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        寧鄉(xiāng)豬肉質(zhì)性狀相關(guān)氟烷基因Hal多態(tài)性研究

        2016-12-08 01:17:50姚克喜張一君馬海明
        國外畜牧學(xué)(豬與禽) 2016年11期
        關(guān)鍵詞:純合子合子寧鄉(xiāng)

        姚克喜,張一君,許 棟,馬海明

        (湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,湖南 長沙 410128)

        寧鄉(xiāng)豬肉質(zhì)性狀相關(guān)氟烷基因Hal多態(tài)性研究

        姚克喜,張一君,許 棟,馬海明

        (湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院,湖南 長沙 410128)

        為探討寧鄉(xiāng)豬肉質(zhì)相關(guān)氟烷基因(Halothane gene,Hal)遺傳多態(tài)性,利用PCR-RFLP檢測該基因Hha I位點的多態(tài)性;結(jié)果表明,在寧鄉(xiāng)豬中均只檢測到了顯性純合子HalNHalN。與之比較,在781個大白豬的樣本中檢測到雜合子HalNHaln,基因型頻率是0.003 8,但未發(fā)現(xiàn)隱性純合子HalnHaln。本研究為寧鄉(xiāng)豬肉質(zhì)性狀深入的研究打下基礎(chǔ)。

        豬;Hal基因;肉質(zhì)性狀

        寧鄉(xiāng)豬原產(chǎn)于湖南省寧鄉(xiāng)縣的流沙河及草沖一帶,原名為流沙河豬或草沖豬。寧鄉(xiāng)豬形成歷史悠久,寧鄉(xiāng)豬的特征是“絲頸葫蘆肚,耳薄嘴筒齊,稀毛現(xiàn)薄皮,魚尾后腳直,奶子一斬齊,四腳要撒蹄”,“烏云蓋雪銀頸圈”。寧鄉(xiāng)豬體型中等,體質(zhì)疏松細(xì)致,體軀呈圓筒狀,毛色為黑白花,基本色調(diào)是四肢、肋腹及頸下部為白色,頭和臀部呈黑色。

        氟烷基因(Halothane gene,Hal)是肉質(zhì)性狀的

        主效基因[1]。該基因被定位于豬的6號染色體上。氟烷基因有顯性純合子(HalNHalN)、(雜合子HalNHaln)和隱性純合子(HalnHaln)。顯性純合子和雜合子表現(xiàn)為氟烷陰性,隱性純合子表現(xiàn)為氟烷陽性,易產(chǎn)生應(yīng)激綜合征。本研究采用PCR-RFLP檢測了寧鄉(xiāng)豬Hal基因的基因頻率和基因型頻率,旨在篩選可應(yīng)用于寧鄉(xiāng)豬肉質(zhì)性狀遺傳標(biāo)記,為其保種和開發(fā)利用打下良好的基礎(chǔ)。

        1 材料與方法

        1.1 樣本采集

        68頭寧鄉(xiāng)豬耳樣采自寧鄉(xiāng)大龍畜牧科技有限公司,781頭大白豬耳樣采自正虹科技股份有限公司原種豬場。耳組織-20 ℃保存。

        1.2 豬的基因組DNA提取

        按常規(guī)酚-氯仿法提取基因組DNA[2]。

        1.3 引物合成與聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)擴增

        Hal基因引物Hha I位點PCR-RFLP的左引物為5'-TCC AGT TTG CCA CAG GTC CTA CCA-3',右引物為5'-ATT CAC CGG AGT GGA GTC TCT GAG-3'。擴增片段大小為659 bp,由上海生工生物工程公司合成。PCR擴增的Hal基因片段長度為659 bp。PCR擴增反應(yīng)體系為25 μL,包括模板Premix Taq 12.5 μL,上下游引物各5 pmol,DNA 1 μL,ddH2O補至25 μL。PCR擴增程序:94 ℃預(yù)變性5 min;94 ℃變性30 s,58 ℃退火30 s,72 ℃延伸30 s,共35個循環(huán);72 ℃后延伸10 min,最后4 ℃保存。

        1.4 PCR-RFLP檢測

        利用Hha I酶切Hal基因659 bp。酶切反應(yīng)體系為20 μL,其中PCR擴增產(chǎn)物10 μL,限制性內(nèi)切酶4 U,10×Buffer 2 μL,37 ℃(Hha I酶)酶切8 h,酶切產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測并確定基因型。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 Hal基因PCR擴增產(chǎn)物的酶切

        Hal基因659 bp的擴增產(chǎn)物被Hha I酶切為493 bp和166 bp 2條帶,基因型為HalNHalN,若不被內(nèi)切酶識別,擴增產(chǎn)物不能被酶切,只有一條659 bp的帶,即HalnHaln基因型,雜合子HalNHaln被內(nèi)切酶不完全酶切,顯示659 bp、493 bp和166 bp 3條帶。擴增產(chǎn)物經(jīng)Hha I酶切的部分電泳結(jié)果見圖1。

        2.2 基因和基因型頻率

        在寧鄉(xiāng)豬中只檢測到了氟烷基因的顯性純合子HalNHalN。Hal基因的Hha I的酶切位點上。與之比較,在781個大白豬的樣本中檢測到了氟烷基因的雜合子HalNHaln,基因型頻率是0.003 8,并未檢測到隱性純合子HalnHaln,經(jīng)Hardy-Weinberg平衡適合性檢測表明,均處于不平衡狀態(tài)。

        3 討論

        豬對氟烷敏感是由基因HalN和Haln控制,氟烷隱性純合子豬雖然容易發(fā)生應(yīng)激綜合癥,但氟烷基因雜合子豬的瘦肉率和飼料轉(zhuǎn)化率較高,生長速度較快[3,4]。我國地方豬種不含隱性氟烷基因或頻率極低[5],寧鄉(xiāng)豬只檢測到了氟烷基因的顯性純合子HalNHalN,與此相符。在大白豬中并未發(fā)現(xiàn)隱性純合子HalnHaln基因型,出現(xiàn)了極少量的雜合子HalNHaln。只含有少量雜合子,通過結(jié)合分子生物學(xué)的方法,能夠剔除掉易發(fā)生應(yīng)激綜合癥的HalnHaln基因個體,合理利用氟烷基因可提高豬種瘦肉率、飼料轉(zhuǎn)化率,提高養(yǎng)豬業(yè)的效益。□□

        (5篇,略)

        S813.1

        A

        1001-0769(2016)11-0024-02

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