譚小玉

海南省藥物研究所，海南 海口 570311

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海南黎藥冰糖草藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

譚小玉

海南省藥物研究所，海南 ?？?570311

目的：建立海南黎藥冰糖草的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：研究海南黎藥冰糖草藥材的性狀鑒別，采用紫外分光光度法測定冰糖草中總黃酮的含量，并對冰糖草的水分、灰分、浸出物進(jìn)行測定。結(jié)果：對冰糖草的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行初步研究，建立了性狀鑒別、總黃酮含量測定的方法，并確定了冰糖草藥材水分、灰分、浸出物的限量。結(jié)論：所建立的方法準(zhǔn)確、可靠、穩(wěn)定，可為制定黎藥冰糖草質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

冰糖草；總黃酮；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

冰糖草為玄參科野甘草屬植物野甘草ScopariadulcisL.的全草，喜生于村旁、菜園、平地，分布于海南各地，廣東、廣西、云南、福建等省區(qū)亦有分布。冰糖草具有清熱利濕、散風(fēng)止癢的功效，常用來治感冒，腸炎，小便不利、熱痱，皮膚濕疹等。據(jù)載可解木薯中毒[1]。海南黎族民間常用其配方入藥治療疾病。有文獻(xiàn)對其化學(xué)成分[2-6]，如總黃酮、總酚酸、揮發(fā)油等進(jìn)行分析研究，對其藥理作用的研究也有見報道[7-8]。但國家尚未制定冰糖草的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。對產(chǎn)自海南地區(qū)黎族民間常用于配方用藥的冰糖草進(jìn)行研究，包含性狀、水分、灰分、浸出物、含量測定等項，可為藥材的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 藥材 冰糖草全年可采，藥材均采自海南省各市縣，藥材來源詳見表1。

1.2 材料 蘆丁對照品(批號：100080-200707，中國食品藥品檢定研究院，含量92.5 %)；水為超純水，其余試劑均為分析純。

表1 藥材來源表

1.3 儀器 島津UV-2401PC紫外分光光度計；島津AUW220D電子天平；DHG-9203A型電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；SXZ-4-10N型箱式電阻爐(上海一恒科技有限公司)；萬能電子爐；SK250HP型超聲波清洗器(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)；XMTE-8112型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥材性狀鑒別 本品全長約1m。根莖棕黃色，有彎曲，主根再生細(xì)根。莖黃白色，細(xì)長，多分枝，易折斷，斷面白色或黃白色。葉片長約3～8mm，灰綠色，易脫落，質(zhì)脆易碎?；ㄐ?，具絲狀長梗，多脫落。蒴果淺褐色，球形，直徑2～3mm，多開裂成2～4瓣，內(nèi)含棕褐色種子，易碎。氣微，味淡。如圖1、圖2所示。

2.2 總黃酮含量的測定方法

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取蘆丁對照品(含量為92.5%)28.44mg置于100mL容量瓶中，加入70 %甲醇適量，超聲微熱溶解，冷卻后加入70 %甲醇稀釋至刻度，搖勻，配制成0.26307mg/mL的對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取冰糖草粉末1g，加70%甲醇30mL，稱定重量，回流提取1.5h，放冷，補(bǔ)重，過濾，收集續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.2.3 顯色方法 精密吸取待測溶液2mL置25mL容量瓶中，加入5 %亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，靜置6min；再加10%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，靜置6min；再加4%氫氧化鈉溶液10mL，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，靜置15min，測定。

2.2.4 測定波長的選擇 以蘆丁為對照，按2.2.3項下顯色方法加入顯色劑，以相應(yīng)溶劑為空白，置紫外掃描儀中，在400～800nm范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，確定最大吸收波長為508nm。如圖3所示。

2.2.5 線性關(guān)系考察 分別精密吸取蘆丁甲醇溶液(0.26307mg/mL)0、0.5、1、2、4、8、10mL置25mL容量瓶中，按“2.2.3”項下顯色方法加入顯色劑，于508nm處測定吸收值(以不含蘆丁的空白管對照調(diào)零做空白對照)。根據(jù)所測得的蘆丁吸光度，以對照品濃度C(mg/mL)為橫坐標(biāo)，吸光度(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程：A=11.73078C-0.00129(r2=0.99998)，線性范圍為0.00526～0.10523mg。蘆丁在此范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.6 精密度試驗 精密吸取供試品溶液2mL置25mL容量瓶中，按“2.2.3”項下顯色方法加入顯色劑，以相應(yīng)溶劑為空白，于508nm處連續(xù)測定吸光度值6次，RSD=0.21%，結(jié)果表明該方法精密度良好。

2.2.7 顯色穩(wěn)定性試驗 精密吸取供試品溶液2mL置25mL容量瓶中，按“2.2.3”項下顯色方法加入顯色劑，以相應(yīng)溶劑為空白，于508nm處測定吸光度，記錄0、10、20、40、60min時的吸光度值，結(jié)果表明該供試品溶液顯色后放置10～20min內(nèi)達(dá)到穩(wěn)定，60min內(nèi)RSD=2.97%，結(jié)果見表2。

表2 顯色穩(wěn)定性試驗結(jié)果

2.2.8 重復(fù)性試驗 密稱取冰糖草粉末1g，共6份，平行按2.2.2項下方法制備供試品溶液，按“2.2.3”項下顯色方法加入顯色劑，于508nm處測定吸收值(以不含蘆丁的空白管對照調(diào)零做空白對照)。結(jié)果表明，實驗結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好，RSD為1.64%。

2.2.9 加樣回收率試驗 通過向已知總黃酮含量的冰糖草藥材中精密加入一定量的蘆丁對照品溶液，依法制備供試品溶液和測定，計算，即得該方法的加樣回收率結(jié)果。

精密稱取蘆丁對照品43.23mg，置于50mL容量瓶中，以70%甲醇溶解，稀釋至刻度，搖勻，得蘆丁儲備液(0.7998mg/mL)。精密稱取冰糖草粉末0.5g，共6份，添加蘆丁儲備液10mL(即蘆丁對照品7.998mg)，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，精密移取供試品溶液2mL，按“2.2.3”項下顯色方法加入顯色劑，靜置15min，于508nm處測定吸收值(以不含蘆丁的空白管對照調(diào)零做空白對照)，計算回收率。試驗結(jié)果平均回收率為102.22%，RSD為0.89%。結(jié)果見表3。

表3 回收率試驗結(jié)果

備注：回收率(%)=(實測值-樣品中總黃酮含量)/對照品加入量×100%

2.2.10 樣品測定 準(zhǔn)確稱取冰糖草粉末，每個批次重復(fù)稱取3個樣，按“2.2.2”項下方法制備供試品溶液，精密移取供試品溶液2mL，按“2.2.3”項下顯色方法，參照蘆丁線性回歸方程，測定冰糖草總黃酮含量。結(jié)果見表4。

表4 冰糖草三批樣品測定結(jié)果

2.3 檢查 按《中華人民共和國藥典》2015版四部通則0832第二法(烘干法)、通則2302、通則2201對采集的各批次冰糖草水分、總灰分、酸不溶性灰分和水溶性浸出物、醇溶性浸出物進(jìn)行測定。結(jié)果如下(表5)：水分的測定結(jié)果為9.06%～9.36%；總灰分測定結(jié)果為4.982%～5.319%，酸不溶性灰分的測定結(jié)果為0.607%～0.633%；水溶性浸出物(熱浸法)的測定結(jié)果為9.552%～10.014%；醇溶性(溶劑為95%乙醇)浸出物的測定結(jié)果為3.638%～3.757%

表5 冰糖草水分、灰分、浸出物測定結(jié)果 (n=3)

3 討論

冰糖草全株含黃酮類成分[2-4]，NaNO2-Al(NO3)3-NaOH比色法是常用的測定總黃酮含量的方法。它以Al(NO3)3作為顯色劑，在堿性條件下，與黃酮形成紅色螯合物，以蘆丁為對照，在其最大吸收波長處508nm測定吸光度值，從而得到待測物質(zhì)總黃酮的含量[9]。

影響冰糖草總黃酮類物質(zhì)提取效率的因素主要有溶劑、提取時間、提取次數(shù)等。為選擇一種合適的提取冰糖草中總黃酮成分的方法，特針對提取溶劑、提取時間、提取次數(shù)設(shè)計實驗，進(jìn)行考察。試驗結(jié)果為70%甲醇的提取效率最高；一次回流提取1.5h即可較為完全提取冰糖草中總黃酮類成分。故確定冰糖草總黃酮提取的最佳方案為70 %甲醇，回流提取1.5h。

通過對3個批次冰糖草中總黃酮的含量測定，最高含量為16.948mg/g，最低含量為14.841mg/g，可為后續(xù)研究提供參考。

采用2015版國家藥典通則方法，對冰糖草藥材的水分、灰分、浸出物進(jìn)行檢查，為了更好地控制藥材質(zhì)量，根據(jù)所測結(jié)果，建議水分不得過10 %，總灰分不得過6.0 %，酸不溶性灰分不得過0.7 %，水溶性浸出物(熱浸法)不得低于8.0 %，醇溶性浸出物(95%乙醇)不得低于3.0 %。

[1] 陳煥庸.海南植物志[M]. 北京:科學(xué)出版社, 1974: 497.

[2] 馬雯芳, 鄧慧連, 蔡毅, 等. 冰糖草總黃酮含量測定及顯色方法優(yōu)化[J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志, 2013, 19(3): 112-115.

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(編輯：陶希睿)

Study on Quality Standards of Hainan Li Folk MedicineScopariadulcisL.

TAN Xiaoyu

Pharmaceutical Institute of Hainan Province, Haikou 570311， China

Objective To study quality standards forScopariadulcisL.. MethodsScopariadulcisL. was identified by morphological identification. Total flavonoids were determined by ultraviolet spectrophotometry (UV). Determination of moisture, ash and extractives were studies. Results Preliminary study on Quality Standards ofScopariadulcisL. Morphological identification and quantitative method for the determination of total flavonoids by UV were established. Limit of moisture, ash and extractives inScopariadulcisL. were determined. Conclusion The method accurate, reliable and stability can be used for the quality standards ofScopariadulcisL.

ScopariadulcisL.;Total Flavonoids;Quality Standards

2016-08-16

海南省科研院所技術(shù)開發(fā)專項(KYYS-2014-67)。

譚小玉(1989-)，女，研究實習(xí)員，主要從事海南黎藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究方向。E-mail：tan_xiaoyu@126.com

R248.1

A

1007-8517(2016)21-0020-03