姜春麗 張延平 劉金偉 于麗玫 張晨彬

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·臨床研究·

老年性聾易感個(gè)體血清差異蛋白的篩選△

姜春麗1張延平1劉金偉1于麗玫2張晨彬3

目的 研究老年性聾(age-related hearing loss,ARHL)易感個(gè)體外周血血清蛋白質(zhì)組表達(dá)變化，篩選差異表達(dá)蛋白，建立ARHL易感個(gè)體血清蛋白指紋圖譜診斷模型。方法 選擇2015年1～11月年齡大于60歲的非耳科疾病住院患者，對(duì)符合條件的78例進(jìn)行純音測(cè)聽及填寫問(wèn)卷調(diào)查表，參照聲學(xué)聽閾與年齡關(guān)系的統(tǒng)計(jì)分布(GB/T 7582-2004/ISO 7029:2000)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)將頻率特異性聽閾轉(zhuǎn)換為Z值(Z值為在給定頻率上個(gè)體實(shí)際聽閾與中位聽閾的差異)，以Z值大于零者為易感組(52例)，Z值小于零者為非易感組(26例)，應(yīng)用弱陽(yáng)離子磁珠加MALDI-TOF MS技術(shù)，結(jié)合生物資料管理器軟件(bio explorer,BE)篩選老年性聾易感個(gè)體血清差異表達(dá)蛋白并構(gòu)建診斷模型。結(jié)果 得到顯著性差異的多肽峰共有9個(gè)，分子量分別為4 047.1、2 957.1、4 084.5、4 260.1、2 102.9、1 288、3 276、4 146.2、3 153.4 Da，其中6個(gè)上調(diào)，3個(gè)下調(diào)；選用其中2個(gè)建模效果最好的差異蛋白峰(分子量為3 276.0、3 153.4 Da)建立老年性聾易感個(gè)體血清蛋白指紋圖譜診斷模型，經(jīng)盲法驗(yàn)證，該模型的敏感度和特異度分別為68.18%、66.67%，ROC曲線下面積為0.711 823，對(duì)老年性聾易感者與非易感者有一定的識(shí)別能力。結(jié)論 本研究篩選出了ARHL差異蛋白，建立了首個(gè)ARHL易感個(gè)體血清蛋白指紋圖譜診斷模型，對(duì)老年性聾易感者與非易感者有一定的識(shí)別能力，為進(jìn)一步探討ARHL防治措施提供了數(shù)據(jù)參考。

老年性聾； 疾病易感性； 蛋白質(zhì)組學(xué)； 質(zhì)譜技術(shù)

老年性聾(presbycusis)或年齡相關(guān)性聽力損失(age-related hearing loss, ARHL)是指隨著年齡的增長(zhǎng)逐漸發(fā)生的進(jìn)行性感音神經(jīng)性聽力下降，開始時(shí)以高頻聽力下降為主，逐漸向低頻擴(kuò)展，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致全聾，是老年人最常見的感覺性損害，也是人生理性老化過(guò)程的一種表現(xiàn)。ARHL發(fā)病率高，已成為聽力殘疾的首要因素, 2007年于麗玫等[1]報(bào)道全國(guó)聽力殘疾者共2 045.41萬(wàn),其中老年性聾有1 364.49萬(wàn),占 66.87%。由于ARHL嚴(yán)重影響老年人的生活質(zhì)量，因此ARHL的防治已經(jīng)成為目前聽力學(xué)領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)問(wèn)題。

目前ARHL的發(fā)病機(jī)制還不完全清楚，但大家公認(rèn)其發(fā)病與多種因素有關(guān)，其中大約1/2與環(huán)境因素有關(guān)，另外1/2與遺傳因素有關(guān)[2]。盡管隨著年齡的增加聽覺敏感度逐漸下降，但是純音聽閾的變化在人群中有很大的差異，這種變異可以部分用遺傳易感性解釋；因此，如何判斷ARHL易感個(gè)體成為研究者關(guān)注的問(wèn)題。目前有關(guān)ARHL易感性研究很多，主要集中在基因水平的研究，不同學(xué)者使用同一方法得出的結(jié)論并不完全一致，因此，F(xiàn)ransen等[3]提出ARHL可能從本質(zhì)上是高度多基因化的，可能并不存在某個(gè)起主要作用的基因。

由于蛋白質(zhì)是人體各項(xiàng)生理功能的執(zhí)行者，基因與氨基酸并非一一對(duì)應(yīng)，因此單純基因水平的研究很難完全揭示ARHL易感性的奧秘，因此在蛋白質(zhì)和氨基酸水平進(jìn)行研究是必要的。蛋白質(zhì)組學(xué)的研究?jī)?nèi)容包括鑒定蛋白質(zhì)的表達(dá)、結(jié)構(gòu)、功能，蛋白質(zhì)的存在方式及其相互作用，蛋白質(zhì)組學(xué)的進(jìn)步提供了篩選差異蛋白的方法，有助于發(fā)現(xiàn)疾病的蛋白標(biāo)志物、建立診斷模型；因此，本研究擬應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法探討ARHL易感性的原因、篩選易感個(gè)體，首先通過(guò)Z值(Z值為在給定頻率上個(gè)體實(shí)際聽閾與中位聽閾的差異)計(jì)算的方法將對(duì)象分為易感組與對(duì)照組，然后應(yīng)用磁珠分離技術(shù)和MALDI-TOF/TOF-MS技術(shù)篩選ARHL易感個(gè)體差異表達(dá)蛋白，并利用差異蛋白峰建立易感個(gè)體血清蛋白指紋圖譜診斷模型，為ARHL易感個(gè)體的篩選提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2015年1月～11月解放軍第309醫(yī)院眼科及耳鼻喉科年齡大于60歲的非耳科疾病住院患者78例為研究對(duì)象，納入標(biāo)準(zhǔn)：①年齡大于60歲；②排除傳染病史、中耳炎性疾病史、耳毒性藥物應(yīng)用史、遺傳性聾、突發(fā)性聾、噪聲性聾病史。

所有的受試對(duì)象簽署知情同意書，實(shí)驗(yàn)方案經(jīng)解放軍第309醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 研究方法 所有對(duì)象均行全身查體、專科檢查、純音測(cè)聽檢查及問(wèn)卷調(diào)查，計(jì)算Z值，空腹抽取靜脈血，分離血清，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.1 Z值的計(jì)算方法 使用純音測(cè)聽儀(丹麥，Madsen VOYAGER 502型)于聽力檢查室對(duì)每例對(duì)象進(jìn)行純音測(cè)聽，檢測(cè)0.25～8 kHz純音氣導(dǎo)聽閾，根據(jù)文獻(xiàn)[4]報(bào)道方法，參照聲學(xué)聽閾與年齡關(guān)系的統(tǒng)計(jì)分布(GB/T 7582-2004/ISO 7029:2000)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)將頻率特異性聽閾轉(zhuǎn)換為Z值，Z值的計(jì)算公式如下：

Hmd,Y=α(Y-18)2

(1)

Su=bu+ 0.445Hmd,Y當(dāng)閾值 > Hmd,Y

(2)

Sl=bl+ 0.356Hmd,Y當(dāng)閾值 < Hmd,Y

(3)

Zf=(閾值—Hmd,Y)/ Su當(dāng)閾值 > Hmd,Y

(4)

Zf=(閾值—Hmd,Y)/ Sl當(dāng)閾值 < Hmd,Y

(5)

其中Hmd,Y指聽閾中值，md,y代表年齡的中位數(shù)，Y代表指定年齡，α指男性和女性的系數(shù)，可以在GB/T 7582—2004/ISO 7029：2000(聲學(xué) 聽閾與年齡關(guān)系的統(tǒng)計(jì)學(xué)分布)中查找。參照GB/T 7582—2004/ISO 7029：2000，得知中值以上的分布為近似標(biāo)準(zhǔn)偏差是Su的高斯分布，中值以下的分布近似標(biāo)準(zhǔn)偏差是Sl的高斯分布。上述參數(shù)bu和bl的值可在GB/T 7582—2004/ISO 7029：2000表2中查找。因ARHL患者主要表現(xiàn)為高頻聽力下降，所以在計(jì)算中多采用Z248(即2、4和8 kHz對(duì)應(yīng)的Z值的平均值即為Z248)[4,5]。按照上述計(jì)算公式，當(dāng)Z值大于0時(shí)為老年性聾易感者，Z值小于0時(shí)為老年性聾非易感者，將每個(gè)研究對(duì)象按照Z(yǔ)值從小到大進(jìn)行排序劃分老年性聾非易感組和易感組。

1.2.2 主要儀器及試劑 MALDI-TOF質(zhì)譜儀(德國(guó)Bruker公司)及自帶的BioExplorer軟件(德國(guó)Bruker公司)，磁力架(磁珠分離器)(NCBA)(德國(guó)Bruker公司)，磁珠試劑盒(SB-WCX)以及緩沖液體系(德國(guó)布魯克.道爾頓公司)。

1.2.3 血清的采集及處理 采集受試對(duì)象空腹外周靜脈血約4 ml，用臨床離心機(jī)以3 000 r/m離心7 min，立即凍存血清樣品于-80 ℃冰箱中。自4 ℃冰箱取出磁珠試劑盒，取200 μl 八連排樣品管置于孔板上，依次加入10 μl磁珠、95 μl 磁珠結(jié)合緩沖液(CB)、10 μl 血清樣本，在室溫靜置5 min，將樣品管在磁珠分離器上靜置1 min，磁珠富集到管底并貼壁，與懸浮的液體分離，吸去上清液體。將樣品放入孔板中，加入100 μl 磁珠清洗液緩沖液(CW)，靜置2 min。然后將樣品管在磁珠分離器上靜置1 min，吸去上清液體。將樣品放置于孔板上，加入10 μl磁珠洗脫液(CE)反復(fù)吸打十次以上，放置5 min，使磁珠和洗脫液混懸均勻。將樣品放于磁珠分離器上，靜置1 min ，使磁珠與懸浮液充分分離，將上清液移出到已標(biāo)記的0.2 ml 樣品管，然后進(jìn)行質(zhì)譜分析。1.3 血清質(zhì)譜分析及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用MALDI-TOF儀器進(jìn)行樣品檢測(cè)，然后再應(yīng)用生物資料管理器軟件(bio explorer,BE)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，包括：生物信息學(xué)分析、建立模型、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析、聚類分析，采用Fisher、KNN、Linear SVM、RBF 4種統(tǒng)計(jì)學(xué)算法分別計(jì)算易感組與對(duì)照組模型驗(yàn)證準(zhǔn)確率，然后使用模型驗(yàn)證組血清進(jìn)行模型的盲法驗(yàn)證，進(jìn)一步分析模型診斷的敏感度及特異度。

2 結(jié)果

2.1 易感組與非易感組的確定及其純音聽閾 根據(jù)Z值的正負(fù)排列情況，從78例中選出老年性聾易感者52例，非易感者26例。用于建模的50例中，易感組30例(實(shí)驗(yàn)組)，非易感組20例(對(duì)照組)；其余28例(易感組22例，非易感組6例)用于模型盲法驗(yàn)證。78例患者中男39例，女39例，年齡60～86歲，平均71.23±7.61歲；<70歲者32例，≥70歲者46例；52例易感者中男19例，女33例，平均年齡71.5±7.85歲；26例非易感者中男20例，女6例，平均年齡70.69±7.23歲；兩組間年齡和性別均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。因GB/T 7582-2004/ISO 7029:2000中明確說(shuō)明Z值僅適用于70歲以下人群，因此對(duì)于本組對(duì)象中年齡≥70歲的46例研究對(duì)象再使用傳統(tǒng)分組方法[6](即主要根據(jù)個(gè)體的純音聽閾)進(jìn)行驗(yàn)證。這46例按Z值法計(jì)算有30例屬于易感個(gè)體，16例屬于非易感個(gè)體，經(jīng)傳統(tǒng)分組方法驗(yàn)證30例易感個(gè)體也可歸于實(shí)驗(yàn)組，16例也可歸于對(duì)照組。

52例易感組Z值0.32～2.36,26例非易感組Z值-0.02～-2.58。52例老年性聾易感者按聽力損失程度分為輕度聽力損失31例，中度聽力損失20例，重度聽力損失1例。52例易感組左、右耳2、4、8 kHz的平均聽閾分別為57.11±15.32、57.75±15.08 dB HL，其中30例≥70歲者左、右耳純音聽閾分別為64.72±13.73、66.83±10.94 dB HL；26例非易感組左、右耳2、4、8 kHz的平均聽閾分別為32.05±13.12、32.82±11.87 dB HL，其中16例≥70歲者左、右耳平均聽閾分別為35.62±14.21、37.39±12.00 dB HL。

2.2 出峰差異顯著性統(tǒng)計(jì) 建模的50個(gè)血清多肽樣品共分析出104個(gè)峰，其中有任一樣品中峰強(qiáng)度高于300 Da的多肽峰個(gè)數(shù)為40個(gè)。應(yīng)用生物資料管理器軟件(bio explorer,BE)對(duì)易感組(實(shí)驗(yàn)組)與非易感組(對(duì)照組)的血清蛋白指紋圖譜進(jìn)行分析對(duì)比后得到出峰差異性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的有9個(gè)(P<0.05)，分子量分別為4 047.1、2 957.1、4 084.5、4 260.1、2 102.9、1 288、3 276、4 146.2、3 153.4 Da，其中6個(gè)表達(dá)上調(diào)，3個(gè)表達(dá)下調(diào)(表1)，9個(gè)差異蛋白峰中峰值圖較典型的可被關(guān)注的多肽峰峰值圖有7個(gè)。

表1 9個(gè)有差異的蛋白峰結(jié)果、平均峰面積及表達(dá)

2.3 血清蛋白指紋圖譜診斷模型建模 選取9個(gè)多肽峰中建模效果最好的兩個(gè)多肽進(jìn)行血清蛋白指紋圖譜診斷模型建模(這兩個(gè)峰對(duì)模型的識(shí)別率相對(duì)其它多肽峰要高)，其分子量分別為3 276.0、3 153.4 Da，采用Fisher、KNN、Linear SVM、RBF共4種統(tǒng)計(jì)學(xué)算法分別計(jì)算實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組模型準(zhǔn)確率，使用RBF法計(jì)算結(jié)果模型對(duì)實(shí)驗(yàn)組的判別準(zhǔn)確率可以達(dá)到96.67%，對(duì)照組的判別準(zhǔn)確率可以達(dá)到100%(表2)。二維分布圖和主成分分析結(jié)果見圖1、2，可見該模型可以識(shí)別兩組樣本中大部分質(zhì)譜數(shù)據(jù)的特性。分別以靈敏度(sensitivity)為縱坐標(biāo)，特異度(specificity)為橫坐標(biāo)繪制ROC圖，得到AUC=0.711823(ROC曲線下面積)，說(shuō)明本研究所得的診斷模型具有一定的準(zhǔn)確性(圖3)。

表2 兩組4種方法計(jì)算的模型驗(yàn)證準(zhǔn)確率(%)

2.4 盲法驗(yàn)證結(jié)果 將其余28例血清樣本進(jìn)行盲法模型驗(yàn)證，應(yīng)用Fisher法診斷ARHL的敏感度和特異度分別為50.00%、66.67%，應(yīng)用KNN診斷ARHL的敏感度和特異度分別為68.18%、50%，應(yīng)用Linear SVM診斷ARHL的敏感度和特異度分別為68.18%、66.67%，應(yīng)用RBF診斷ARHL的敏感度和特異度分別為68.18%、33.33%，說(shuō)明建立的模型對(duì)易感者與非易感者有一定的識(shí)別能力。

圖1 建模樣品分布二維圖 綠色代表實(shí)驗(yàn)組，紅色代表對(duì)照組，每個(gè)圓點(diǎn)分別代表一個(gè)樣品，橫坐標(biāo)表示在重要蛋白峰(3276.0 Da)上樣品的強(qiáng)度，縱坐標(biāo)表示在重要蛋白峰(3153.4 Da)上樣品的強(qiáng)度

圖2 建模樣品PCA圖 綠色代表實(shí)驗(yàn)組，紅色代表對(duì)照組

圖3 顯著性差異多肽峰的ROC曲線 根據(jù)2個(gè)差異峰建模ROC圖，縱坐標(biāo)為敏感度，橫坐標(biāo)為特異度

3 討論

研究易感基因，必須明確易感者，目前國(guó)內(nèi)外的相關(guān)研究主要用兩種方式來(lái)劃分ARHL易感者和非易感者，第一種是傳統(tǒng)方法[6]，依據(jù)個(gè)體的純音測(cè)聽結(jié)果，只要滿足年齡大于60歲、雙耳漸進(jìn)性聽力下降、排除其他疾病、PTA>25 dB HL即判定為ARHL易感個(gè)體，這種方法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)單、實(shí)用，因而被大多數(shù)學(xué)者采納，但不足之處是未考慮到年齡與性別因素對(duì)聽力的影響。鑒于此，又有學(xué)者研發(fā)了第二種方法，即Z值法，2004年Fransen等[5]研究了一種使用Z值來(lái)劃分ARHL易感性與非易感性的方法，即當(dāng)Z值>0時(shí)為易感者，Z值<0時(shí)為非易感者，但這種方法也存在一些問(wèn)題，在Z值計(jì)算過(guò)程中需要參考GB/T 7582—2004/ISO 7029：2000，該標(biāo)準(zhǔn)僅適用于70歲以內(nèi)的個(gè)體，而對(duì)于年齡大于70歲的老年人適用性尚不明確。本研究在參考了大量國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上，選取Z值作為易感者與非易感者的分組標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)于70歲以上老年人計(jì)算其Z值時(shí)使用的仍是GB/T 7582—2004/ISO 7029：2000中提供的系數(shù)，為了驗(yàn)證分組的準(zhǔn)確性，又使用傳統(tǒng)方法對(duì)70歲以上研究對(duì)象進(jìn)行易感和非易感的重新分組，結(jié)果提示傳統(tǒng)方法分組與Z值法一致，說(shuō)明本組70歲以上老年人分組準(zhǔn)確，GB/T 7582—2004/ISO 7029：2000中的參數(shù)可能也可以用于70歲以上人群。

目前研究蛋白質(zhì)組學(xué)的主要實(shí)驗(yàn)技術(shù)可以分為三類，一是蛋白提取，二是蛋白分離，三是蛋白鑒定。磁珠是由多種高分子骨架材料與磁性粒相結(jié)合而成，其表面積大，吸附能力超強(qiáng)，可以作為蛋白分離和提純的一種方式。其原理是試劑盒以弱陽(yáng)性離子交換原理為基礎(chǔ)，采用磁珠在高鹽低pH溶液中特異性吸附生物樣本中的蛋白質(zhì)多肽，在低鹽溶液中釋放蛋白多肽分子，從而捕獲血清中的蛋白質(zhì)多肽，可直接用于基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時(shí)間質(zhì)譜的分析。該法捕獲蛋白質(zhì)過(guò)程中損失的蛋白質(zhì)較少，具有高收率、高純、快速等優(yōu)點(diǎn)，被越來(lái)越多的學(xué)者在諸多領(lǐng)域中所應(yīng)用。本文使用弱陽(yáng)離子磁珠分離和提取蛋白，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)奠定了基礎(chǔ)。

蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)的核心是質(zhì)譜技術(shù)，MALDI-TOF-MS技術(shù)綜合了芯片技術(shù)和質(zhì)譜技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)，檢測(cè)蛋白指紋圖譜時(shí)無(wú)需純化蛋白，靈敏度及準(zhǔn)確度較高，可以同時(shí)測(cè)定多個(gè)蛋白質(zhì)；對(duì)樣本的要求也較低，可對(duì)血清、體液、尿液、細(xì)胞裂解液以及唾液進(jìn)行研究；對(duì)樣本的量需要也極少，一般情況下只需2 000個(gè)細(xì)胞或0.5～5 μl血清就足以完成。MALDI-TOF-MS技術(shù)檢測(cè)所需時(shí)間極短，只需10秒即可完成一次質(zhì)譜檢測(cè)。對(duì)于發(fā)現(xiàn)疾病生物標(biāo)志物和研究藥物代謝等方面具有重要意義，目前該技術(shù)已在卵巢癌、胃癌、乳腺癌[7]、鱗狀上皮細(xì)胞癌[8]、食管癌[9]、胰腺癌[10]、宮頸癌[11]等疾病的診斷與預(yù)后方面得到了廣泛的應(yīng)用，在耳科研究方面也具有較好的應(yīng)用前景[12～14]。

經(jīng)典蛋白質(zhì)組學(xué)研究技術(shù)2D電泳凝膠不易分辨出分子量小于4 000 Da的蛋白，而MALDI-TOF-MS技術(shù)主要研究的是小分子量蛋白，對(duì)相對(duì)分子量相差1 Da的蛋白也可分辨，對(duì)分子量是20 000以內(nèi)的蛋白質(zhì)有很好的識(shí)辨能力。因分子量為10 000至20 000的峰個(gè)數(shù)較少，本研究主要關(guān)注分子量為10 000以內(nèi)的峰，識(shí)別出的最大分子量是9291.4 Da，其中任一樣品中峰強(qiáng)度高于300 Da的多肽峰個(gè)數(shù)為40個(gè)，因此對(duì)小分子的蛋白關(guān)注度較高。

本研究首次選用弱陽(yáng)離子磁珠結(jié)合MALDI-TOF-MS技術(shù)檢測(cè)ARHL易感者與非易感者血清差異蛋白表達(dá)情況，共發(fā)現(xiàn)104個(gè)差異多肽峰，其中任一樣品中峰強(qiáng)度高于300 Da 的多肽峰個(gè)數(shù)為40個(gè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的多肽峰有9個(gè)(P<0.05)，其中6個(gè)在易感組中上調(diào)、3個(gè)下調(diào)。在9個(gè)顯著差異多肽峰中選取建模效果最好的M/Z為3 153.4 Da 和3 276.0 Da的兩個(gè)峰建模(這兩個(gè)峰對(duì)模型的識(shí)別率相對(duì)其它多肽峰要高)，應(yīng)用RBF算法計(jì)算易感組模型驗(yàn)證準(zhǔn)確度為96.67%，對(duì)照組模型驗(yàn)證準(zhǔn)確度為100.00%，應(yīng)用Linear SVM盲法驗(yàn)證結(jié)果模型的敏感度和特異度分別為68.18%、66.67%，ROC曲線下面積為0.711 823，說(shuō)明本研究所建立的ARHL診斷模型對(duì)易感者與非易感者具有一定的識(shí)別能力。

本研究首次建立了老年性聾易感個(gè)體血清蛋白指紋圖譜診斷模型，為研究ARHL的發(fā)病機(jī)制和研發(fā)篩查試劑盒提供了參考。但還存在一些不足之處，如：模型驗(yàn)證后的敏感度和特異度不高，可能與本研究中正常對(duì)照組的例數(shù)較少有關(guān)，且篩選出的9個(gè)顯著差異多肽峰均為小分子蛋白，具體結(jié)構(gòu)及功能尚不明確，需進(jìn)一步深入研究各自的氨基酸排列順序，明確各肽段對(duì)應(yīng)的蛋白；此外，技術(shù)上也可能存在血清樣品的多次凍融繼而影響質(zhì)譜圖質(zhì)量。在今后的研究中應(yīng)加大樣本量，更精確地研究ARHL易感個(gè)體的易感蛋白，提高診斷的特異度及敏感度。

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(2016-04-07收稿)

(本文編輯 李翠娥)

The Screening of the Changes of Peripheral Serum Protein Expression in Individuals with Age-related Hearing Loss

Jiang Chunli*, Zhang Yanping, Liu Jinwei, Yu Limen, Zhang Chenbin

(*Department of ENT, the 309th Hospital of PLA,Beijing,100091,China)

Objective In this study, we studied the changes of peripheral serum protein expression in ARHL susceptible individuals. The differentially expressed proteins were screened. The pathogenesis of ARHL was further explored and the susceptible individual screening strategy was studied.Methods Hospitalized patients without ear diseases from January to November 2015 were studied. Pure tone audiometry was conducted(n=78)with the Z score being calculated for each patient. The patients were divided into susceptible group (n=52) and unsusceptible one (n=26) according to the Z scores. MALDI-TOF MS combined with weak cation bead was used to screen the differential protein in the susceptible individuals with ARHL. And then the diagnostic model of serum protein fingerprint of ARHL susceptible individuals was established by BE software.Results Nine polypeptides of statistical significance were found. Their molecular weights were 4 047.1 Da, 2 957.1 Da, 4 084.5 Da, 4 260.1 Da, 2 102.9 Da, 1 288 Da, 3 276 Da, 4 146.2 Da and 3 153.4 Da, respectively. Among these protein peaks, there were 6 up regulated and 3 down regulated, which might become the biomarkers of ARHL susceptible individuals. The diagnostic model of serum protein finger print of ARHL susceptible individuals was established by using 2 differentially expressed proteins of the molecular weights of 3 276.0 Da and 3 153.4 Da. The sensitivity and specificity of the model were 68.18% and 66.67% respectively in double-blind verification test. The area under the ROC curve was 0.711 823.Conclusion The first serum protein fingerprint diagnostic model was established for ARHL susceptible individual. This study also provided

for searching better prophylactic-therapeutic measures of ARHL.

Presbycusis; Disease susceptibility; Proteomics; Mass spectrometry

△ 2013年全軍保健專項(xiàng)課題面上項(xiàng)目(13BJZ24)、總參軍事醫(yī)學(xué)與老年病科研課題重點(diǎn)項(xiàng)目(ZCWS14B07)、全軍醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究“十二五”計(jì)劃項(xiàng)目面上項(xiàng)目(CWS11C171)和北京市自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(7142155)聯(lián)合資助

姜春麗，女，河南人，在讀碩士，主要研究方向?yàn)槊@病防治。

張延平(Email:yzhan28@163.com)；于麗玫(Email:limeiyu@vip.sina.com)

10.3969/j.issn.1006-7299.2016.06.006

時(shí)間：2016-11-2 16:18

R764.43+6

A

1006-7299(2016)06-0549-05

1 解放軍第309醫(yī)院耳鼻咽喉科(北京 100091)； 2 北京市聾兒康復(fù)中心； 3 第四軍醫(yī)大學(xué)

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