孫長杰，王曉寧，劉 冰*，李凌波

(1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院 輸血科，吉林 長春130021；2.長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司)

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抗-cE合并抗-c、抗-E抗體致新生兒溶血病的臨床研究

孫長杰1，王曉寧1，劉 冰1*，李凌波2*

(1.吉林大學(xué)第一醫(yī)院 輸血科，吉林 長春130021；2.長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司)

1 臨床資料

患兒男，1小時新生兒，因母孕29周，呼吸困難1小時入吉林大學(xué)第一醫(yī)院就診。系3胎2產(chǎn)，母孕29周，因胎盤早剝、陰道流血，加重1天，產(chǎn)程未發(fā)動剖宮產(chǎn)分娩，出生體重1.36 kg。患兒生后不久呼吸困難明顯，給予氣管插管、人工正壓通氣治療，為求進(jìn)一步治療轉(zhuǎn)入我院。入院查體：一般狀態(tài)及反應(yīng)差，皮膚略蒼白，早產(chǎn)兒外貌，胎齡評估28周，呼吸65次/分，呼吸急促，三凹征陽性，心率130次/分，四肢肌張力低。白細(xì)胞8.83×109/L，紅細(xì)胞3.41×1012/L，血紅蛋白126 g/L，紅細(xì)胞比容0.391 L/L，紅細(xì)胞分布寬度15.4%，血小板300×109/L。診斷為早產(chǎn)兒、新生兒呼吸窘迫綜合癥、極低出生體重兒，予以機(jī)械通氣等對癥治療?；純荷?2小時出現(xiàn)黃疸，總膽紅素132.3 μmol/L，直接膽紅素7.3 μmol/L，間接膽紅素125.0 μmol/L，全身黃染呈進(jìn)行性加重。經(jīng)血清學(xué)檢測證實(shí)，系由抗-cE合并抗-c、抗-E抗體引起Rh系統(tǒng)新生兒溶血病。

血型檢測及母血清不規(guī)則抗體篩查和鑒定：采用卡式法，按廠家說明書進(jìn)行操作和判讀。ABODE血型檢測卡(微柱凝膠)、Rh血型抗原檢測卡(單克隆抗體)、抗人球蛋白檢測卡由長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞、抗體篩選紅細(xì)胞、譜細(xì)胞由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)。不規(guī)則抗體鑒定將母血清采用鹽水法及卡式法抗人球蛋白試驗(yàn)分別與由10人份O型紅細(xì)胞組成的譜細(xì)胞及自身紅細(xì)胞反應(yīng)，與譜細(xì)胞中1至數(shù)人份凝集，與自身紅細(xì)胞不凝集者為抗體陽性，并根據(jù)與譜細(xì)胞的反應(yīng)格局判定抗體特異性。

新生兒溶血病直接抗人球蛋白、游離、釋放試驗(yàn)：直接抗人球蛋白、游離試驗(yàn)采用卡式法，釋放試驗(yàn)應(yīng)用酸放散方法，按說明書操作判讀?？谷饲虻鞍讬z測卡、酸放散試劑盒由長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)。新生兒溶血病三項(xiàng)試驗(yàn)陽性判斷方法參照文獻(xiàn)[1]。

吸收放散試驗(yàn)及抗體效價測定：吸收放散試驗(yàn)及抗體效價測定均按文獻(xiàn)[2]進(jìn)行。

2 結(jié)果

新生兒血型為O型，Rh血型表型DCcEe；母血型為O型，Rh表型DCCee。母血清在生理鹽水介質(zhì)中，與全部3支篩檢細(xì)胞反應(yīng)均為陰性，在卡式法抗人球蛋白試驗(yàn)中與篩檢細(xì)胞中2號、3號反應(yīng)均為陽性，與1號細(xì)胞反應(yīng)陰性，提示母血清檢出ABO系統(tǒng)外IgG類不規(guī)則抗體，篩檢細(xì)胞的1號、2號和3號Rh表型分別為DCCee、DccEE、DCcee。為確定母血清抗體特異性，用譜細(xì)胞作進(jìn)一步鑒定，母血清在生理鹽水介質(zhì)中與自身細(xì)胞及所有的譜細(xì)胞反應(yīng)均為陰性，在卡式法抗人球蛋白試驗(yàn)中，除與自身細(xì)胞及1號(Rh表型DCCee)譜細(xì)胞反應(yīng)為陰性外，其余的反應(yīng)結(jié)果均為陽性，經(jīng)分析得出母血清中可能存在抗-E、抗-c和(或)抗-cE抗體(表1)。

新生兒直接抗人球蛋白試驗(yàn)陽性，游離試驗(yàn)新生兒血清與ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞在鹽水介質(zhì)中呈陰性反應(yīng)，在卡式抗人球蛋白試驗(yàn)中與ABO標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞均呈現(xiàn)陽性反應(yīng)。酸放散方法釋放患兒紅細(xì)胞，卡式抗人球蛋白法檢測放散液，與譜細(xì)胞譜中含c和(或)E抗原的細(xì)胞反應(yīng)陽性，與母血清抗體特異性一致(表1)。

表1 母血清及新生兒抗體特異性鑒定

注：“0”代表陰性，“+”代表陽性

由于此抗體在室溫條件下于生理鹽水介質(zhì)中沒有反應(yīng)活性，且可通過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)，檢測新生兒紅細(xì)胞放散液與母血清抗體特異性一致，可判斷為IgG性質(zhì)抗體。應(yīng)用吸收放散試技術(shù)一步鑒定母血清中抗體特異性，選取O型譜系胞Rh表型為dccee和DCcEe型細(xì)胞來吸收母血清中抗體[3]，直到吸收后血清不再與譜細(xì)胞反應(yīng)為止，表明已經(jīng)完全去除了單一性存在的抗-c和抗-E抗體，再用O型DccEE型紅細(xì)胞測吸收后血清中IgG抗-cE效價為16。選取O型譜系胞Rh表型為DCCEe型紅細(xì)胞測母血清中IgG抗-E效價為256；選取O型dccee型細(xì)胞測得IgG抗-c效價為32。同樣方法測得新生兒放散液中抗體效價抗-c為16，抗-E為32，抗-cE為8。

經(jīng)上述輔助檢查，患兒補(bǔ)充臨床診斷新生兒溶血病(Rh血型不合)，給予外周動靜脈換血治療，換血血液選擇O型Rh表型DCCee(與母Rh血型同型血)[4]。換血后檢測，患兒總膽紅素97.8 μmol/L，直接膽紅素4.3 μmol/L，間接膽紅素93.5 μmol/L。患兒經(jīng)換血、丙種球蛋白輸注、光照等治療后皮膚黃染逐漸消退，血常規(guī)等指標(biāo)逐漸達(dá)正常范圍，無需呼吸支持治療，無感染表現(xiàn)，體重增長良好，好轉(zhuǎn)出院。

3 討論

2012年以來，國際輸血協(xié)會(International Society of Blood Transfusion，ISBT)新確認(rèn)了多個血型系統(tǒng)，如Forssman血型系統(tǒng)(FOR，031)、Junior血型系統(tǒng)(JR，032)、Langereis血型系統(tǒng)(LAN，033)、Vel血型系統(tǒng)(VEL，034)和CD59血型系統(tǒng)(CD59，035)，血型系統(tǒng)總數(shù)已達(dá)35個[5]。除ABO血型系統(tǒng)外，已報道有50多種不同紅細(xì)胞抗原與新生兒溶血病有關(guān)[6]。在我國，ABO系統(tǒng)以及Rh系統(tǒng)D抗原相關(guān)的新生兒溶血病報道較多，Rh系統(tǒng)除抗-D抗體外，與E、c抗原相關(guān)的抗-E、抗c及抗-cE復(fù)合抗體均能引起新生兒溶血病，并在臨床上造成嚴(yán)重后果[7-9]。

Rh系統(tǒng)新生兒溶血病是由于Rh陽性的胎兒免疫Rh陰性的母親所致，再次妊娠時致敏母體產(chǎn)生的抗體經(jīng)胎盤傳播，結(jié)合胎兒Rh陽性紅細(xì)胞表面，導(dǎo)致新生兒溶血、貧血、水腫及嚴(yán)重的新生兒黃疸[10]。本例患兒母親系3胎2產(chǎn)，有妊娠史，且Rh表型為DCCee，與患兒E、c抗原不合，具備發(fā)生新生兒溶血病的條件，患兒生后12小時內(nèi)出現(xiàn)黃疸，呈進(jìn)行性加重，膽紅素偏高，溶血三項(xiàng)試驗(yàn)均陽性，證實(shí)發(fā)生新生兒溶血病。大約1%的孕產(chǎn)婦體內(nèi)有臨床有意義的紅細(xì)胞抗體，當(dāng)抗體篩檢為陽性時，應(yīng)進(jìn)一步鑒定抗體的特異性，并確定是否具有臨床意義[11]。本例母血清檢出ABO系統(tǒng)外具有臨床意義的IgG類不規(guī)則抗體，并與患兒紅細(xì)胞放散液中抗體特異性一致，分析得出母血清中可能存在抗-E、抗-c和(或)抗-cE抗體。國外報道，IgG類抗-c、抗-E均是導(dǎo)致嚴(yán)重Rh系統(tǒng)新生兒溶血病的常見抗體[12,13]，而經(jīng)妊娠引起免疫后，非但產(chǎn)生單一特異性抗體，也可以產(chǎn)生復(fù)合抗體，抗-cE復(fù)合抗體由Keith等人于1965年首次發(fā)現(xiàn)[14]，亦可引起嚴(yán)重的新生兒溶血病[15]。血清中存在的復(fù)合及混合抗體給抗體鑒定帶來復(fù)雜性，抗-cE相應(yīng)的復(fù)合抗原存在于一條染色體的單倍體上，即所謂順位，該抗體只和Rh單倍型中的DcE、dcE反應(yīng)，而和其他單倍型不反應(yīng)[3,9]。如果同時存在單一性抗體和復(fù)合抗體時，必須先把單一性抗體吸盡，在本例血清(放散液)中同時存在抗-c，抗-E及抗-cE，先用dccee及DCcEe紅細(xì)胞吸收，去除血清(放散液)中單一性抗-c及抗-E抗體，再以DccEE紅細(xì)胞檢測，成功測得復(fù)合抗體抗-cE效價，亦通過試驗(yàn)證實(shí)了本例患兒是由抗-cE復(fù)合抗體合并抗-E、抗-c混合抗體導(dǎo)致的新生兒溶血病，并選擇與母Rh血型同型血(O型Rh表型DCCee)對患兒進(jìn)行換血治療，取得了良好效果。

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吉林省科技廳重點(diǎn)科技成果轉(zhuǎn)化項(xiàng)目(20150307011YY)

1007-4287(2016)11-1911-03

孫長杰，男，53歲，主管技師，研究方向：血液血清學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)對臨床輸血安全性的影響。

2016-02-18)

*共同通訊作者