張春雷，李蘭亞（沭陽縣中醫(yī)院檢驗科，江蘇沭陽　223600）

技術(shù)方法

CHEMCLIN 600化學(xué)發(fā)光儀篩查梅毒抗體假陽性分析

張春雷，李蘭亞
（沭陽縣中醫(yī)院檢驗科，江蘇沭陽223600）

梅毒抗體；CLIA；TPPA

梅毒是由蒼白螺旋體引起的慢性、系統(tǒng)性性傳播疾病，絕大多數(shù)是通過性途徑傳播。我國自20世紀(jì)80年代梅毒開始復(fù)燃以來，發(fā)病率逐年升高[1]。目前，實驗室常用的檢查方法主要有兩類：一類是非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗，該類試驗對早期、晚期和潛伏期梅毒的診斷存在假陰性；另一類是梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗，檢測血清中抗梅毒螺旋體IgG或IgM，具有高敏感性和高特異性，一般用作確認(rèn)試驗[2]。微粒子化學(xué)發(fā)光免疫測定法（CLIA)是用于檢測微量抗原或抗體的一種標(biāo)記免疫檢測技術(shù)，具有操作簡便，自動化程度高，結(jié)果易于保存，高敏感度和高特異度等優(yōu)點[3]。我院2014年引進(jìn)北京科美生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的CHEMCLIN 600全自動化學(xué)發(fā)光儀，2015年全年共檢測31023例標(biāo)本，發(fā)現(xiàn)316例陽性標(biāo)本，但使用明膠顆粒凝集試驗(TPPA)法復(fù)查，其中61例為假陽性，為了探查原因，進(jìn)行分析研究如下。

1　材料與方法

1.1標(biāo)本來源血液標(biāo)本采集的對象為沭陽縣中醫(yī)院2015年1月-2015年12月住院和門診患者31023例，年齡0-90歲。采集患者血液標(biāo)本后立即以4000r/min離心10min，收集血清用于檢測。

1.2檢測方法使用北京科美生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的CHEMCLIN 600全自動化學(xué)發(fā)光儀，以及北京科美生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的梅毒抗體化學(xué)發(fā)光診斷試劑盒檢測梅毒抗體，操作均按儀器和試劑盒說明書進(jìn)行。每次檢測以定值參比血清(科美)作為質(zhì)控，質(zhì)控品和定標(biāo)液均購自科美公司。明膠顆粒凝集試驗(TPPA)法試劑盒購自日本富士瑞必歐株式會社。

1.3評價方法梅毒特異性抗體檢測的初篩、復(fù)檢及確認(rèn)程序：對初次用化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行篩查試驗呈陽性反應(yīng)的標(biāo)本使用TPPA試劑復(fù)檢，各次篩查試驗嚴(yán)格按照試劑盒說明書及標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程(SOP)進(jìn)行操作；CLIA初陰性標(biāo)本，隨機(jī)選擇200例使用TPPA試劑復(fù)檢，如有陽性，使用TPPA法復(fù)查。

1.4判斷標(biāo)準(zhǔn)

1.4.1化學(xué)發(fā)光法：S/CO≥1.00為陽性，＜1.00為陰性。

1.4.2TPPA法：陰陽性結(jié)果按試劑盒使用說明書進(jìn)行判定。

2　結(jié)果

2.1316例CLIA檢測陽性標(biāo)本TPPA復(fù)檢結(jié)果 31023例患者中，使用化學(xué)發(fā)光法共篩檢出梅毒特異性抗體陽性316例，陽性率為1.0%，經(jīng)TPPA復(fù)檢，其中255例為陽性，陽性符合率為80.7%，假陽性61例，假陽性率為19.3%。

2.2CLIA法S/CO值與TPPA結(jié)果以TPPA結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，CLIA檢測S/CO值＞10.0時， 梅毒抗體陽性率為100%，S/ CO值＜10.0時，出現(xiàn)61例假陽性，并且S/CO值越小，陽性率越低。見附表：

附表　CLIA法不同S/CO值與TPPA結(jié)果比較（例）

3　討論

國內(nèi)外大量的研究結(jié)果表明，CLIA檢測梅毒抗體作為初篩試驗，具有較高的靈敏度和特異性，但以TPPA法作為確診試驗，明顯存在有假陽性，本研究結(jié)果與文獻(xiàn)報告一致[4]。關(guān)于CLIA檢測假陽性結(jié)果的原因，分析如下。

本研究使用CHEMCLIN 600全自動化學(xué)發(fā)光儀進(jìn)行梅毒抗體初篩試驗，以TPPA法為確診試驗發(fā)現(xiàn)，在S/ CO值為1.0-9.99時61例為假陽性。原因可能是：⑴人體內(nèi)某些抗原或抗體干擾了檢測結(jié)果。⑵多種疾病的影響，多種感染性疾病、懷孕、結(jié)締組織疾病和腫瘤等均可導(dǎo)致CLIA法假陽性[5]。⑶標(biāo)本的影響，嚴(yán)重溶血或纖維蛋白原較多，甚至?xí)纬山徊娣磻?yīng)影響檢測結(jié)果。Kiely等為此指出[6]，化學(xué)發(fā)光法有時高S/CO值也可能為假陽性。⑷機(jī)器清洗樣品杯有殘余，加樣器污染或底物受污染而造成本底升高。在工作中為降低化學(xué)發(fā)光法的假陽性率，加樣器必須專用，加樣吸頭必須確保干凈無污染，在加發(fā)光底物液的過程中需避免加樣吸頭與板孔或手指接觸，以防污染。

本研究發(fā)現(xiàn)，CLIA法S/CO值越高與TPPA法的符合率越高，S/CO值為5.0-9.99時，只有1例假陽性，符合率為98%；S/CO值＞10.0時符合率為100%；當(dāng)CLIA檢測S/ CO值＜10.0時，可能出現(xiàn)假陽性?？梢娫赟/CO值＞5.0時，可以排除大部分梅毒抗體假陽性結(jié)果。同時本研究發(fā)現(xiàn)，化學(xué)發(fā)光法初篩檢測為陰性的200例標(biāo)本，使用TPPA試劑復(fù)檢也均為陰性，提示兩種檢測方法陰性符合率上沒有區(qū)別。但與CLIA相比，TPPA法操作較繁瑣，而CLIA的自動化操作可明顯減少手工操作中的偶然因素。

綜上所述，CHEMCLIN 600全自動化學(xué)發(fā)光儀檢測梅毒,具有靈敏度高、特異度高、重復(fù)性好、線性范圍寬等優(yōu)點，尤其是可大批量檢測，可減輕檢測人員負(fù)擔(dān)。CHEMCLIN 600全自動化學(xué)發(fā)光儀檢測陰性標(biāo)本與TPPA法基本沒有區(qū)別，但明顯存在假陽性。這就要求慎重對待每一例陽性疑似標(biāo)本，必須結(jié)合TPPA法復(fù)檢，才能有效降低假陽性率，必要時需要病人定期復(fù)檢，減少窗口期造成的假陰性。

[1]邵勇.梅毒流行病學(xué)特點及防治研究[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2008，7(2):15-16.

[2]陳祥生．我國梅毒流行現(xiàn)狀及防治策略[J].國際流行病傳染病學(xué)雜志，2008，35(2)：73-77,91．

[3]孫俊，劉美華，閆忠，等.兩種梅毒檢測方法的比較［J］.檢驗醫(yī)學(xué)與臨床，2011，8(9):1039-1041．

[4]金國江，鄒大偉，杜毅鑫，等．CMIA法測定梅毒螺旋體抗體在臨床篩查梅毒的應(yīng)用［J］．中國衛(wèi)生檢驗雜志，2012，2（28），1890-1891．

[5]尹建奇，李曉娥，劉平英，等.2592份血清中梅毒血清學(xué)生物學(xué)假陽性結(jié)果的臨床分析[J].中國皮膚病學(xué)雜志,2001, 15(5):317-318.

[6]Kiely P, Walker K, Parker S, et al.Analysis of sample-to-cutoff ratios on chemiluminescent immunoassays used for blood donor screening highlights the need for serologic confirmatory testing[J]. Transfusion, 2010,50(6)∶1344-1351.

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（2016-04-14）