鈕曉紅，卞勇，蔣寶平，許立*

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬南京市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇 南京 210014；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210023)

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澤及流浸膏對大鼠長期毒性研究

鈕曉紅1，卞勇2，蔣寶平2，許立2*

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬南京市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院，江蘇 南京 210014；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210023)

目的：觀察連續(xù)外用澤及流浸膏對大鼠的長期毒性。方法：SD大鼠隨機分為澤及流浸膏9.50 g/kg、4.75 g/kg、2.38 g/kg三個劑量組和對照組，每組30只。制備破損皮膚后連續(xù)給藥3個月，停藥后恢復(fù)1個月。分別于給藥及恢復(fù)期結(jié)束后，進行一般狀況、體質(zhì)量、飼料攝入量、血液學(xué)、血液生化學(xué)、尸體解剖和臟器病理組織學(xué)檢查。結(jié)果：各組受試動物一般狀況良好，外觀、行為、排泄物等方面均未見異常變化。體重增長及攝食量與對照組比較無明顯差異(P>0.05)。血常規(guī)、凝血四項、血液生化各指標(biāo)未見與藥物相關(guān)的明顯異常。尸檢及病理組織學(xué)各臟器未見異常。結(jié)論：澤及流浸膏破損皮膚外用對大鼠無明顯毒性作用。

澤及流浸膏；SD大鼠；長期毒性研究

結(jié)核性竇道多為淋巴結(jié)核(瘰疬)或骨結(jié)核(流痰)特異性感染后，引流不暢或殘留壞死組織，潛在死腔、膿水淋漓不盡，經(jīng)久難愈所致。已破潰者需引流和換藥，但所用藥物種類頗多，療效往往不夠確切，容易貽誤治療時機，因此需要有科學(xué)的證據(jù)使治療進一步規(guī)范化[1]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為結(jié)核性竇道形成竇道和纏綿難愈的根本原因是由于“腐”“毒”“瘀”的存在。因此，中醫(yī)治療常采用“袪腐化瘀、解毒生新”基本外治法，通過中藥竇道灌注，促進創(chuàng)面腐爛壞死組織脫落，或?qū)⑵淝逑∧撘恨D(zhuǎn)化成濃稠膿液，促進創(chuàng)面愈合。

澤及流浸膏由澤漆、白芨等組成的中藥復(fù)方外治藥，具有提膿祛腐、解毒活血、生肌收斂等功效，為南京市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院臨床經(jīng)驗方，經(jīng)多年臨床應(yīng)用觀察，該藥對潰瘍?nèi)站?，腐肉難脫，新肉不長，久不收口之結(jié)核性竇道具有良好療效[2]。為進一步在臨床推廣應(yīng)用該驗方，本研究對該膏藥進行了皮膚給藥的長期毒性觀察，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 受試藥

澤及流浸膏，褐色浸膏，4.37 g/ml。人臨床用量：1.9 g/ml，5 ml/60 kg。南京市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院提供，批號14121501。

1.2 動物

清潔級SD大鼠，體質(zhì)量80～100 g，雌雄各半，由浙江省實驗動物中心提供。合格證：SCXK(浙)2014-0001。動物檢疫后飼養(yǎng)觀察1周后開始試驗。給藥前后，動物自由飲水飲食，室溫20～25℃，每天人工光照12 h，室內(nèi)通風(fēng)良好，實驗室相對濕度：60%～70%。

1.3 儀器

日立7100型全自動生化分析儀；SIEMENS ADVIA 2120i血液分析儀；Stago STA Compact全自動血凝儀。

1.4 動物分組及劑量設(shè)計[3-4]

將大鼠隨機分為澤及流浸膏高、中、低劑量組和對照組，每組30只。其中三個劑量分別為12.67 g/kg、6.33 g/kg、3.17 g/kg，相當(dāng)于人臨床給藥量的80、40、20倍;對照組為生理鹽水。

1.5 破損皮膚制備及給藥

試驗前各組大鼠背部脊柱兩側(cè)剃毛，面積約4 cm×4 cm，用針頭在剃毛區(qū)皮膚劃井字，深淺以滲血為度，造成破損皮膚。試驗期間動物被毛長出后，重新進行脫毛和破損皮膚處理。各組大鼠按5 ml/kg將相應(yīng)浸膏均勻涂抹于脫毛區(qū)，涂藥后用無菌紗布加以固定，第2天用生理鹽水洗去后重新涂藥、固定;對照組涂以生理鹽水。每天1次，連續(xù)3個月。

1.6 觀察方法

大鼠分籠飼養(yǎng)，每籠5只。試驗期間每天觀察各組大鼠外觀、行為體征、活動、精神狀態(tài)、進食、糞便及尿液等情況。每周稱體質(zhì)量1次，稱量每籠攝取飼料量。如發(fā)現(xiàn)死亡或瀕死者及時尸檢。給藥結(jié)束后每組剖殺20只動物(雌雄各半)，進行指標(biāo)觀察，其余繼續(xù)進行1個月的恢復(fù)期觀察。

1.7 檢測指標(biāo)

給藥3個月及恢復(fù)1個月后，將大鼠10%水合氯醛麻醉，頸總動脈取血作血液學(xué)檢查、凝血四項及血液生化指標(biāo)測定。頸椎脫臼處死并解剖大鼠，作主要臟器的肉眼觀察，取心、肝、脾、肺、腎臟等主要臟器重量，計算臟器系數(shù)，并對給藥部位皮膚和所有臟器進行組織學(xué)檢查。

1.8 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 一般狀況

整個給藥期間，澤及流浸膏三個劑量組及對照組大鼠健康狀況良好，行為、排泄物等方面均未見異常變化。澤及流浸膏三個劑量組給藥后大鼠體重增長、攝食量正常，與對照組比較無明顯異常。

2.2 對大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響

血常規(guī)實驗檢查結(jié)果表明,給藥3個月后，高、中、低劑量組MPV均升高,與對照組相比P<0.01；恢復(fù)期高、中、低劑量組MPV均升高，與對照組相比具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05,P<0.01)。但這些指標(biāo)的變化在本實驗室正常生理值范圍內(nèi)，并無生理學(xué)意義。其余指標(biāo)與對照組比較均未見有顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果見表1～2。

表1 澤及流浸膏對給藥3個月大鼠血常規(guī)的影響

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

表2 澤及流浸膏對恢復(fù)期大鼠血常規(guī)的影響

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.3 凝血指標(biāo)比較

凝血四項實驗檢查結(jié)果表明：澤及流浸膏給藥3個月，高、中、低劑量組PT降低，低劑量組APTT升高；恢復(fù)期中、低劑量組PT降低，與對照組相比有顯著性統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。但這些指標(biāo)的變化在本實驗室正常生理值范圍內(nèi)，并無生理學(xué)意義。其余指標(biāo)與對照組比較均未見有顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果見表3～4。

表3 澤芨流浸膏對給藥3個月大鼠凝血四項的影響

組別PT(s)APTT(s)TT(s)FIB(g/L)對照組16．86±0．9622．19±2．6534．89±4．022．65±0．43低劑量組15．68±0．66??29．16±3．48??35．78±2．702．86±0．46中劑量組15．76±0．64??24．07±2．57?36．19±2．832．84±0．36高劑量組16．09±0．72??23．77±1．53?39．30±2．292．93±0．83

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

表4 澤芨流浸膏對恢復(fù)期大鼠凝血四項的影響

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.4 血液生化指標(biāo)比較

血液生化指標(biāo)檢查結(jié)果表明，恢復(fù)期中、低劑量組GLU升高，與正常組大鼠比較有明顯差異(P<0.05,P<0.01)；但這些指標(biāo)的變化在本實驗室正常生理值范圍內(nèi)，并無生理學(xué)意義。其余指標(biāo)與對照組比較均未見有顯著性差異(P>0.05)。結(jié)果見表5～6。

表5 澤及流浸膏對給藥3個月大鼠血液生化的影響

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

表6 澤及流浸膏對恢復(fù)期大鼠血液生化的影響

注：與對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.5 病理組織學(xué)檢查

給藥3個月后，對照組9例肝臟可見肝細(xì)胞輕度脂肪變性，4例肺及氣管黏膜下層可見灶性炎細(xì)胞浸潤，高劑量組7例肝臟可見肝細(xì)胞輕度脂肪變性，5例肺部和4例氣管黏膜下層可見輕度炎細(xì)胞浸潤。高劑量組及對照組均出現(xiàn)肝臟肝細(xì)胞輕度脂肪變性、肺臟灶性炎細(xì)胞浸潤、氣管黏膜下層炎細(xì)胞浸潤為動物的自發(fā)性病變，并非藥物引起的不良反應(yīng)。其余臟器組織學(xué)結(jié)構(gòu)正常，未見明顯的病理學(xué)改變。停藥1個月后各組動物未查見新出現(xiàn)的遲發(fā)性病變。高劑量組及對照組均出現(xiàn)肝臟肝細(xì)胞輕度脂肪變性、肺臟灶性炎細(xì)胞浸潤、氣管黏膜下層炎細(xì)胞浸潤為動物的自發(fā)性病變，并非藥物引起的不良反應(yīng)。表明受試藥物在所設(shè)劑量下對大鼠所檢臟器無毒性作用，也未引起延遲性毒性反應(yīng)。

3 討論

澤漆，俗稱貓兒眼睛草，性味辛苦，涼，有毒。有行水消痰，殺蟲解毒功能,治瘰疬，結(jié)核性竇道?！侗忝駡D篡》記載“可治瘰疬”；江西《草藥手冊》記載“治淋巴結(jié)結(jié)核?！迸R床上常配合白芨以加強殺菌消炎生肌的作用?，F(xiàn)代藥理研究表明，對人型結(jié)核桿菌有顯著抑制作用?，F(xiàn)代研究顯示，澤漆主要含二萜酯類、黃酮類化合物，是其主要的生物活性物質(zhì)，此外，還含有三萜、甾醇、多酚類、氨基酸、天然油脂類化合物等多種成分,具有抗腫瘤、平喘止咳、抑菌等藥理活性[5]。但傳統(tǒng)記載有毒，有臨床報道顯示，澤漆鮮草乳狀汁液對皮膚、黏膜有很強的刺激性。接觸皮膚可致發(fā)紅，甚至發(fā)炎、潰爛。如誤服澤漆鮮草或乳白汁液后，口腔、食管、胃黏膜均可發(fā)炎、糜爛，有灼痛、惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉水樣便，嚴(yán)重者可致脫水，甚至出現(xiàn)酸中毒[5-6]。實驗研究顯示，澤漆乙酸乙酯萃取物對小鼠有明顯毒性，可造成心、肝、脾、肺、腎等多個臟器的損傷[7]。但是，另一方面，澤漆水煎液則安全性良好，小鼠灌胃澤漆125 g/kg亦未致死。臨床用其煎液內(nèi)服，即使劑量大至150 g/d，也末見明顯毒性反應(yīng)[6]。甚至有報道顯示，澤漆水煎液對復(fù)發(fā)性口瘡有良好療效[8]。

在本研究中，所觀察澤及流浸膏為以澤漆為主要藥物的中藥復(fù)方，考慮到臨床用于結(jié)核性竇道，因此設(shè)計觀察其長期對破損皮膚外用可能的毒性作用及其靶器官。結(jié)果顯示，該復(fù)方應(yīng)用三個月對大鼠無明顯毒性作用，動物外觀行為、活動、體重增長、血常規(guī)、血液生化等指標(biāo)與對照組比較無明顯改變，臟器器官也未見的明顯的組織學(xué)改變。此外，相關(guān)的安全性研究顯示該浸膏外用無明顯皮膚刺激性、皮膚致敏性，表明澤及流浸膏外用比較安全。

曾有學(xué)者推測，澤漆毒性成分可能不溶于水[6]，本研究中所藥浸膏為水煎劑，長期外用未見的明顯毒性，是因為水煎毒性成分未溶出，還是因為中藥復(fù)方配伍減毒，尚不得面知，值得今后進一步研究。

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Experimental Study on Long-term Toxicity of Zeji Liquid Extract on Rats

NIU Xiao-hong1,BIAN Yong2, JIANG Bao-ping2,XU Li2*

(1.NanjingIntegratedTraditionalChineseandWesternMedicineHospitalAffiliatedtoNanjingUniversityofChineseMedicine，Nanjing210014,China;2.NanjingUniversityofChineseMedicine，Nanjing210023，China)

Objective: To observe the chronic toxicity of Zeji liquid extract(ZJLE) of external application in rats. Methods: SD rats were randomly divided into a control group and ZJLE 9.50,4.75 and 2.38 g/kg groups with 30 rats in each group. The damaged skins were pasted with ZJLE for 3 months. Then the therapy was stopped for a month for recovery. The general condition, body weight, feed intake, hematology, blood chemistry, autopsy, organ coefficiency and histopathology were examined after treatment and recovery period. Results: All the rats were normal in good condition, appearance, behavior, excreta and so on. Compared with the control group, there was no significant difference in the body weight and feed intake in ZJFE groups. Moreover, the hematology, blood chemistry, autopsy, organ coefficiency and histopathology were normal. Conclusion:ZJLE of external application has no significant toxicity on rats with damaged skin.

Zeji liquid extract；SD rats；Research of long-term toxicity

2009-2014年度江蘇省中醫(yī)藥領(lǐng)軍人才培養(yǎng)項目(No.LJ200921)

鈕曉紅(1959-)，女，主任中醫(yī)師，教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要研究方向：中醫(yī)外科疾病、淋巴結(jié)核等肺外結(jié)核。

許立*(1964-)，男，博士，教授，碩士研究生導(dǎo)師，主要研究方向：中藥藥理學(xué)與毒理學(xué)。

2016-04-12

R285

A

1002-2406(2016)06-0028-03

修回日期：2016-05-10