。

        表1?乙肝免疫學(xué)表達與HBV-DNA陽性率間關(guān)系分析

        2.2乙肝免疫學(xué)表達與HBV-DNA含量關(guān)系分析

        大三陽患者HBV-DNA含量相較其他表現(xiàn)患者更高(p<0.05),見表2。

        表2?乙肝免疫學(xué)表達與HBV-DNA含量關(guān)系分析

        3 討論

        乙肝病毒(HBV)是導(dǎo)致乙型肝炎的致病菌,其臨床傳染性非常強,且在發(fā)病后會逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)槁砸腋危颊咴诮?jīng)歷漫長的病程后還有極高的概率繼發(fā)肝硬化類病變,甚至誘發(fā)肝癌的幾率也要高于普通人群,而乙肝也成為了當前國際社會需共同面對的衛(wèi)生問題之一[4]。國際醫(yī)學(xué)界指出乙肝發(fā)病時間越短,其治愈的可能性相對越高,因此利用有效的檢查方式在早期對乙肝患者進行檢查和確診,有利于后續(xù)治療方案的確定,更有利于患者病情的控制。

        目前國內(nèi)針對乙肝病毒檢測的方法有很多種,例如熒光定量PCR法、ELISA法、化學(xué)熒光法、放射免疫法等,其中前兩者的使用范圍更廣,操作也相對簡便。ELISA方式的檢測速度更快,且所需成本也相對較低,檢測靈敏度和特異性均有保障,符合臨床大范圍篩查工作的需求,也是乙肝病毒檢驗最常用的手段。但這種方式僅針對的是乙肝病毒的免疫應(yīng)答狀態(tài)進行確認,而如乙肝處于潛伏期,其也不會表現(xiàn)出免疫應(yīng)答狀態(tài),因此只能用作是否感染的間接性參考指標,同時該檢查指標對于乙肝感染后的發(fā)病情況、病毒復(fù)制程度以及危險性等的定性均無法進行[5]。熒光定量PCR技術(shù)則是直接用于測量乙肝病毒的DNA量,相關(guān)數(shù)據(jù)可更直觀地表現(xiàn)出乙肝病毒的復(fù)制情況和在體內(nèi)的傳播程度,可以為后續(xù)治療方案的選擇提供明確參考。但該檢測技術(shù)無法確定處于非復(fù)制狀態(tài)下的感染情況,因此實際應(yīng)用時應(yīng)將上述兩種方法聯(lián)合使用,以確保準確率。

        參考文獻

        趙秋霞,周松偉,王莉.熒光定量PCR法檢測HBV-DNA與ELISA法乙肝免疫學(xué)指標的相關(guān)性[J].中國繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育,2016,8(25):45-47.

        李澤銳,高靜.熒光定量PCR檢測HBV-DNA與化學(xué)發(fā)光酶免疫法檢測乙型肝炎五項的相關(guān)性研究[J].中國醫(yī)藥指南,2018,16(26):161-162.

        高娟,劉靜.熒光定量PCR法與ELISA法聯(lián)合檢測乙型肝炎的臨床價值探討[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2017,25(9):29-31.

        闕金亞,余紅,劉峰.熒光定量PCR檢測HBV-DNA與ELISA方法測定乙肝五項指標相關(guān)性分析[J].系統(tǒng)醫(yī)學(xué),2018,3(16):32-33,39.

        李艷梅,江忠勇,李志強.實時熒光定量PCRHBV-DNA檢測系統(tǒng)性能驗證方法的探討[J].

        西南國防醫(yī)藥,2018,28(12):1177-1179.

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