林悅歡 胡璐萍 何慧儀 伍華玲

1 中山大學(xué)附屬江門(mén)醫(yī)院婦產(chǎn)科(江門(mén) 529100) 2 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)V州市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科(廣州 510180)

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Bcl-2、COX-2在宮頸癌新輔助化療前后的表達(dá)及臨床意義的研究

林悅歡1胡璐萍2何慧儀2伍華玲2

1 中山大學(xué)附屬江門(mén)醫(yī)院婦產(chǎn)科(江門(mén) 529100) 2 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬?gòu)V州市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科(廣州 510180)

目的 探討B(tài)cl-2、COX-2在宮頸癌新輔助化療前后表達(dá)的意義, 以及新輔助化療(NACT)對(duì)宮頸癌的近期臨床療效。方法 對(duì)32例宮頸癌患者，采集NACT治療前后的宮頸癌組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)組織中的Bcl-2及COX-2表達(dá)。結(jié)果 ①經(jīng)NACT后，治療總有效率(CR+PR)為75%，無(wú)效率(PD+SD)為25%。②宮頸癌組織中Bcl-2、COX-2的表達(dá)均出現(xiàn)明顯下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；臨床有效組中Bcl-2、COX-2的表達(dá)在NACT后出現(xiàn)顯著下降(P<0.05)，無(wú)效組中Bcl-2、COX-2的表達(dá)在NACT前后無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 Bcl-2、COX-2的表達(dá)情況對(duì)評(píng)價(jià)宮頸癌患者新輔助化療效具有肯定的臨床意義，宮頸癌行NACT后近期療效良好。

宮頸癌；Bcl-2；COX-2；新輔助化療

子宮頸癌(cervical cancer)，習(xí)稱(chēng)宮頸癌，高發(fā)年齡為50～55 a，是最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤[1]。隨著宮頸刮片篩查的廣泛使用, 近年來(lái)宮頸癌的發(fā)生率已有下降的趨勢(shì), 但仍嚴(yán)重地威脅廣大婦女的健康[2]。而且近20年來(lái)宮頸癌的發(fā)病人群愈加年輕化[3]。宮頸癌的治療常采用個(gè)性化治療方案，總原則為采用手術(shù)和放療為主、化療為輔的綜合治療。宮頸癌的化療包括新輔助化療、術(shù)后鞏固化療、中晚期姑息化療等。新輔助化療(neoadjuvant chemotherapy，NACT)是指對(duì)宮頸癌患者在手術(shù)和(或)放療前先行一定療程的化療。NACT最佳的適應(yīng)證是宮頸局部腫瘤直徑≥4 cm及局部晚期宮頸癌。2012版FIGO婦癌報(bào)告提出，對(duì)于巨塊型宮頸癌(ⅠB2/ⅡA2期)，50%～85%的患者經(jīng)過(guò)初始手術(shù)治療后需行同期放化療或輔助放療，對(duì)于腫瘤直徑超過(guò)3 cm的患者，為了最大程度降低術(shù)后放化療和聯(lián)合治療所致的并發(fā)癥，通常不推薦以手術(shù)治療作為初始治療[4]?；颊咴诮邮苁中g(shù)或放療前給予一定療程的化療，可能為患者爭(zhēng)取手術(shù)機(jī)會(huì)、增強(qiáng)手術(shù)效果，減少手術(shù)并發(fā)癥等，甚至可降低臨床分期及復(fù)發(fā)率。但并非所有宮頸癌患者對(duì)化療都能產(chǎn)生療效，對(duì)化療不敏感的宮頸癌患者實(shí)施NACT很有可能會(huì)延誤其施行根治性手術(shù)或放療的時(shí)機(jī)。因此，尋找能預(yù)測(cè)新輔助化療療效的標(biāo)志物，盡可能及早地評(píng)價(jià)新輔助化療的療效顯得極為重要。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇2013年1月—2015年12月在廣州市第一人民醫(yī)院確診為宮頸癌，同時(shí)符合新輔助化療(NACT)適應(yīng)癥的患者32例，年齡32～65 a，平均年齡(50.8±7.5)a，根據(jù)2009年FIGO分期，臨床分期為ⅠB2期13例，ⅡA2期13例，ⅡA1期6例。經(jīng)病理學(xué)檢查，鱗狀細(xì)胞癌25例，腺癌7例；中分化20例，低分化12例，無(wú)高分化病例。

1.2 檢測(cè)方法 入組病例行NACT前后行婦檢、B超、MR等檢查，測(cè)量宮頸癌病灶最大直徑與垂直橫徑值。采用免疫組化 (SP) 染色測(cè)定Bcl-2、COX-2的表達(dá)。所有標(biāo)本均采用10%的甲醛水溶液固定，常規(guī)石蠟包埋連續(xù)切片 (厚約4～6 μm)，HE 染色，一抗4 ℃ 過(guò)夜，DAB 顯色，蘇木精復(fù)染，封片。用已知的Bcl-2和COX-2陽(yáng)性的宮頸癌切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以 PBS 液代替一抗為陰性空白對(duì)照。所用試劑單克隆抗體Bcl-2、COX-2購(gòu)自北京中杉生物工程公司; SP 試劑盒購(gòu)自廣州基因公司。所有操作按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定 根據(jù)實(shí)體瘤緩解評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(RECIST)評(píng)定療效，其中CR、PR為有效，SD、PD、IR為無(wú)效。Bcl-2免疫組化染色以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性表達(dá)；COX-2免疫組化染色以胞質(zhì)內(nèi)或核膜上呈棕黃色為陽(yáng)性表達(dá)。結(jié)果采用半定量標(biāo)準(zhǔn)，即：陰性(-)：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞；弱陽(yáng)性(+)：陽(yáng)性細(xì)胞≤25%；中度陽(yáng)性(++)：陽(yáng)性細(xì)胞26%～50%；強(qiáng)陽(yáng)性(+++)：陽(yáng)性細(xì)胞>50%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 以SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。研究Bcl-2、COX-2在NACT前后的表達(dá)情況應(yīng)用秩和檢驗(yàn)；Bcl-2、COX-2在NACT前后的高表達(dá)情況、不同臨床療效的宮頸癌組織在NACT前后的Bcl-2、COX-2的表達(dá)情況及Bcl-2、COX-2在NACT前不同臨床療效的宮頸癌組織中的表達(dá)情況均應(yīng)用Fisher確切概率法檢驗(yàn)。以P<0.05則認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P≥0.05則認(rèn)為差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 NACT臨床療效 32例宮頸癌患者經(jīng)NACT后10～14天，利用婦檢、B超及MR等比較NACT前后病灶大小差異，觀察其化療療效。其中，完全緩解(CR)占9.375%(3/32)，部分緩解(PR)占65.625%(21/32)，疾病進(jìn)展(PD)占6.25%(2/32)，疾病穩(wěn)定(SD)占18.75%(6/32)。總有效率(CR+PR)為75%(24/32)，無(wú)效率(PD+SD)為25%(8/32)。

2.2 Bcl-2、COX-2在NACT前后的表達(dá)情況 32例宮頸癌患者在NACT前采用免疫組化SP方法檢測(cè)Bcl-2、COX-2表達(dá)的情況，見(jiàn)表1，應(yīng)用秩和檢驗(yàn)提示Bcl-2、COX-2在NACT前后的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。

表1 Bcl-2、COX-2在NACT前后的表達(dá)情況

中度陽(yáng)性(++)和強(qiáng)陽(yáng)性(+++)又稱(chēng)為高表達(dá)，此研究病理結(jié)果取用半定量標(biāo)準(zhǔn)，容易受主觀影響，因此研究Bcl-2及COX-2的高表達(dá)率更有利于準(zhǔn)確了解NACT前后兩因子的表達(dá)情況。Bcl-2及COX-2在NACT前后的高表達(dá)(++～+++)情況見(jiàn)表2，應(yīng)用Fisher確切概率法檢驗(yàn)提示Bcl-2、COX-2在NACT前后的高表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。

表2 Bcl-2、COX-2在NACT前后的高表達(dá)情況

2.3 不同臨床療效的宮頸癌組織在NACT前后的Bcl-2、COX-2的表達(dá)情況 32例宮頸癌患者行NACT后經(jīng)評(píng)估后有24例判定為臨床有效(CR+PR)，8例判定為臨床無(wú)效(SD+PD)。臨床有效組中Bcl-2、COX-2在NACT前后的高表達(dá)情況經(jīng)Fisher確切概率法檢驗(yàn)提示P均<0.05，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)表3)。

表3 臨床有效組中Bcl-2、COX-2在NACT前后的高表達(dá)情況

表4 臨床無(wú)效組中Bcl-2、COX-2在NACT前后的高表達(dá)情況

臨床無(wú)效組中Bcl-2、COX-2在NACT前后的高表達(dá)情況經(jīng)Fisher確切概率法檢驗(yàn)提示P均>0.05，認(rèn)為均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(見(jiàn)表4)。

2.4 NACT前Bcl-2及COX-2在不同臨床療效的宮頸癌組織中的表達(dá) 為研究Bcl-2及COX-2在預(yù)測(cè)宮頸癌新輔助化療療效敏感性及其可行性，進(jìn)一步觀察NACT前Bcl-2及COX-2在不同臨床療效的宮頸癌組織中的表達(dá)情況(見(jiàn)表5)。

Bcl-2在臨床有效組66.67%呈高表達(dá)(16/24)，臨床無(wú)效組62.50%(5/8),有效組高表達(dá)率略高于無(wú)效組，經(jīng)Fisher確切概率法檢驗(yàn)提示P>0.05，認(rèn)為差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

COX-2在臨床有效組79.17%呈高表達(dá)(19/24)，臨床無(wú)效組87.50%(7/8)，無(wú)效組高表達(dá)率略高于有效組，經(jīng)Fisher確切概率法檢驗(yàn)提示P>0.05。

表5 NACT前Bcl-2及COX-2在不同臨床療效的宮頸癌組織中的表達(dá)

3 討 論

3.1 新輔助化療的臨床療效 本研究中32例宮頸癌患者經(jīng)NACT后10～14天，利用婦檢、B超及MR等觀察其化療療效，根據(jù)實(shí)體瘤緩解評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(RECIST)得出總有效率(CR+PR)為75%(24/32)，其中3例為完全緩解(CR)，肉眼見(jiàn)腫瘤形態(tài)完全消失，1例術(shù)后常規(guī)病理檢查未見(jiàn)癌組織殘留。32例患者中30例在NACT后成功行廣泛性全子宮切除+盆腹腔淋巴清掃術(shù)和腹主動(dòng)脈旁淋巴結(jié)取樣，術(shù)中發(fā)現(xiàn)腫瘤體積減小利于手術(shù)的進(jìn)行，且栓塞術(shù)使腫瘤周?chē)M織變軟、松動(dòng)，有利于縮短手術(shù)時(shí)間，減少術(shù)中出血。

3.2 Bcl-2、COX-2在宮頸癌NACT前后的表達(dá)意義 目前認(rèn)為Bcl-2基因蛋白在宮頸癌、消化道癌、乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、前列腺癌、肝癌、胃癌、鼻咽癌、舌癌、口腔癌等癌癥細(xì)胞中表達(dá)水平都有顯著升高。本課題組曾應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)宮頸上皮內(nèi)廇變(Cervical intraepithelial neoplasia, CIN)組織和宮頸癌組織中的Bcl-2蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在宮頸炎→CINⅠ→CINⅡ-CINⅢ →宮頸癌發(fā)展過(guò)程中表達(dá)率呈逐漸上升趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[5]，驗(yàn)證了Bcl-2的高表達(dá)在宮頸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用。這與Zhou[6]、朱華[7]、Protrka[8]研究結(jié)果基本一致。

COX-2在結(jié)直腸癌、胃癌、非小細(xì)胞肺癌、食管癌等惡性腫瘤呈高表達(dá)[9-10]，主要是通過(guò)抑制凋亡、促進(jìn)細(xì)胞增殖和促進(jìn)血管形成等機(jī)制參與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[11]，并可能促進(jìn)腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[12]。本課題組也曾對(duì)各種宮頸組織中COX-2的表達(dá)情況進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)COX-2蛋白的高表達(dá)率在宮頸癌發(fā)展階段呈上升趨勢(shì)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.003)[5]，因此認(rèn)為COX-2的高表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。

Bcl-2、COX-2在入組的32例宮頸癌組織中均有一定程度的表達(dá)，且在新輔助化療前后的表達(dá)有顯著的差異(P均<0.05)。經(jīng)NACT后Bcl-2的表達(dá)明顯下降，說(shuō)明NACT可能通過(guò)抑制Bcl-2的表達(dá)從而誘導(dǎo)宮頸癌細(xì)胞加快進(jìn)入細(xì)胞凋亡途徑，達(dá)到殺傷癌細(xì)胞及抑制宮頸癌進(jìn)展的治療目的。COX-2的表達(dá)在NACT后明顯低于NACT前，說(shuō)明NACT后宮頸癌組織細(xì)胞的增殖活性出現(xiàn)了明顯下降，化療藥物抑制了癌細(xì)胞的增殖活性。

課題組還比較了不同臨床療效中NACT前后的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)臨床有效組(CR+PR)中Bcl-2與COX-2的表達(dá)有明顯下降，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而臨床無(wú)效組(SD+PD)在NACT前后Bcl-2與COX-2的表達(dá)無(wú)明顯差異。由此我們認(rèn)為Bcl-2與COX-2的表達(dá)情況與新輔助化療療效有關(guān)，宮頸癌組織局部相對(duì)高濃度的化療藥物可能通過(guò)抑制Bcl-2與COX-2的表達(dá)從而增加腫瘤細(xì)胞的凋亡，減少腫瘤血管的生成，縮小局部腫瘤的體積，增加了手術(shù)的機(jī)會(huì)。因此我們認(rèn)為Bcl-2與COX-2有可能成為NACT療效的評(píng)價(jià)指標(biāo)。綜上所述，檢測(cè)新輔助化療前后Bcl-2與COX-2的表達(dá)對(duì)評(píng)價(jià)宮頸癌患者NACT效果有肯定的臨床意義。雖然，到目前臨床常用的療效評(píng)價(jià)是觀察新輔助化療前后腫瘤體積大小的變化，但如果將Bcl-2與COX-2作為細(xì)胞標(biāo)志物應(yīng)用于臨床療效評(píng)估，將會(huì)更加準(zhǔn)確。

3.3 Bcl-2及COX-2在預(yù)測(cè)宮頸癌新輔助化療療效敏感性及其可行性 研究中新輔助化療的有效率達(dá)75%，初步肯定了其療效，并認(rèn)為NACT可以縮小局部腫瘤的體積，有利于根治性手術(shù)的進(jìn)行，也可能起到控制亞臨床轉(zhuǎn)移的作用。但是，并非所有宮頸癌患者對(duì)化療都能產(chǎn)生療效，對(duì)化療不敏感的宮頸癌患者實(shí)施NACT很有可能會(huì)延誤其施行根治性手術(shù)或放療的時(shí)機(jī)。因此，尋找能預(yù)測(cè)新輔助化療療效的標(biāo)志物，盡可能及早地評(píng)價(jià)新輔助化療的療效顯得極為重要。有研究表示，Bcl-2的表達(dá)在多種腫瘤(如淋巴瘤、前列腺癌、大腸癌等)中與腫瘤細(xì)胞對(duì)化療耐受和敏感性有關(guān)[13-15]。但Bcl-2的表達(dá)與宮頸癌NACT療效之間的研究尚少，其對(duì)宮頸癌的化療是否有影響，這還需要我們進(jìn)一步拓展研究。有研究認(rèn)為COX-2能較好地預(yù)測(cè)宮頸癌患者行NACT及手術(shù)治療的臨床結(jié)局。Nagai[16]于2003年提出認(rèn)為COX-2的過(guò)度表達(dá)與宮頸癌新輔助化療中腫瘤細(xì)胞凋亡有關(guān)。Ferrandina等[17]于2004年對(duì)175例宮頸癌組織用免疫組化方法檢測(cè)腫瘤與間質(zhì)中的COX-2的表達(dá)比值，發(fā)現(xiàn)NACT無(wú)反應(yīng)者較部分反應(yīng)和完全反應(yīng)者比值高(P<0.05)，并認(rèn)為腫瘤與間質(zhì)中COX-2的比值是化療療效的獨(dú)立預(yù)后因素(P<0.05)。本研究檢測(cè)NACT前后Bcl-2與COX-2的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討兩者行NACT前在臨床有效組與無(wú)效組的表達(dá)差異，試圖能找到預(yù)測(cè)NACT敏感性的標(biāo)記物，指導(dǎo)臨床上宮頸癌的新輔助化療。比較在新輔助化療前臨床有效組與無(wú)效組中Bcl-2、COX-2的表達(dá)差異，提示均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此認(rèn)為Bcl-2與COX-2不能作為標(biāo)記物預(yù)測(cè)NACT的療效。但是，因?yàn)楸狙芯恐袑?shí)驗(yàn)病例數(shù)少，實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用的是陽(yáng)性表達(dá)分級(jí)的方法導(dǎo)致結(jié)果有偏差。我們將會(huì)在后期的研究中進(jìn)一步擴(kuò)大臨床病例數(shù)并且延長(zhǎng)觀察時(shí)間，得出更準(zhǔn)確的結(jié)論。

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A study of the expression and clinical significance of the Bcl-2 and COX-2 in cervical cancer before and after neoadjuvant chemotherapy

Lin Yuehuan.

Department of Obstetrics and Gynecology,Jiangmen Hospital Affiliated to Sun Yat-sen University,Jiangmen 529100, China

Hu Luping，He Huiyi,Wu Hualing.

Department of Obstetrics and Gynecology, First People’s Hospital of Guangzhou Affiliated to Guangzhou Medical University,Guangzhou 510180, China

Objective To investigate the expression of Bcl-2 and COX-2 in cervical cancer before and after neoadjuvant chemotherapy; To evaluate the efficacy of neoadjuvant chemotherapy(NACT) for cervical cancer in the recent clinical effects. Methods To select 32 cases of patients with cervical cancer, collect the cervical cancer tissues before and after NACT, immunohistochemical SP method was used to detect the expression of Bcl-2and COX-2 in the tissues. Results After neoadjuvant chemotherapy, total effective rate (CR+PR) was 75%(24/32), inefficient rate(PD+SD) was 25%(8/32). The expression of Bcl-2 and COX-2 of cervical cancer patients who had neoadjuvant chemotherapy (NACT), before and after, had great differences. The difference had statistical significance (P<0.05); The expression of Bcl-2 and COX-2 were significantly lower after neoadjuvant chemotherapy in clinical effective group(P<0.05), there is no statistical significance in clinical non-effective group(P>0.05). Conclusion The expression of Bcl-2 and COX-2 of cervical cancer patients has certain clinical significance in evaluating the effect of neoadjuvant chemotherapy in cervical cancer patients. Recent curative effect after NACT in the cervical cancer patients is good.

Cervical cancer; B-cell lymphoma/leukemia-2(Bcl-2); Cyclooxygenase-2(COX-2); Neoadjuvant chemotherapy(NACT)

廣東省科技計(jì)劃項(xiàng)目(2012B031800328)

何慧儀， E-mail：winniehhy2010@qq.com

10.3969/j.issn.1000-8535.2016.06.002

2016- 09-21)