李安全 周小微1.福建醫(yī)科大學(xué)附屬南平市第一醫(yī)院消化內(nèi)科，福建南平 353000；2.福建醫(yī)科大學(xué)附屬南平市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建南平 353000

尿素13C 呼氣試驗(yàn)與血清抗體和組織病理學(xué)在檢測(cè)幽門螺旋桿菌感染的比較

李安全 周小微
1.福建醫(yī)科大學(xué)附屬南平市第一醫(yī)院消化內(nèi)科，福建南平 353000；2.福建醫(yī)科大學(xué)附屬南平市第一醫(yī)院檢驗(yàn)科，福建南平 353000

目的 比較檢測(cè)幽門螺旋桿菌（Hp）感染不同方法的敏感性及特異性。 方法 隨機(jī)選取200例2014年5月～2015 年12 月在我院住院患者，所選中的病例同步完成病理組織學(xué)檢查、血清抗體檢查和尿素13C 呼氣試驗(yàn)檢測(cè)。病理組織學(xué)Hp陽(yáng)性為診斷標(biāo)準(zhǔn)。最后比較這三種方法的陽(yáng)性率、敏感性、特異性。結(jié)果 尿素13C呼氣試驗(yàn)、血清抗體、病理組織學(xué)三種檢測(cè)方法的陽(yáng)性率分別為81.5%，84.0%，78.5%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=1.998，P＞0.05）。尿素13C呼氣試驗(yàn)、血清抗體、病理組織學(xué)三種檢測(cè)方法的敏感性分96.97%，97.64%，95.63%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.07，P＞0.05）。尿素13C呼氣試驗(yàn)、血清抗體、病理組織學(xué)三種檢測(cè)方法的特異性分別為91.43%，93.33% ， 90.00%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=3.07，P＞0.05）。結(jié)論 尿素13C 呼氣試驗(yàn)、血清抗體、組織病理學(xué)三種不同檢查方法在檢測(cè)幽門螺旋桿菌感染差異小，但尿素13C呼氣試驗(yàn)操作簡(jiǎn)單，無(wú)侵入性損傷，無(wú)痛苦，患者容易接受，是一種較理想的幽門螺旋桿菌檢測(cè)方法。

幽門螺旋桿菌；尿素13C呼氣試驗(yàn)；病理組織學(xué)；血清抗體

幽門螺旋桿菌（helicobacter pylori，Hp）是引起很多消化道疾病的首要致病菌，如消化道潰瘍、胃癌、慢性胃炎等主要病因。因此如何快速、敏感的檢測(cè)出是否感染幽門螺旋桿菌，為進(jìn)一步對(duì)上消化道疾病的診斷、治療以及預(yù)防中具有重要意義。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)3種不同的檢測(cè)幽門螺旋桿菌感染的方法，比較各種方法敏感性、特異性，發(fā)現(xiàn)一種應(yīng)用于臨床工作中即簡(jiǎn)便又實(shí)用方法。本研究通過(guò)比較3種檢測(cè)幽門螺旋桿菌的方法，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇2014年5月～2015 年12 月在我院消化內(nèi)科住院患者200例，其中男108 例，女92 例；年齡15～88歲；平均（59.1±20.5）歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：有上腹痛、腹脹、上腹不適、早飽、食欲減退等不同消化道癥狀，胃鏡檢查及病理活檢檢查證實(shí)。其中慢性胃炎47例，胃潰瘍66例，十二指腸球部潰瘍82例，胃癌5例。所有病例均為隨機(jī)選擇，男女不限，年齡≥15歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：患口腔能產(chǎn)尿素酶疾病，1個(gè)月內(nèi)因不同原因使用具有抑制或殺幽門螺旋桿菌抗生素、鉍劑、質(zhì)子泵抑制劑。受試者均行胃鏡檢查，同時(shí)內(nèi)鏡下活檢胃黏膜組織進(jìn)行病理組織學(xué)，并在結(jié)束胃鏡檢查后行血清抗體、尿素13C呼氣試驗(yàn)檢測(cè)。

1.2材料

1.2.1口服尿素13C膠囊 半衰期為5.15h，尿排泄為主，國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)YBH06682005，H20110130，深圳市中核海得威生物科技有限公司。尿素13C呼氣試驗(yàn)藥盒（尿素13C膠囊1粒，鋁塑包裝；集氣袋2個(gè)），液閃儀。

首先：受試者應(yīng)在早上空腹時(shí)或禁食2h以上受試。其次：在貼有2個(gè)集氣袋上，受試者填好所需資料。

受試者維持正常呼吸，按以下步驟操作：（1）受試者取下集氣袋蓋帽，將氣體徐徐吹入集氣袋，當(dāng)氣充滿后，立即將集氣袋蓋帽蓋緊，這次收集的呼氣為0min呼氣。（2）受試者先服一粒尿素13C膠囊后飲80～100mL涼開水送服，靜坐。然后受試者按收集呼氣方法，呼氣收集管收集30min的呼氣，扭緊呼氣收集管蓋帽。（3）最后將收集到0、30min的集氣袋，在相應(yīng)的儀器上進(jìn)行13CO2檢測(cè)。如果呼氣袋出現(xiàn)漏氣現(xiàn)象，只需當(dāng)場(chǎng)重新吹起即可。

常用δ‰來(lái)表示測(cè)定結(jié)果，稱為千分差值

公式計(jì)算結(jié)果=δ‰（30min）-δ‰（0min）。

當(dāng)時(shí)≥4.0±0.4時(shí)，判定受試者為Hp 陽(yáng)性。

1.2.2 血清抗體 HP IgG抗體試劑盒（產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)YZB國(guó)4915-2012，國(guó)食藥監(jiān)械（準(zhǔn)）字2012第3401447號(hào)）。主要組成成分（幽門螺旋桿菌抗體檢測(cè)試劑40人份；一次性塑料吸管）。受試者在早晨空腹時(shí)靜脈血2mL，分離血清，盡量使用新鮮標(biāo)本，如無(wú)及時(shí)檢驗(yàn)2～8℃保存3d；操作方法：（1）從原裝鋁箱中取出試劑。（2）將試劑置于干凈平臺(tái)上，用塑料吸管吸取樣板，垂直滴注3滴（約100μL）無(wú)空氣氣泡的血清于試劑的加樣孔內(nèi)。（3）等紅色條帶的出現(xiàn)，結(jié)果應(yīng)在10～20min內(nèi)判讀。

結(jié)果判定。陽(yáng)性：兩條紅色條帶出現(xiàn)；陰性：僅質(zhì)控區(qū)出現(xiàn)一條紅帶。

1.2.3病理組織 首先在胃鏡下取胃竇、胃體的大小彎黏膜組織各1 塊共4塊。取得標(biāo)本浸入10%中性福爾馬林中固定12h，分別使用不同濃度乙醇、二甲苯透明組織，透明好注入石蠟包埋，在切片機(jī)切片厚度定為3μm連續(xù)切片，取適合組織，再使用甲苯胺藍(lán)法染色：（1）石蠟切片二甲苯常規(guī)脫蠟；（2）滴1%甲苯胺藍(lán)液染色5～8min；（3）接著蒸餾水洗；（4）急速分化使用95%乙醇；（5）無(wú)水乙醇脫水2min，二甲苯透明，中性樹膠封片。閱片均由指定的一位具有豐富經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)師閱片。判定標(biāo)準(zhǔn)是按照全國(guó)慢性胃炎研討會(huì)共識(shí)意見和胃及十二指腸黏膜活檢病理判定。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)錄入及統(tǒng)計(jì)分析，各組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)意義。

2　結(jié)果

2.1陽(yáng)性率比較

通過(guò)三種不同檢測(cè)方法檢測(cè)200例患者感染Hp的陽(yáng)性率結(jié)果見表1，尿素13C呼氣試驗(yàn)、血清抗體、病理組織學(xué)三種檢測(cè)方法的陽(yáng)性率分別為81.5%，84.0% ，78.5%，三種方法陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1　3種不同檢測(cè)方法所測(cè)定的結(jié)果比較

2.2敏感性和特異性比較

以病理組織及13C呼氣試驗(yàn)均陽(yáng)性判為真陽(yáng)性。Hp診斷的敏感性、特異性在三種不同方法檢測(cè)結(jié)果見表2。尿素13C呼氣試驗(yàn)、血清抗體、病理組織學(xué)三種檢測(cè)方法的敏感性分別為96.97%，97.64%，95.63%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。尿素13C呼氣試驗(yàn)、血清抗體、病理組織學(xué)三種檢測(cè)方法的特異性分別為91.43%，93.33%， 90.00%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3　討論

幽門螺旋桿菌是一種彎曲、螺旋形或S形的革蘭染色陰性微需氧桿菌。1979年澳大利亞學(xué)者Warren及Marshall[1]首次從胃黏膜分離培養(yǎng)出幽門螺桿菌，隨后發(fā)現(xiàn)消化性潰瘍和慢性胃炎的首要病因是幽門螺旋桿菌，國(guó)際癌腫研究機(jī)構(gòu)認(rèn)為幽門螺旋桿菌引起胃癌第I類致癌原[2]，十二指腸潰瘍大約90%～100%和胃潰瘍大約80%～90%存在Hp 感染，慢性胃炎患者約80%～95%的存在幽門螺桿菌感染[3]，甚至是心腦血管疾病危險(xiǎn)因素[4]。本實(shí)驗(yàn)研究表明，Hp在慢性胃炎的感染率為57.45%，胃潰瘍?yōu)?7.5%，十二指腸球部潰瘍93%，胃癌60%，除了慢性胃炎感染率較低外，其他與上述結(jié)果相似。本實(shí)驗(yàn)慢性胃炎感染Hp比較低可能與地域感染水平低有一定關(guān)系。幽門螺旋桿菌定植到胃后，首先通過(guò)細(xì)菌菌膜表面的尿素酶，尿素酶能分解尿素產(chǎn)生氨，形成氨云圍繞在菌體周圍，并能分泌不受中性粒細(xì)胞殺傷的過(guò)氧化物歧化酶和過(guò)氧化氫酶，是幽門螺旋桿菌能夠存活在人體胃內(nèi)主要原因。幽門螺旋桿菌通過(guò)黏附素，牢牢地與上皮細(xì)胞連接在一起。幽門螺旋桿菌通過(guò)胃泌素水平升高促進(jìn)胃酸分泌增加，高酸度可以使胃黏膜形成潰瘍。高胃酸通過(guò)胃的蠕動(dòng)到達(dá)十二指腸，通過(guò)的高胃酸可引起十二指腸黏膜損傷，使十二指腸黏膜變成胃上皮化生。幽門螺旋桿菌具有分泌細(xì)胞毒素、炎癥介質(zhì)、免疫、泌酸、氧化均為致病因素，參與致病因子有毒力因子、細(xì)胞因子、自由基、毒力基因等[5]。尿素酶、帶鞭毛的動(dòng)力、黏附素、超黏附因子、脂多糖、磷脂酶A 的過(guò)氧化氫酶等毒力因子[6]引起消化道疾病。因幽門螺旋桿菌可引起炎癥反應(yīng)，其中DNA 的片段轉(zhuǎn)移及其代謝產(chǎn)物對(duì)胃十二指腸黏膜的轉(zhuǎn)化等作用最終可能導(dǎo)致消化道腫瘤的發(fā)生[7]。

表2　三種方法對(duì)Hp診斷的結(jié)果比較

組織病理學(xué)檢測(cè)是通過(guò)單獨(dú)使用蘇木素和署紅即可識(shí)別組織中的幽門螺旋桿菌。組織病理學(xué)檢測(cè)是幽門螺旋桿菌檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)之一，原位熒光雜交技術(shù)可應(yīng)用于甲醛固定的活組織標(biāo)本中幽門螺旋桿菌及其耐藥性的檢測(cè)， 其敏感性為92.4%[8]。該方法受感染水平高低及“局灶”胃竇、胃體黏膜分布，同時(shí)受內(nèi)鏡醫(yī)師經(jīng)驗(yàn)臨床取材局限性，病例切片，病理診斷醫(yī)師的認(rèn)真態(tài)度及水平等多因素干擾，更多是取材過(guò)小過(guò)淺甚至活檢到壞死組織等，造成假陰性，提高陽(yáng)性率可多處活檢。有研究報(bào)道， 活檢胃竇、角切跡和胃體3 處標(biāo)本判斷Hp 感染的準(zhǔn)確率近100%[9]。組織病理學(xué)檢測(cè)與其他2種方法比較特異性、敏感性稍差，與本實(shí)驗(yàn)敏感性95.63%，特異性90%表現(xiàn)相符。比較三種方法結(jié)果顯示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。組織病理學(xué)檢測(cè)屬于有創(chuàng)檢查，不適合Hp根治后復(fù)查及普查，因此，一種新的替代金標(biāo)準(zhǔn)的方法對(duì)于臨床篩選與療效觀察非常重要[10]。

因幽門螺旋桿菌能產(chǎn)生尿素酶的特性，予受試者口服尿素13C膠囊后，胃內(nèi)幽門螺旋桿菌能產(chǎn)生尿素酶，尿素酶迅速將尿素分解為NH3和CO2，CO2經(jīng)血液進(jìn)入肺而排出體外，將排出的CO2收集后在儀器上測(cè)量，13C呼氣試驗(yàn)就是根據(jù)該原理進(jìn)行檢測(cè)Hp感染。目前國(guó)際公認(rèn)的檢測(cè)幽門螺桿菌的金標(biāo)準(zhǔn)之一是13C 尿素呼氣試驗(yàn)，它既適用于診斷也適用于對(duì)根除治療的監(jiān)測(cè)[11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果其敏感性為96.97%，特異性為91.43%，表明該實(shí)驗(yàn)確敏感性、特異性均非常高，比較三種方法結(jié)果顯示，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。特異性較敏感性稍低，不排除部分患者未漱口，口腔存在其他桿菌能產(chǎn)生尿素酶有關(guān)，同時(shí)部分患者有口服抑制Hp藥物，甚至因近期進(jìn)食含有抗生素的肉類，間接服用抗Hp藥物可能。有研究顯示，經(jīng)鼻進(jìn)行試驗(yàn)的結(jié)果可能會(huì)稍改善[12]。因13C 是穩(wěn)定性核素，不存在放射性污染，對(duì)兒童， 孕婦尤為適用[13]。同時(shí)13C呼氣試驗(yàn)又屬于無(wú)創(chuàng)性檢測(cè)，非常適合用于診斷、根治幽門螺旋桿菌后復(fù)查及健康人群普查。

血清中幽門螺旋桿菌抗體檢查具有特異性高、敏感性強(qiáng)及穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。幽門螺旋桿菌菌體表面存在多種抗原組可激發(fā)宿主的免疫應(yīng)答誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生。不同抗體種類由不同細(xì)菌的類型產(chǎn)生，分為分泌型和無(wú)分泌型，并可預(yù)測(cè)胃病的嚴(yán)重程度及耐藥性[14]。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)表明血清抗體敏感性、特異性均高，但比較三種方法結(jié)果顯示差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。但人體感染幽門螺旋桿菌后數(shù)周血中才會(huì)出現(xiàn)特異抗體， 且根除Hp后血清中抗體能夠維持6個(gè)月以上[15]。根據(jù)此特性，幽門螺旋桿菌抗體陽(yáng)性不能判斷是否存在Hp活動(dòng)性感染，同樣陰性不能排除初期的感染， 故該項(xiàng)檢查適用于流行病學(xué)的篩檢，不適用于臨床診斷。

綜上所述，侵入性檢查和非侵入性檢查是目前幽門螺旋桿菌檢查兩種方法，其中侵入性檢查主要有：活檢組織快速尿素酶試驗(yàn)、病理組織學(xué)、細(xì)菌培養(yǎng)法及血清抗體等方法；非侵入性檢查主要有：尿素13C呼氣試驗(yàn)、尿素14C 呼氣試驗(yàn)、幽門螺旋桿菌抗體及同位素示蹤法等。通過(guò)對(duì)各種方法比較，發(fā)現(xiàn)各有優(yōu)缺點(diǎn)。尿素13C呼氣試驗(yàn)既無(wú)侵入性檢查的創(chuàng)傷性及放射性損傷，同時(shí)操作較簡(jiǎn)便相對(duì)Hp抗體測(cè)定、Hp 抗原測(cè)定、同位素示蹤法。尿素13C呼氣試驗(yàn)以其無(wú)創(chuàng)傷，無(wú)放射性損傷，安全準(zhǔn)確，簡(jiǎn)便快捷，敏感性和特異性均較高等特點(diǎn)獲得相對(duì)優(yōu)勢(shì)，在臨床工作中應(yīng)用較為理想。

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Comparison of13C urea breathe test, serum antibody and histopathology in detection of Helicobacter pylori infection

LI Anquan ZHOU Xiaowei
1.Department of Gastroenterology, Nanping First Hospital Affiliated to Fujian Medical University, Nanping 353000, China; 2.Clinical Laboratory, Nanping First Hospital Affiliated to Fujian Medical University, Nanping 353000, China

Objective To compare the sensitivity and specificity of three methods in detection of helicobacter pylori (Hp) infection. Methods 200 patients admitted in our hospital from May 2014 to May 2015 were selected randomly. These patients finished simultaneously the detecting of13C urea breath test, serum antibody and histopathology. Positive result on histopathology in detecting H. Pylori was viewed as the diagnostic criteria. Finally the positive rate, sensitivity and specificity of the three tests were calculated. Results The positive rate of13C urea breath test,serum antibody and histopathology was 81.5%, 84.0% and 78.5% respectively. There was no statistically significant difference of the three tests (χ2=1.998, P＞0.05). The sensitivity of13C urea breath test, serum antibody and histopathology was 96.97%, 97.64% and 95.63% respectively. The three tests had no significant difference(χ2=3.07, P＞0.05). The specificity of13C urea breath test, serum antibody and histopathology was 91.43%, 93.33% and 90.00% respectively. No significant difference was observed in the three tests (χ2=3.07, P＞ 0.05). Conclusion There is no significant difference of the three tests in detecting H. pylori infection.13C urea breath test is a simple, noninvasive and painless test. It is an ideal tool to detect helicobacter pylori.

Helicobacter pylori;13C urea breathe test; Histopathology; Serum antibody

R44

B

2095-0616（2016）17-208-04

（2016-03-31）