韓 莉，謝 震，王有為，劉楊英，萬慧穎，周 敏

外周血吲哚胺2,3-雙加氧酶和梅毒血清固定關(guān)系的研究

韓 莉，謝 震，王有為，劉楊英，萬慧穎，周 敏

韓　莉

目的研究外周血吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)和梅毒血清固定的關(guān)系。方法采用前瞻性病例對(duì)照研究的方法，用Ficoll-Paque密度梯度離心法分離血清固定患者與無血清固定患者和健康對(duì)照組的外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)PBMC中的IDO。結(jié)果梅毒患者的IDO蛋白要顯著高于健康對(duì)照，血清固定患者的IDO蛋白要顯著高于無血清固定的患者，多變量Logistic回歸分析模型顯示梅毒患者外周血IDO水平升高與血清固定密切相關(guān)。結(jié)論IDO可能參與了梅毒血清固定和免疫耐受。

梅毒；血清固定；外周血；吲哚胺2,3-雙加氧酶

梅毒是由蒼白螺旋體所引起的性傳播疾病，幾乎可以侵犯全身各器官和系統(tǒng)，造成多器官損害。近年來梅毒出現(xiàn)了重新流行的跡象[1]。中國(guó)梅毒的發(fā)病率由2000年的6.43/10萬增長(zhǎng)到2013年32.86/10萬，年均增長(zhǎng)13.37%[2]。青霉素是治療梅毒的一線藥物，但是療效不盡人意。血清學(xué)指標(biāo)可以反映驅(qū)梅療效，部分患者在正規(guī)驅(qū)梅治療后，非梅毒螺旋體抗體滴度下降到一定程度后就不再下降，而長(zhǎng)期維持在低滴度水平，這一現(xiàn)象被稱為血清固定。血清固定沒有有效的處理方法，只有27%對(duì)治療有反應(yīng)[3]，成為治療上的一個(gè)難題。其具體機(jī)制目前尚不完全清楚[4]，可能與免疫耐受以及宿主細(xì)胞免疫功能受損有關(guān)[5]。

吲哚胺2,3-雙加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase，IDO）是細(xì)胞質(zhì)內(nèi)將色氨酸沿犬尿氨酸途徑代謝的限速酶，該酶通過多種途徑介導(dǎo)免疫耐受[6]，近年受到廣泛關(guān)注。為探索IDO在梅毒發(fā)病中的作用和意義，本文研究了該酶和未來血清固定之間的相關(guān)性。

1　對(duì)象和方法

1.1研究對(duì)象

設(shè)計(jì)為前瞻性病例-對(duì)照研究。血清固定者設(shè)為病例，無血清固定者為對(duì)照。將四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院四川省人民醫(yī)院皮膚病性病研究所首次診斷的218例梅毒患者作為候選的研究對(duì)象。病例排除標(biāo)準(zhǔn)：①人免疫缺陷病毒（HIV）或肝炎標(biāo)志物檢測(cè)陽性以及并發(fā)其他性傳播疾病者；②并發(fā)可能影響免疫功能的疾病，包括腫瘤、自身免疫性疾病、營(yíng)養(yǎng)不良、腎功能衰竭或其他可能的感染；③腦脊液檢查陽性，其他神經(jīng)、眼、血管或其他三期內(nèi)臟梅毒受累者；④孕婦、隨訪期間有非婚性生活史者；⑤未采用青霉素治療；⑥近1個(gè)月使用過可能影響免疫功能的藥物，包括免疫抑制劑或免疫調(diào)節(jié)劑；⑦患者不同意參加研究；⑧未完成24個(gè)月的隨訪。共有178例梅毒患者符合條件（圖1）。

圖1　納入研究的梅毒患者流程

首次診斷時(shí)的資料為基線值。218例患者在基線時(shí)檢測(cè)了外周血IDO水平。研究同期的10例健康志愿者作為研究IDO水平的對(duì)照。患者均采用芐星青霉素240萬 U雙臀肌內(nèi)注射，每周1次，連續(xù)3周。治療后第1年每3個(gè)月復(fù)診1次，第2年每半年復(fù)診1次。隨診期間檢查快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)（RPR）。血清固定的定義依照中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)皮膚性病專業(yè)委員會(huì)性病學(xué)組制定的《梅毒血清固定臨床處理專家共識(shí)》的標(biāo)準(zhǔn)[7]。標(biāo)本使用符合赫爾辛基宣言和醫(yī)學(xué)倫理，并征得研究對(duì)象的知情同意。

1.2檢測(cè)方法

在基線時(shí)收集所有研究對(duì)象的全血，用Ficoll-Paque密度梯度離心法（GE Healthcare，Uppsala，Sweden）分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）。用人IDO的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒（武漢華美生物工程有限公司）檢測(cè)PBMC中的IDO。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差或中位數(shù)（25百分位, 75百分位) 表示。用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。兩組間差別用χ2檢驗(yàn)、獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或Mann-Whitney U檢驗(yàn)進(jìn)行比較。用多變量Logistic回歸分析模型評(píng)估發(fā)生血清固定的危險(xiǎn)因素。定義雙側(cè)P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1臨床一般情況

無血清固定和血清固定患者的臨床特征見表1。

2.2健康人群與梅毒患者PBMC中IDO蛋白水平

梅毒患者的IDO蛋白要顯著高于健康對(duì)照[1.43(1.15, 1.95)比1.15(0.68, 1.26），P=0.024]（圖2）。在24個(gè)月時(shí)有33例（18.5%）發(fā)生血清固定。發(fā)生血清固定患者的IDO蛋白要顯著高于無血清固定的患者[2.26(1.89，2.50)比1.21(0.95，1.37)，P=0.002]（圖2）。

表1　無血清固定和血清固定梅毒患者的臨床特征

圖2　研究對(duì)象的外周血IDO蛋白水平

2.2基線IDO中位熒光強(qiáng)度和血清固定風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性

多變量Logistic回歸分析納入了4項(xiàng)變量，包括年齡、梅毒分期、治療前RPR滴度和IDO蛋白水平分組（4等份后分為Q1～Q4組），4組患者在年齡、性別構(gòu)成及疾病分期等變量上差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。經(jīng)多變量校正后，與Q1組比較，Q4組與血清固定風(fēng)險(xiǎn)升高密切相關(guān)（表2）

表2　IDO水平分組和血清固定相關(guān)性的多變量Logistic回歸分析

3　討論

IDO是一種介導(dǎo)免疫耐受的關(guān)鍵分子。色氨酸是T淋巴細(xì)胞增殖所需的必需氨基酸，IDO過度表達(dá)/活化介導(dǎo)的色氨酸缺失能活化氨基酸敏感的GCN2信號(hào)通路，抑制免疫細(xì)胞增殖和分化、誘導(dǎo)凋亡和能量代謝障礙[8-10]。IDO包含一段免疫受體酪氨酸抑制基序，該結(jié)構(gòu)進(jìn)一步正反饋放大IDO介導(dǎo)的免疫耐受作用[11]。另外，色氨酸缺失和犬尿氨酸增加會(huì)誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞生成、分化和成熟[12,13]，并阻抑這類免疫耐受細(xì)胞向其他T淋巴細(xì)胞亞型轉(zhuǎn)化[13]。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)血清固定者的IDO水平顯著高于無血清固定者。進(jìn)一步在多變量Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型中分析了血清固定的風(fēng)險(xiǎn)，經(jīng)年齡、分期和治療前RPR滴度等影響血清固定的因素校正后，Q4組發(fā)生血清固定的風(fēng)險(xiǎn)較Q1組升高4倍。這些結(jié)果表明梅毒患者外周血的IDO水平升高和血清固定密切相關(guān)。

近年來，對(duì)于免疫耐受和梅毒血清固定之間的關(guān)系受到關(guān)注。國(guó)內(nèi)學(xué)者用不同方法檢測(cè)了梅毒患者PBMC中的調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞，結(jié)果發(fā)現(xiàn)血清固定患者該類細(xì)胞亞群要高于對(duì)照人群[14-16]。IDO是促進(jìn)調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的上游調(diào)節(jié)分子[12,13]，本文研究發(fā)現(xiàn)血清固定患者的IDO水平顯著增高，由此推測(cè)IDO可能是通過上調(diào)調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的方式介導(dǎo)血清固定的。

既往通過橫斷面研究的方式來觀察血清固定的相關(guān)因素，例如調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的水平[14-16]。這種設(shè)計(jì)不能說明血清固定是這些因素的原因或結(jié)局，因而不能提示這些相關(guān)因素是否為血清固定的原因。采用隊(duì)列數(shù)據(jù)是本研究的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)。治療前基線IDO升高發(fā)生在血清固定之前，因此可以提示IDO升高可能是導(dǎo)致血清固定的原因之一。

本文結(jié)果提示外周血IDO的基線水平和未來血清固定相關(guān)，提示IDO可能參與了梅毒血清固定和免疫耐受。如果這一機(jī)制被后續(xù)研究證實(shí)，將為解決梅毒治療過程中的血清固定提供新的方向。

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（本文編輯耿建麗）

Relationship between peripheral indoleamine 2,3-dioxygenase and syphilis serofast: a prospective case-control study

HAN Li，XIE Zhen，WANG You-wei，et al
Dermatological department, Chengdu Second People's Hospital, Chengdu 610021, China

ObjectiveTo investigate the relationship between peripheral indoleamine 2,3-dioxygenase (IDO) and syphilis serofast. MethodsBased on a prospective case-control design, peripheral mononuclear cells of both serofast patients and healthy controls were isolated with ficoll-paque density gradient centrifugation and then the IDO level in PBMC was detected with ELISA. ResulsIDO level in syphilis patients was significantly higher than that in healthy controls. IDO level in serofast patients was significantly higher than that in nonserofast patients. A close relationship was revealed between serofast state and elevation of peripheral IDO level with multi-variable Logistic regression model. ConclusionIDO may be involved in immune tolerance and serofast of syphilis.

Syphilis；Serofast；Peripheral；Indoleamine 2,3-dioxygenase [J Pract Dermatol, 2016, 9(2):98-100]

R759.1

A

1674-1293(2016)02-0098-03

10.11786/sypfbxzz.1674-1293.20160205

四川省衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)科研課題（090431）

610021，成都市第二人民醫(yī)院皮膚科（韓莉）；四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院四川省人民醫(yī)院皮膚病性病研究所（謝震，王有為，劉楊英，萬慧穎，周敏）

韓莉，主治醫(yī)師，研究方向：感染性及免疫性皮膚病E-mail: 2188986240@qq.com

謝震，E-mail: xiezhen6289@126.com

（2015-12-19

2016-01-21）