采 云

（武警北京總隊(duì)醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京100027）

·方法研究·

HbA1c在不同檢測系統(tǒng)及不同儲存條件下結(jié)果的比較

采 云

（武警北京總隊(duì)醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京100027）

目的 探討全血標(biāo)本在不同溫度、存放時(shí)間及不同檢測系統(tǒng)下檢測糖化血紅蛋白（HbAlc）結(jié)果和穩(wěn)定性差異。方法 對采集的30例來自我院內(nèi)科門診體檢人群全血標(biāo)本采用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝后分裝于A、B、C、D、E五組試管中，A組立即檢測、B組在4～8℃下冷藏1d后檢測、C組在4～8℃下冷藏10d后檢測、D組在-20℃下冷藏1d后檢測、E組在-20℃下冷藏10d后檢測，檢測系統(tǒng)分別為：Bio-Rad variant II Turbo HbAlc檢測儀、Primus Ultra2HbAlc檢測儀、Roche Modular PPI全自動(dòng)生化檢測儀。結(jié)果 在同一種種檢測系統(tǒng)下，A組立即檢測結(jié)果與B組全血樣本在4～8℃下冷藏1d后檢測結(jié)果比較差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在同一種檢測系統(tǒng)下，C組樣本在4～8℃下冷藏10d后檢測、D組樣本在-20℃下冷藏1d后檢測、E組樣本在-20℃下冷藏10d后檢測結(jié)果與A組檢測結(jié)果差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。在同一種種檢測系統(tǒng)下，隨著存放時(shí)間、存放溫度的變化（B、C、D、E組），檢測結(jié)果的CV值均高于A組。在同一溫度下、存放時(shí)間條件下，Roche Modular PPI檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果的CV值最小。結(jié)論 溫度和放置時(shí)間會(huì)對全血標(biāo)本糖化血紅蛋白（HbAlc）結(jié)果和穩(wěn)定性造成影響，Roche Modular PPI檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果的穩(wěn)定性相對較好。

全血標(biāo)本； 不同溫度； 存放時(shí)間； 檢測系統(tǒng)； 糖化血紅蛋白

現(xiàn)如今，糖尿病的發(fā)病率日益升高，已成為危害人類健康的一大頑疾［1］。在臨床中，常規(guī)評價(jià)糖尿病診療和并發(fā)癥控制效果的標(biāo)準(zhǔn)為糖化血紅蛋白A1c（glycosylated hemoglobin A1c，HbA1c），通過降低其血清內(nèi)濃度可顯著減少糖尿病患者出現(xiàn)大血管和微血管類疾病的概率［2］，且其表達(dá)水平的變化和患者預(yù)后具有密切相關(guān)性，因此尋找特異性高的HbA1c檢測方法對提高糖尿病診斷及評價(jià)治療效果的準(zhǔn)確率具有極其重要的意義［3］。目前，在我國醫(yī)院中，尚無有統(tǒng)一檢測HbA1c標(biāo)準(zhǔn)及方法，且檢測方法紛繁復(fù)雜，錯(cuò)誤率較高［4］，同時(shí)溫度、存放時(shí)間及檢測系統(tǒng)均可致HbA1c檢測結(jié)果出現(xiàn)差異，本研究通過利用不同檢測系統(tǒng)測定不同溫度及存放時(shí)間下HbAlc，以分析各檢測結(jié)果和穩(wěn)定性差異，探討標(biāo)準(zhǔn)化HbA1c檢測方法的可能性。

材料與方法

1 全血樣本采集

選取2016年2月期間來我院內(nèi)科體檢人群30例。其中男性18例，女性12例；年齡為19～42歲，平均年齡為31.7±12.6歲?；颊哂谇宄靠崭辜安秃?h各取5份4mL靜脈血樣本，注入乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝試管中。

2 檢測系統(tǒng)

Bio-Rad variantII Turbo HbAlc檢測儀，配套試劑批號：AA00618NU，400次測試后換防護(hù)柱，2000次測試后換分析柱，且更換柱子后應(yīng)做活化定標(biāo)。Primus Ultra2HbAlc檢測儀及配套試劑、分析柱。校準(zhǔn)品及質(zhì)控品購自Bio-Rad公司，需按照系統(tǒng)說明書反轉(zhuǎn)更換柱子，并定期清洗試劑酶樣品。Roche Modular PPI全自動(dòng)生化檢測儀及配套測定試劑、校準(zhǔn)品及質(zhì)控品均購自Roche公司。三種檢測系統(tǒng)均采用標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行校對后應(yīng)用，檢測結(jié)果的一致性達(dá)到98%。

3 實(shí)驗(yàn)操作方法

使用Bio-Rad variantⅡTurbo糖化血紅蛋白檢測儀以陽離子交換高效液相色譜法（HPLC）、使用Primus Ultra2HbAlc檢測儀以親和層析HPLC法及使用Roche Modular PPI全自動(dòng)生化檢測儀以免疫抑制比濁法測定5組全血樣本內(nèi)HbAlc。其中A組樣本制備后即檢測，B組4～8℃冷藏1d后檢測，C在4～8℃冷藏10d后檢測，D組-20℃冷藏1d后檢測，E組-20℃冷藏10d后檢測。

4 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)美國糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃（National Glycohemoglobin Standardization Program，NGSP）儲存校準(zhǔn)品及質(zhì)控品的穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行全血樣本的穩(wěn)定性評價(jià)。NGSP規(guī)定：HbA1c測定結(jié)果以-70℃或更低溫度±3s為可接受范圍，在±3s范圍內(nèi)結(jié)果穩(wěn)定，否則為不穩(wěn)定。

5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析及統(tǒng)計(jì)在專業(yè)軟件SAS9.0軟件包中處理，HbAlc檢測結(jié)果采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示；多間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；檢測結(jié)果穩(wěn)定性采用變異系數(shù)（CV）值表示［5］，CV=s/x。P＜0.05表示兩組指標(biāo)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 在不同溫度下、不同存放時(shí)間及不同檢測系統(tǒng)下檢測結(jié)果的差異性分析

三種檢測系統(tǒng)下，A、B、C、D、E五組標(biāo)本檢測出的HbAlc結(jié)果進(jìn)行比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

在同一種檢測系統(tǒng)下，A組立即檢測結(jié)果與B組全血樣本在4～8℃下冷藏1d后檢測結(jié)果比較差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

在同一種檢測系統(tǒng)下，C組樣本在4～8℃下冷藏10d后檢測、D組樣本在-20℃下冷藏1d后檢測、E組樣本在-20℃下冷藏10d后檢測結(jié)果與A組檢測結(jié)果差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 不同溫度下、不同存放時(shí)間及不同檢測系統(tǒng)下檢測結(jié)果的差異性分析（±s）

表1 不同溫度下、不同存放時(shí)間及不同檢測系統(tǒng)下檢測結(jié)果的差異性分析（±s）

注：與Bio-Rad variant II Turbo系統(tǒng)結(jié)果比較，*P＜0.05；與Primus Ultra2系統(tǒng)結(jié)果比較，#P＜0.05；與同一檢測系統(tǒng)下A組結(jié)果比較，▲P＜0.05

檢測系統(tǒng)A組B組C組D組E組Bio-Rad variant II Turbo5.22±0.155.27±0.185.38±0.21▲5.44±0.25▲5.48±0.26▲Primus Ultra25.32±0.14*5.38±0.16*5.49±0.20*▲5.57±0.23*▲5.60±0.25*▲Roche Modular PPI5.47±0.14*#5.49±0.15*#5.59±0.22*#▲5.68±0.23*#▲5.72±0.23*#▲F值7.0937.4847.8307.7427.096 P值0.0260.0220.0180.0200.025

2 在不同溫度下、不同存放時(shí)間下不同檢測系統(tǒng)下檢測結(jié)果的穩(wěn)定性比較

三種檢測系統(tǒng)下，A、B、C、D、E五組標(biāo)本檢測出的HbAlc結(jié)果的變異系數(shù)（CV）見表2、圖1。

在同一種種檢測系統(tǒng)下，隨著存放時(shí)間、存放溫度的變化（B、C、D、E組），檢測結(jié)果的CV值均高于A組，見表2。

在同一溫度下、存放時(shí)間條件下，Roche Modular PPI檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果的CV值均小于Bio-Rad variant II Turbo系統(tǒng)、Primus Ultra2，Primus Ultra2檢測結(jié)果的CV值均小于Bio-Rad variant II Turbo系統(tǒng)。見表2。

表2 在不同溫度下、不同存放時(shí)間下不同檢測系統(tǒng)下檢測結(jié)果的穩(wěn)定性比較（%）

討 論

臨床研究顯示［6］，糖化血紅蛋白水平能夠反映人體3個(gè)月內(nèi)血糖狀態(tài)，而且不會(huì)受到短期血糖濃度波動(dòng)影響，因此HbA1c檢測已成為一些國家診斷及評價(jià)糖尿患者病情狀況或發(fā)展的“金標(biāo)準(zhǔn)”。然而在我國，HbA1c的檢測方法眾多，且結(jié)果差異性較大，故其仍未被廣大醫(yī)療結(jié)構(gòu)接納為診斷糖尿病標(biāo)準(zhǔn)［7］，僅作為一項(xiàng)輔助檢查指標(biāo)。隨著我國醫(yī)學(xué)檢測標(biāo)準(zhǔn)化進(jìn)程的不斷推進(jìn)，關(guān)于HbA1c檢測的統(tǒng)一化標(biāo)準(zhǔn)也在逐步制定中，且呈現(xiàn)檢測方法及各項(xiàng)指標(biāo)逐一清晰化、制度化的態(tài)勢，我們認(rèn)為其必將在不久以后成為我國診斷糖尿病的通行標(biāo)準(zhǔn)之一。

研究顯示，要想樹立HbA1c檢測的科學(xué)標(biāo)準(zhǔn)，首先要保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，這就需要對其實(shí)驗(yàn)步驟和檢測系統(tǒng)的穩(wěn)定性進(jìn)行充分的掌握和把控［8］。在檢測系統(tǒng)中，我們分別選取Bio-Rad variant II Turbo HbAlc檢測儀+HPLC法、Primus Ultra2HbAlc檢測儀+親和層析HPLC法和Roche Modular PPI全自動(dòng)生化檢測儀+免疫抑制比濁法等三個(gè)常規(guī)系統(tǒng)聯(lián)合三種實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行HbA1c檢測。研究顯示，抽取的全血標(biāo)本的質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性和可靠性具有密切關(guān)系［9］，因此在對患者抽血后，應(yīng)將血液樣本及時(shí)進(jìn)行抗凝處理后冷藏，并應(yīng)盡早檢測以保證樣本的質(zhì)量符合檢測要求。目前，由于醫(yī)療糾紛的概率較高，多數(shù)醫(yī)療機(jī)構(gòu)為避免日后因檢測結(jié)果錯(cuò)誤而引發(fā)醫(yī)患糾紛，都會(huì)保存每日的檢測標(biāo)本以待復(fù)查［10］。在研究中，我們分別選取立即檢測、4～8℃下冷藏1d后檢測、4～8℃下冷藏10d后檢測、-20℃下冷藏1d后檢測和-20℃下冷藏10d后檢測五種檢測時(shí)間及冷存溫度組合對全血標(biāo)本進(jìn)行監(jiān)測，以探討不同保存時(shí)間及保存條件與HbA1c檢驗(yàn)結(jié)果間的關(guān)系。

在本研究中，在三種檢測系統(tǒng)下，A、B、C、D、E五組標(biāo)本檢測出的HbAlc結(jié)果的比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），在同一種種檢測系統(tǒng)下，A組立即檢測結(jié)果與B組全血樣本在4～8℃下冷藏1d后檢測結(jié)果比較差異不明顯，且C組樣本在4～8℃下冷藏10d后檢測、D組樣本在-20℃下冷藏1d后檢測、E組樣本在-20℃下冷藏10d后檢測結(jié)果顯著高于A組檢測結(jié)果（P＜0.05）。結(jié)果顯示，在同等實(shí)驗(yàn)方法和檢測系統(tǒng)下，抽取患者全血樣本抗凝后立即檢測c和待1d后檢測HbA1c的結(jié)果具有可比性，前提是將樣本進(jìn)行合理的冷存。有研究建議應(yīng)在獲取血樣應(yīng)先立即檢測HbAlc，但在實(shí)際條件下，由于部分醫(yī)院患者人數(shù)較多或?qū)嶒?yàn)環(huán)境制約，較難充分實(shí)現(xiàn)全部實(shí)驗(yàn)當(dāng)天抽血即可完成檢測［11］，因此我們認(rèn)為也可將4～8℃下冷藏1d血樣的HbA1c檢測結(jié)果作為選擇。在研究中，在同一種種檢測系統(tǒng)下，隨著存放時(shí)間、存放溫度的變化，B～E組的檢測結(jié)果的CV值均高于A組，且CV值呈現(xiàn)隨著冷存時(shí)間和冷存溫度升高而逐漸增大的趨勢，檢測結(jié)果穩(wěn)定性和冷存時(shí)間及冷存溫度可能存在負(fù)相關(guān)性。同時(shí)，在研究中，我們發(fā)現(xiàn)在同一溫度下、存放時(shí)間條件下Roche Modular PPI系統(tǒng)的檢測結(jié)果的CV值最小，其次為 Primus Ultra2系統(tǒng)，Bio-Rad variant II Turbo系統(tǒng)最高。結(jié)果顯示Roche Modular PPI系統(tǒng)檢測穩(wěn)定性最高，且在-20℃下冷藏10d條件下，其

CV值僅為4.37%。該系統(tǒng)高穩(wěn)定性也可能和免疫抑制比濁法，該方法根據(jù)血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)，可針對HbA1c與血液內(nèi)血紅蛋白單抗間的凝集反應(yīng)特性進(jìn)行定性檢測［12］，穩(wěn)定性較高，研究已證明，其靈敏度可精確到μL數(shù)量級，應(yīng)作為HbA1c檢測首選檢測方法。

本研究中評價(jià)了三種不同方法、不同儀器、不同濃度樣本和不同存放條件對檢測結(jié)果的干擾，結(jié)果確實(shí)存在差異。Bio-Rad variant II Turbo測定樣本常溫可穩(wěn)定7d，4℃可穩(wěn)定

14d，-30℃可穩(wěn)定35d；而親和層析HPLC不受溫度、氨基甲酰糖化血紅蛋白和胎兒血紅蛋白的干擾，結(jié)果可靠。免疫抑制比濁法是依據(jù)血紅蛋白上糖化基團(tuán)的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)而設(shè)計(jì)，原理是根據(jù)HbA 1c與相應(yīng)的單抗結(jié)合發(fā)生凝集反應(yīng)的特性，受干擾因素也較小。

綜上所述，我們認(rèn)為全血樣本的冷存溫度和放置時(shí)間與HbAlc檢測結(jié)果和穩(wěn)定性具有密切關(guān)系，研究顯示應(yīng)選取Roche Modular PPI系統(tǒng)作為檢測系統(tǒng)首選。

［1］溫冬梅，張秀明，張德才，等.Hb E變異體對5種糖化血紅蛋白檢測系統(tǒng)測定結(jié)果的干擾評價(jià).中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，37（12）：921-927.

［2］徐安平，夏勇，紀(jì)玲.血紅蛋白變異體對不同糖化血紅蛋白檢測系統(tǒng)的干擾.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，37（12）：890-892.

［3］曾潔，張傳寶，趙海建，等.應(yīng)用六西格瑪管理方法評估糖化血紅蛋白檢測系統(tǒng)性能.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，29（4）：17-20.

［4］索明環(huán)，溫冬梅，張秀明.HbA1 c在三種檢測系統(tǒng)及不同儲存條件下結(jié)果的穩(wěn)定性.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2014（8）：813-816.

［5］趙芳，張芳，邱玲，等.酶法測定糖化白蛋白的方法性能驗(yàn)證及其初步臨床應(yīng)用.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，36（4）：343-347.

［6］沈默宇，石立，葉新華.影響糖化血紅蛋白檢測系統(tǒng)的因素.醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2013，26（9）：1004-1006.

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［10］童華誠，劉慧，張美，等.三種檢測系統(tǒng)測定糖化血紅蛋白相關(guān)性分析及偏倚評估.中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)，2011，15（7）：1156-1158.

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（李 凌編輯）

Comparison of the Results of HbA1c by Different Detection Systems and Under Different Storage Conditions

CAI Yun
（Department of Clinical Laboratory，The Hospital of Wujing Beijing Command，Beijing 100027，China）

Objective To investigate the test results and the stability of glycosylated hemoglobin（HbAlc）in whole blood samples under different temperature，storage time and by different detection systems.Methods We collected 30 cases of whole blood samples with ethylene diamine tetraacetic acid dipotassium（EDTAK2）anticoagulant packaging.The samples were divided into A，B，C，D，E groups，five samples in each group.Group A was given immediate detection.Group B was refrigerated under 4-8℃ for one day before detection.Group C was stored under 4-8℃ for 10 days.Group D was stored at-20℃ freezer for one day and group E in-20℃ freezer for 10 days before detection.We used the following detection systems：Bio-Rad variant II turbo HbAlc detector，Primus ultra2 HbAlc detector and Roche modular PPI full automatic biochemical analyzer.Results Under the same detection system，the results of group A and group B had no statistical difference（P＜0.05）.Under the same detection system，the results of group C，group D and group E were significantly different than that of group A（P＜0.05）.Under the same detection system，the CV values of groups B，C，D，and E were higher than those of group A.At the same temperature and storage time，the Roche Modular PPI detection system had the minimum of the CV value.Conclusion Temperature and time will have an effect on the stability of HbAlc，Roche Modular PPI system provides relatively reliable testing results.

Whole blood sample； Different temperature； Storage time； Testing system；Glycosylated hemoglobin

10.11748/bjmy.issn.1006-1703.2016.11.030

2016-02-23；

2016-10-14