馮麗霞 楊靜

含氯消毒液對全自動酶免檢測結(jié)果影響的分析

馮麗霞 楊靜

目的：驗證含氯消毒液對全自動酶免檢測結(jié)果的影響，改進實驗方法，消除影響因素。方法：控制變量法，在相同的實驗條件下使用未經(jīng)含氯消毒液處理的板架和經(jīng)含氯消毒液處理的板架比較分析，得出結(jié)論。結(jié)果：酶免試驗過程中由于各種因素的影響，均會造成結(jié)果的異常。使用含氯消毒液浸泡過的板架對ELISA方法中以TMB做底物的試驗有假陽性干擾。結(jié)論：對含氯消毒液消毒后重復使用的微板架流水沖洗干凈后用蒸餾水沖洗三次，再晾干使用可有效避免了酶免試驗過程的花板現(xiàn)象發(fā)生。

含氯消毒劑；全自動酶免；花板；分析

1 材料與方法

1.1 一般資料及設備 選用我站無償獻血者樣本。全自動酶免分析系統(tǒng)為Uranus120AE，洗板機和酶標儀均為進口配置。手工檢測所用洗板機為TECAN. COLU.MBUS，酶標儀為WellscanMK3。

1.2 消毒液 消毒片劑，生產(chǎn)商為德州安捷高科消毒制品有限公司，批號為20150102。

1.3 試劑 HBsAg（北京萬泰,批號:B20141031），抗HCV（北京萬泰,批號C20150407）HBsAg室內(nèi)質(zhì)控血清（北京康徹斯坦生物，批號:201411003），抗HCV室內(nèi)質(zhì)控血清（北京康徹斯坦生物，批號:201411003）。試劑和質(zhì)控血清均批檢合格，在有效期內(nèi)使用。

1.4 環(huán)境 采用空調(diào)和加濕器控制溫濕度，每次實驗結(jié)束后按照清潔消毒操作規(guī)程用500mg/L含氯消毒劑對實驗室操作臺及地面進行消毒，同時對當次實驗中的板架及板條流水沖洗3次后，用3000mg/L含氯消毒液浸泡90分鐘，再用流水沖洗3次，晾干備下次實驗用。

1.5 方法

1.5.1 實驗準備。準備未經(jīng)含氯消毒液處理的板架（簡稱正常板架）和使用3000mg/L含氯消毒液浸泡消毒處理過的板架（簡稱消毒板架）。

1.5.2 對照實驗。先使用消毒板架，采用全自動酶免分析系統(tǒng)與手工法進行獻血者樣本檢測。然后對花板的項目用在不更換試劑和洗液的情況下，立即使用正常板架再次上機檢測，同時手工法使用消毒板架進行檢測，膠紙封板。實驗過程中，為便于雙排洗滌，對非整條及非偶數(shù)板條給予對應補孔。（補孔板條有含氯消毒液處理與未處理兩種）操作方法按說明書進行，全自動酶免系統(tǒng)由工程師維護檢測，確保加樣、洗板等過程均未存在交叉污染。

1.5.3 控制變量消除其他干擾因素。對出現(xiàn)花板的檢測項目不更換試劑和洗液，立即使用正常板架再次檢測，全自動酶免系統(tǒng)未出現(xiàn)花板。同時用浸泡過的微板架進行手工法檢測，膠紙封板也未出現(xiàn)花板，說明未存在試劑、洗液和樣品之間的交叉污染。

1.6 統(tǒng)計處理 采用SPSS17.0軟件統(tǒng)計分析，P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 全自動酶免系統(tǒng)兩種類型板架檢測花板情況 使用消毒板架和正常架檢測同一批獻血員樣本抗HCV出現(xiàn)明顯差異，經(jīng)卡方檢驗進行統(tǒng)計分析，χ2=19.26，P＜0.05。結(jié)果見表1。

表1 全自動酶免系統(tǒng)兩種類型板架檢測花板情況

2.2 全自動酶免檢測方法HBsAg陰性對照（N）、陽性對照（P）檢測值 更換檢測項目做陰陽性對照試驗，使用兩種板架檢測HBsAg陰性對照血清樣品（N）和陽性血清樣品(P)，將所得s/co進行比對分析，陽性對照（P）：t=2.64＞2.26，P＜0.05，陰性對照（N）：t=25.64＞2.26，P＜0.05，同樣存在差異，具有統(tǒng)計學意義。見表2。

表2 全自動酶免檢測方法HBsAg陰性對照（N）、陽性對照(P)檢測值

3 討論

酶免試驗過程中由于各種因素的影響，會造成結(jié)果的異常。基層血站因檢測樣本數(shù)量少，用ELISA進行獻血者樣本檢測時，存在板架重復使用的情況，為防止實驗室感染，實驗室人員對重復使用的板架用“84”液進行浸泡消毒處理。由于氯離子是鹵素元素，化學性質(zhì)活潑，具有氧化性質(zhì)，它與酶分子中的氨基或羧基起反應，使得酶活性受到抑制[1]。不能完全催化底物顯色，致使OD值、S/CO值降低，因此使用84消毒液浸泡處理的板架進行全自動酶免檢測可使HBsA?gOD值及S/CO值降低，處于臨界值標本檢測呈假陰性這與報道一致[2]。

含氯消毒液最顯著的優(yōu)勢是殺菌效果明顯，但殺菌的同時會殘留在空氣中，并污染洗滌液。我們所用的顯色劑“B”，主要成分是四甲基聯(lián)苯胺（TMB）,而酶標記物中的酶為辣根過氧化物酶。實驗中所使用的消毒片主要成分為氯，分解后的游離氯能取代TMB上的氫，使其呈藍色[3]，全自動酶免分析系統(tǒng)出現(xiàn)花板是因板架及補孔的板條上含大量氯離子引起。手工法未出現(xiàn)花板，主要是因為孵育過程中有膠粘封板，微孔與微孔間、微孔與外界空氣之間相對隔離，有效避免氯離子對實驗結(jié)果的影響。

同時，微板孵育過程中，加熱散發(fā)致孵育蓋上殘留一定量的氯離子以及使用流水沖洗板架的力度和時間不一，使板架中殘留的氯離子濃度不同，等因素，都均造成酶反應孔的顏色變化,酶標儀比色時樣本吸光度上升[4],造成HBsAg陰性對照血清樣品呈不同程度顯色。

我們通過調(diào)查和各種對照試驗發(fā)現(xiàn)，“84”消毒液對ELISA方法中以TMB做底物的試驗有假陽性干擾，尤其是使用“84”液浸泡過的板架，對全自動酶免檢測結(jié)果存在嚴重的實驗污染。為此，我們采取了一系列方法，如：實驗前后開窗通風，實驗中工作人員不接觸84消毒液，對重復使用的微板架用流水沖洗干凈后用蒸餾水沖洗三次再晾干使用等系列措施，有效避免了酶免實驗過程的花板現(xiàn)象發(fā)生。

[1]潘文干.生物化學[M].第5版.北京:人民出版社,2008:50-51.

[2]賢永娥.含氯消毒劑對酶聯(lián)免疫法結(jié)果的影響[J].中國健康月刊, 2011,30(4):377.

[3]朱勝.對一起含氯消毒劑影響酶聯(lián)免疫吸附試驗結(jié)果分析[J].中華醫(yī)院感染學雜志,2010,23(13):1896.

[4]劉忠倫,劉波,劉繼來.84消毒液對酶聯(lián)免疫法檢測結(jié)果的影響[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志,2004,19(3):27-28.

A

1004-2725（2016）11-0845-02我站實驗室在近期使用全自動酶免分析系統(tǒng)對獻血者樣本進行HBsAg、抗HCV、抗-TP、抗HIV檢測的過程中，經(jīng)常發(fā)生各檢測項目不同程度花板的現(xiàn)象。花板是因洗板不徹底、孵育時間過長等多種因素造成的假陽性。為探究造成假陽性的原因,我們在逐一排除其他因素后分析了含氯消毒液對全自動酶免檢測結(jié)果影響，結(jié)果如下。

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