彭 璟,李爽樂(lè),曾洪波,鄧應(yīng)平
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·臨床論著·
JAK2-STAT3基因多態(tài)性對(duì)真菌性角膜潰瘍患者伏立康唑血藥濃度的影響
彭 璟1,2,李爽樂(lè)2,曾洪波2,鄧應(yīng)平1
?METHODS: A total of 56 cases (56 eyes) with fungal corneal ulcer wererecruited in our hospital from March 2012 to February 2015. The concentration of voriconazole plasma in each patient was detected by high performance liquid chromatography with fluorescence detection. Meanwhile, the JAK2/STAT3 genotype analysis was performed by polymerase chain reaction restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP).
?RESULTS:All patients were divided into high voriconazole plasma concentration group (35 cases, 62.50%) and low voriconazole plasma concentration group (21 cases, 37.50%) by using standard median as boundary value. There was no significant difference on the male proportion, height, weight, daily dose and adverse reaction of the patients between high and low serum voriconazole concentration group (P>0.05). The median trough concentration and the median standardized serum concentration in the high serum voriconazole concentration group were significantly higher than those of the low serum voriconazole concentration group (P<0.05). The effective rate of high serum voriconazole concentration group was better than that of low serum voriconazole concentration group (P<0.05). In the seven polymorphic loci of JAK2-STAT3 gene, the JAK2, rs10119004, GA allele, GG allele and the STAT3, rs12948909 TT allele of high serum voriconazole concentration group showed significant difference as compared with the low serum voriconazole concentration group (P<0.05).
?CONCLUSION:The JAK2-STAT3 gene polymorphism shows significant effects on the serum voriconazole concentration and clinical efficacy of voriconazole, indicating that pharmacogenetic study of great significance for clinical rational used of voriconazole.
目的:探討蛋白酪氨酸激酶2/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與激活子3(Janus kinase signal transducers 2 and activator of transcription 3, JAK2/STAT3)基因多態(tài)性對(duì)真菌性角膜潰瘍患者伏立康唑血藥濃度的影響。
方法:選取2012-03/2015-02間我院診治的56例56眼真菌性角膜潰瘍患者為研究對(duì)象,采用高效液相色譜-熒光檢測(cè)法測(cè)定每位患者伏立康唑的血藥濃度,同時(shí)利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性方法(PCR-RFLP)分別進(jìn)行JAK2/STAT3基因型分析。
結(jié)果:將所有患者以中位標(biāo)準(zhǔn)化伏立康唑血藥濃度為分界值,分為高血藥濃度組(35例,62%)和低血藥濃度組(21例,38%);高、低血藥濃度組患者在男性比例、身高、體質(zhì)量、千克體質(zhì)量日劑量和不良反應(yīng)發(fā)生情況方面的比較無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P>0.05);高血藥濃度組的中位谷濃度和中位標(biāo)準(zhǔn)化血藥濃度都顯著高于低血藥濃度組(P<0.05);高血藥濃度組患者伏立康唑的有效率也優(yōu)于低血藥濃度組(P<0.05);在JAK2-STAT3基因7個(gè)多態(tài)位點(diǎn)分型中,高血藥濃度組患者JAK2 rs10119004位點(diǎn)GG和GA等位基因、STAT3 rs12948909位點(diǎn)TT等位基因與低血藥濃度組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:JAK2-STAT3基因多態(tài)性對(duì)伏立康唑血藥濃度和臨床療效均有明顯影響,提示藥物遺傳學(xué)研究對(duì)伏立康唑的臨床合理用藥有重要指導(dǎo)意義。
真菌性角膜潰瘍;伏立康唑;JAK2;STAT3
引用:彭璟,李爽樂(lè),曾洪波,等.JAK2-STAT3基因多態(tài)性對(duì)真菌性角膜潰瘍患者伏立康唑血藥濃度的影響.國(guó)際眼科雜志2016;16(12):2204-2208
真菌性角膜潰瘍是一種主要由真菌引發(fā)的感染性角膜病變,具有發(fā)病率高、病程長(zhǎng)、缺乏敏感性抗真菌藥物等特點(diǎn),也是導(dǎo)致我國(guó)角膜盲的首位病因。目前,臨床上治療真菌性角膜潰瘍的方式有兩種,主要包括手術(shù)治療(角膜移植術(shù)或清創(chuàng)術(shù))和抗真菌藥物治療[1]。其中,角膜移植術(shù)等手術(shù)治療常因角膜供體嚴(yán)重缺乏,手術(shù)難度大,費(fèi)用昂貴等因素,難以被推廣應(yīng)用,而且術(shù)后患者仍存在真菌復(fù)發(fā)、免疫排斥、角膜穿孔及前房積膿等并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)。因此,抗真菌藥物治療是早期治療真菌性角膜潰瘍最有效的治療方法之一[2]。然而,遺憾的是,當(dāng)前用于局部點(diǎn)眼或全身治療的抗真菌藥物數(shù)量仍相對(duì)偏少,且治療效果不佳,缺乏藥物敏感性和特異性。
伏立康唑是氟康唑的衍生物,屬新一代三唑類抗真菌藥物,具有抗菌譜廣、抗菌作用強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),是臨床上治療侵襲性真菌重癥感染(包括真菌性角膜潰瘍)的一線藥物。但最新研究卻發(fā)現(xiàn),伏立康唑的藥物代謝與單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms, SNPs)密切相關(guān),并且SNPs也被認(rèn)為是決定伏立康唑臨床療效優(yōu)劣的重要影響因素。截至目前,關(guān)于伏立康唑的SNPs研究仍僅停留在其藥物代謝方面,而對(duì)伏立康唑的治療效果尤其是針對(duì)某一特定疾病(如真菌性角膜潰瘍)的療效是否受SNPs的影響尚未明確,且國(guó)內(nèi)外罕見(jiàn)報(bào)道[3-4]。蛋白酪氨酸激酶2/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子與激活子3(janus kinase signal transducers 2 and activator of transcription 3,JAK2/STAT3)信號(hào)途徑是機(jī)體內(nèi)一種重要細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,廣泛參與細(xì)胞增殖、分化、炎性應(yīng)激及免疫調(diào)節(jié)等多種病理生理過(guò)程。JAK2/STAT3基因多態(tài)性與潰瘍性結(jié)腸炎、Behcet病、脊柱炎等眾多疾病的發(fā)生發(fā)展緊密相關(guān)[5]。重要的是,也有實(shí)驗(yàn)研究顯示,角膜真菌感染早期即有JAK2和STAT3表達(dá)的顯著改變,且阻斷JAK2/STAT3信號(hào)通路具有減輕感染癥狀的作用,提示JAK2/STAT3基因多態(tài)性可能與真菌性角膜潰瘍的發(fā)生有關(guān)[6]。據(jù)此,本研究擬以我院診治的56例真菌性角膜潰瘍患者為研究對(duì)象,探討JAK2/STAT3基因多態(tài)性與對(duì)真菌性角膜潰瘍患者伏立康唑血藥濃度的相關(guān)性,以期為揭示真菌性角膜潰瘍的致病機(jī)制和伏立康唑臨床治療效果的改善提供科學(xué)依據(jù),現(xiàn)總結(jié)報(bào)道如下。
1.1對(duì)象 選取2012-03/2015-02間我院診治的56例56眼真菌性角膜潰瘍患者為研究對(duì)象,其中男34例,女22例,年齡38~59(平均47.19±5.46)歲;發(fā)病時(shí)間3~41(平均12.85±5.93)d;外傷或異物入眼33例,無(wú)明顯誘因23例;潰瘍位于角膜中央者15例,偏位41例;潰瘍最大直徑范圍1~7mm。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)中國(guó)漢族;(2)所有研究個(gè)體間無(wú)血緣關(guān)系;(3)未罹患高血壓、糖尿病、嚴(yán)重感染、自身免疫性疾病等系統(tǒng)性疾病;(4)所有患者均行角膜潰瘍刮取物100g/L氫氧化鉀濕片鏡檢查菌絲和孢子,并予以真菌、細(xì)菌培養(yǎng)鑒定菌屬,確診為真菌性角膜潰瘍;(5)通過(guò)相干光斷層掃描檢查潰瘍浸潤(rùn)深度為淺中層,未累及角膜全層;(6)均屬首次治療,且每例患者治療所用藥物均保持一致。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)中重度肝腎功能損害者(內(nèi)生肌酐清除率≤50mL/min;谷丙轉(zhuǎn)氨酶或谷草轉(zhuǎn)氨酶≥正常3倍;Child-Pugh評(píng)分≥10);(2)對(duì)伏立康唑使用有禁忌證者;(3)使用其他可影響伏立康唑血藥濃度的藥物,且與伏立康唑有潛在相互作用的藥物。本研究方案經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),且向所有參加研究的患者詳細(xì)告知血液標(biāo)本采集的目的,取得患者允許和理解之后,簽訂書面知情同意書。
1.2方法
1.2.1血藥濃度監(jiān)測(cè) 所有患者均予以伏立康唑靜脈滴注治療,負(fù)荷劑量300mg,每12h 1次;維持劑量為200mg,每日2次,間隔12h;在滴注結(jié)束后72h和下次用藥前,即血藥濃度達(dá)到穩(wěn)態(tài)時(shí)采集患者血液,采用高效液相色譜-熒光檢測(cè)法測(cè)定每位患者伏立康唑的血藥濃度,并詳細(xì)記錄患者的個(gè)人臨床資料、體質(zhì)量和藥物劑量等信息。高效液相色譜-熒光法測(cè)定條件:(1)流動(dòng)相,乙腈-水(50∶50);利用Strata-X固相萃取柱過(guò)濾后備用;(2)內(nèi)標(biāo):勞拉西泮溶液;(3)色譜柱:4.6mm×250mm,5μm Semmetry碳18柱;(4)流速:每分鐘0.8mL;(5)柱溫:室溫25℃;(6)激發(fā)波長(zhǎng):256nm,發(fā)射波長(zhǎng):372nm;(7)進(jìn)樣量:20μL。在此色譜條件下,伏立康唑和內(nèi)標(biāo)物均有峰值呈現(xiàn),持續(xù)保留時(shí)間≤15min。將伏立康唑血藥濃度與內(nèi)標(biāo)物的熒光測(cè)定峰面積作線性回歸分析,結(jié)果顯示伏立康唑標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.276X-0.0165(r2=0.9996),線性范圍0.211~21.592μg/mL,最低檢測(cè)質(zhì)量濃度60ng/mL,濃度梯度的質(zhì)控樣品在日內(nèi)和日間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均<5%,相對(duì)回收率范圍97%~104%,室溫放置24h及-20℃反復(fù)凍融3次后,測(cè)定回收率范圍仍保持在85%~101%之間。
1.2.2血液DNA提取 采集患者新鮮外周靜脈血液2mL,內(nèi)置有枸櫞酸鈉抗凝劑的試管中,-80℃保存?zhèn)溆茫焕醚夯蚪M提取試劑盒提取血液DNA,操作流程嚴(yán)格參照試劑說(shuō)明書執(zhí)行,將所提DNA分裝,置于-20℃貯存。
1.2.3單核苷酸多態(tài)性標(biāo)記基因分型 將JAK2、STAT3基因7個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)于聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性方法(PCR-RFLP)分型前即予以測(cè)序,并以此作為分型的依據(jù)和標(biāo)準(zhǔn)品。PCR引物序列和限制性內(nèi)切酶詳述如下:JAK2,rs7857730,上游:5’-CCCCTTTATTGTAATTTTGAGTTCAT-3’,下游5’-TGAAAACGCCTTCCTTAGAGTC-3’,內(nèi)切酶HIN1II;JAK2,rs10758669,上游:5’-GAGACAAGGACATGCTGAAGTGC-3’,下游:5’-ACAGACAAGCAAGCAATGTTTTTTTT-3’,內(nèi)切酶HPYCH4V;JAK2,rs10119004,上游:5’-ATATTGTCATTTTTAACTGCGCTACT-3’,內(nèi)切酶BSENI;STAT3,rs2293152,上游:5’-CACAAAGGGCCTCTGGCTTC-3’,下游:5’-CATTCCCACATCTCTGCTCCCT-3’,內(nèi)切酶KPN2I;STAT3,rs6503695,上游:5’-GAGCATATTAAAGTGAAGAAAATAAT-3’;下游:5’-GGGATGTAGATCCAAACTAGAT-3’,內(nèi)切酶TASI;STAT3,rs744166,上游:5’-GCTGTAATGTCTTGAGGGAATCAAGC-3’,下游:5’-TATTCAGATGGCGGTCACATGC-3’,內(nèi)切酶HINDIII;STAT3,rs12948909,上游:5’-GGATCTAAAAGAGCCCTACTCTCCA-3’,下游:5’-TCACCCTATTGTGCTACTGAACGT-3’,內(nèi)切酶TASI。
JAK2-STAT3基因多態(tài)性位點(diǎn)PCR反應(yīng)體系:上下游引物0.25μL濃度10μM,超純水1μL,模板DNA 1μL,TaKaRa ExTaq酶2.5μL;反應(yīng)條件:94℃預(yù)變性3min,94℃變性40s,退火溫度rs6503695,rs10758669,rs744166,rs2293152位點(diǎn)均為58℃,rs7857730,rs10119004位點(diǎn)56℃,rs12948909 為 60℃,40s持續(xù)36個(gè)循環(huán),72℃延伸5min;結(jié)束后將3U的限制性內(nèi)切酶5μL加入PCR產(chǎn)物中,離心后在反應(yīng)體系中37℃水浴6h,隨后將產(chǎn)物加入8%聚丙烯酰胺凝膠中電泳分離,硝酸銀染色觀察并拍照。治療過(guò)程中由經(jīng)驗(yàn)豐富的醫(yī)師行常規(guī)裂隙燈眼科檢查,詢問(wèn)患者癥狀,觀察眼部情況并詳細(xì)記錄。
療效判斷標(biāo)準(zhǔn)[7]:(1)治愈: 疼痛癥狀消失,角膜潰瘍?cè)钣?,熒光染?-),后彈力層皺褶,角膜水腫消退,前房反應(yīng)及積膿消失,視力完全或部分恢復(fù)。(2)好轉(zhuǎn):疼痛癥狀減輕,角膜潰瘍?cè)畲蟛糠钟希瑹晒馊旧?±),后彈力層皺褶、角膜水腫明顯減輕,前房積膿減少或消失,視力無(wú)變化或提高。(3)無(wú)效:潰瘍?cè)顭o(wú)變化甚至擴(kuò)大,前房積膿增加,癥狀加重,出現(xiàn)角膜穿孔等并發(fā)癥。治愈和好轉(zhuǎn)均為有效。
統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:所有數(shù)據(jù)采用SPSS 18.0軟件整理和分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,兩組間的比較利用獨(dú)立樣本Student-t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示,兩組間的比較則應(yīng)用卡方檢驗(yàn);兩組間中位數(shù)比較采用Kruskal-Wallis檢驗(yàn)。以P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1一般臨床資料 真菌性角膜潰瘍患者56例一般情況見(jiàn)表1。
2.2等位基因和基因型分布 患者56例DNA樣本經(jīng)PCR-RFLP測(cè)定,結(jié)果顯示JAK2,rs7857730,存在3種基因型和兩個(gè)等位基因:GG,GT,TT,G,T;JAK2,rs10758669,存在3種基因型和兩個(gè)等位基因:AA,AC,CC,A,C;JAK2,rs10119004,存在3種基因型和兩個(gè)等位基因:GG,GA,AA,G,A;STAT3,rs2293152,存在3種基因型和兩個(gè)等位基因:GG,CG,CC,G,C;STAT3,rs6503695,存在3種基因型和兩個(gè)等位基因:CC,CT,TT,C,T;STAT3,rs744166,存在3種基因型和兩個(gè)等位基因:CC,CT,TT,C,T;STAT3,rs12948909,存在3種基因型和兩個(gè)等位基因:TT,CT,CC,T,C。各基因型多態(tài)性分布頻率也均符合遺傳學(xué)的 Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05)。采用標(biāo)準(zhǔn)化伏立康唑血藥濃度與56例患者基因型進(jìn)行對(duì)比,即血藥濃度除以患者每日每千克體質(zhì)量的用藥日劑量(血藥濃度/體質(zhì)量劑量),單位是μg·kg/mL·mg,以此排除用藥劑量和體質(zhì)量對(duì)血藥濃度的影響。將所有患者以中位標(biāo)準(zhǔn)化伏立康唑血藥濃度為分界值,分為高血藥濃度組(35例,62.5%)和低血藥濃度組(21例,37.5%)。
表1 所有真菌性角膜潰瘍患者一般情況
指標(biāo)數(shù)值性別(男/女)34/22年齡( x±s,歲)47.19±5.46(38~59)體質(zhì)量( x±s,kg)60.28±9.57(42~76)身高( x±s,cm)166.71±10.58(155~183)發(fā)病時(shí)間(d)12.85±5.93(3~41)中位谷血藥濃度(ng/mL)2.59(0.24~11.89)中位標(biāo)準(zhǔn)化血藥濃度(ng/mL)0.39(0.02~2.19)病原微生物(眼,%) 曲霉菌36(64.3) 念珠菌17(30.4) 枝頂孢霉菌1(1.8) 鐮刀菌1(1.8) 鏈格孢菌1(1.8)抗真菌治療的反應(yīng)(眼,%) 有效50(89.3) 無(wú)效6(10.7)伏立康唑可能相關(guān)不良反應(yīng)(眼,%) 肝毒性6(10.7) 神經(jīng)毒性2(3.6) 視覺(jué)障礙1(1.8) 胃腸道反應(yīng)1(1.8)
2.3血藥濃度分組后一般情況、藥動(dòng)學(xué)參數(shù)、不良反應(yīng)及療效比較 如表2所示,高、低血藥濃度組患者在男性比例、身高、體質(zhì)量和千克體質(zhì)量日劑量方面的比較無(wú)顯著差別(P>0.05);而高血藥濃度組的中位谷濃度和中位標(biāo)準(zhǔn)化血藥濃度都顯著高于低血藥濃度組(P<0.05);此外,高血藥濃度組患者伏立康唑的有效率也優(yōu)于低血藥濃度組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且兩組間的不良反應(yīng)發(fā)生情況比較差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
2.4基因型與患者血藥濃度的關(guān)系 如表3所示,JAK2-STAT3基因7個(gè)多態(tài)位點(diǎn)分型中,高血藥濃度組患者JAK2 rs10119004位點(diǎn)GG和GA等位基因與低血藥濃度組比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);另外,高血藥濃度組患者的STAT3 rs12948909位點(diǎn)TT等位基因與低血藥濃度組比較也有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
角膜位于眼球的前端,常因植物劃傷、角膜異物和內(nèi)翻倒睫等引發(fā)角膜損傷,進(jìn)而受細(xì)菌或真菌侵襲感染,導(dǎo)致角膜潰瘍的發(fā)生。真菌性角膜潰瘍是當(dāng)前發(fā)病較高的致盲性、頑固性眼部疾病,臨床上主要采用抗真菌藥物和手術(shù)治療兩種方式。然而,由于缺乏有效、廣譜的抗真菌藥物,手術(shù)難度較高,角膜供體來(lái)源又不足,因而真菌性角膜潰瘍的治療療效一直并不令人滿意。相對(duì)于角膜手術(shù),抗真菌藥物治療對(duì)患者的身體和經(jīng)濟(jì)的負(fù)擔(dān)較小,且不會(huì)出現(xiàn)術(shù)后前房積膿、角膜穿孔或免疫排斥等并發(fā)癥,是一種治療真菌性角膜潰瘍的有效方法之一。當(dāng)前臨床上應(yīng)用的抗真菌藥物主要以氟康唑、伊曲康唑等唑類抗真菌藥物為主,它們易穿透角膜,對(duì)真菌產(chǎn)生殺滅作用,但長(zhǎng)期使用所產(chǎn)生的耐藥性一直是困惱一線醫(yī)師的關(guān)鍵難題[8-9]。
表2 血藥濃度分組后一般情況、藥動(dòng)學(xué)參數(shù)、不良反應(yīng)及療效比較
指標(biāo)低血藥濃度組(n=21)高血藥濃度組(n=35)t/χ2P男性比例(%)57(12/21)63(22/35)0.1800.672身高( x±s,cm)166.38±10.75168.14±11.131.2830.206體質(zhì)量( x±s,kg)57.38±7.9458.06±8.110.4940.698千克體質(zhì)量日劑量( x±s,mg/kg)6.84±1.057.98±1.130.7820.451中位谷濃度(ng/mL)1.18(0.05~1.49)4.36(2.29~10.85)5.9140.008中位標(biāo)準(zhǔn)化血藥濃度(μg·kg/mL·mg)0.15(0.03~0.25)0.80(0.41~1.45)4.8310.023伏立康唑治療有效57(12/21)83(29/35)4.4250.035伏立康唑可能相關(guān)的不良反應(yīng)14(3/21)20(7/35)0.2920.589
表3 JAK2-STAT3不同基因型與血藥濃度的相關(guān)性
基因SNPs基因型/等位基因低血藥濃度組(n=21)高血藥濃度組(n=35)χ2PORJAK2rs7857730GG5(24)10(29)0.1520.6970.781GT10(48)16(46)0.0190.8901.080TT6(29)9(26)0.0550.8151.156G10(48)18(51)0.0750.7820.859T11(52)17(49)---JAK2rs10758669AA6(28.57)10(28.57)0.0001.0001.000AC12(57.14)15(42.86)1.0730.3001.778CC3(14.29)10(28.57)1.5030.2200.417A13(61.90)17(48.57)0.9380.3331.721C8(38.10)18(51.43)---JAK2rs10119004GG4(19.05)18(51.43)5.7700.0160.222GA10(47.62)7(20.00)4.7360.0303.636AA7(33.33)10(28.57)0.1410.7081.250G10(47.62)20(57.14)0.4790.4890.682A11(52.38)15(42.86)---STAT3rs2293152GG4(19.05)9(25.71)0.3720.5670.680CG11(52.38)19(54.29)0.0190.8900.926CC6(28.57)7(20.00)0.5410.4621.600G9(42.86)18(51.43)0.3860.5340.708C12(57.14)17(48.57)---STAT3rs6503695CC5(23.81)12(34.29)0.6810.4090.599CT12(57.14)11(31.43)3.5860.0582.909TT4(19.05)12(34.29)1.4930.2220.451C9(42.86)20(57.14)1.0730.3000.563T12(57.14)15(42.86)---STAT3rs744166CC3(14.29)9(25.71)1.0180.3130.481CT11(52.38)18(51.43)0.0050.9451.039TT7(33.33)8(22.86)0.7350.3911.688C8(38.10)19(54.29)1.3780.2400.518T13(61.90)16(45.72)---STAT3rs12948909TT10(47.62)6(17.14)5.9730.0154.394CT6(28.57)18(51.43)2.8000.0940.378CC5(23.81)11(31.43)0.3730.5410.682T14(66.67)15(42.86)2.9800.0842.667C7(33.33)20(57.14)---
伏立康唑是一類新型的抗真菌藥物,屬氟康唑的衍生物,對(duì)眼部多種常見(jiàn)致病真菌如曲霉菌、念珠菌、枝頂孢霉菌和鐮刀菌等均有較強(qiáng)的殺菌活性[10]。本研究納入的研究對(duì)象中,感染的致病真菌也以曲霉菌(64%)和念珠菌(30%)為主,伏立康唑也表現(xiàn)出較為良好的抑菌效果,顯效率高達(dá)89%,這與既往報(bào)道的結(jié)果基本一致[3,11],但本研究結(jié)果顯示,有17.9%患者可出現(xiàn)肝毒性、神經(jīng)毒性和胃腸道應(yīng)激等不良反應(yīng),提示伏立康唑的藥物副作用與氟康唑、伊曲康唑等唑類抗真菌藥物相比并無(wú)明顯的優(yōu)勢(shì)。有報(bào)道顯示,伏立康唑?qū)η咕?、念珠菌及鐮刀菌的最小抑菌濃度分別約為0.016、0.5、2μg/L,在相同劑量水平下,伏立康唑?qū)ι鲜鼍甑捏w外抑制率均為100%,顯著高于臨床上其他唑類抗真菌藥物(如酮康唑,82%;伊曲康唑,67%;氟康唑,60%)[12-14]。本研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn),即便在低血藥濃度組,伏立康唑的中位谷濃度也可達(dá)1.18μg/L,表明伏立康唑的靶濃度和抑菌效果均優(yōu)于其他唑類抗真菌藥物,基于此,伏立康唑的治療有效率高于其他唑類抗真菌藥物也在情理之中。然而,遺憾的是,最新的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),盡管伏立康唑的治療有效率較高,但患者個(gè)體治療效果的差異卻相對(duì)較大,提示伏立康唑臨床治療有效率的高低可能與個(gè)體遺傳易感性存在關(guān)聯(lián)[15]。
目前,關(guān)于伏立康唑的分子遺傳學(xué)研究主要集中于藥物代謝相關(guān)的SNPs研究,而對(duì)于影響伏立康唑藥物作用濃度的藥物遺傳學(xué)研究則相對(duì)較少。有學(xué)者發(fā)現(xiàn),細(xì)胞色素P450同工酶CYP2C19基因的多態(tài)性是引起個(gè)體對(duì)伏立康唑表現(xiàn)出不同代謝能力的主要原因,該酶基因出現(xiàn)突變,可導(dǎo)致蛋白合成過(guò)早終止,產(chǎn)生弱活性或無(wú)活性的CYP2C19酶,失去羥化代謝能力,進(jìn)而使得血液中的伏立康唑濃度無(wú)法達(dá)到較高的濃度,但影響伏立康唑靶作用濃度及療效的遺傳易感性的具體機(jī)制目前仍未明確[16]。重要的是,在眾多候選基因中,最新的研究發(fā)現(xiàn),JAK2/STAT3基因在角膜感染的早期即可出現(xiàn)表達(dá)水平的差異性改變,提示JAK2/STAT3可能在真菌性角膜潰瘍中亦發(fā)揮重要作用[6]。為驗(yàn)證這一可能,本研究首次對(duì)JAK2/STAT3的7個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)進(jìn)行基因型分析,結(jié)果顯示JAK2 rs10119004位點(diǎn)GG和GA等位基因、STAT3 rs12948909位點(diǎn)TT等位基因與伏立康唑的血藥濃度顯著相關(guān),提示上述3個(gè)等位基因的多態(tài)性也是影響伏立康唑靶濃度的因素,繼而導(dǎo)致伏立康唑臨床個(gè)體治療效果的產(chǎn)生顯著差異性。眾所周知,JAK是一種非受體型酪氨酸蛋白激酶,不同類型的JAK異形體合稱JAKs家族。其中,JAK2基因定位于染色體9p24,屬胞內(nèi)蛋白酪氨酸激酶,廣泛參與造血和免疫等系統(tǒng)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[17]。作為JAK2的底物,STAT3則是脫氧核糖核酸結(jié)合蛋白STAT家族之一,位于17q21.1,可介導(dǎo)IL-12、IL-23等多種細(xì)胞因子的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。JAK2/STAT3信號(hào)通路的活化也被認(rèn)為是機(jī)體應(yīng)激性反應(yīng)的關(guān)鍵影響因素[18]。由于目前尚缺乏關(guān)于真菌性角膜潰瘍與JAK2/STAT3信號(hào)通路的活化的相關(guān)機(jī)制研究,因而尚無(wú)法深入解析該信號(hào)通路遺傳易感性對(duì)伏立康唑血藥濃度的影響機(jī)制。從理論上分析,我們認(rèn)為其潛在機(jī)制可能有以下兩種:(1)JAK2/STAT3基因的多態(tài)性可能直接影響該信號(hào)通路能否順利活化,繼而激活被JAK2/STAT3信號(hào)通路調(diào)控的藥物代謝相關(guān)基因,進(jìn)而直接影響伏立康唑的血藥濃度;(2)既往已有許多研究發(fā)現(xiàn)JAK2/STAT3基因的多態(tài)性與機(jī)體免疫功能水平密切相關(guān),在免疫抑制狀態(tài)下伏立康唑的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)勢(shì)必受到嚴(yán)重影響,繼而間接影響伏立康唑的血藥濃度。
鑒于JAK2/STAT3基因的多態(tài)性對(duì)伏立康唑血藥濃度影響的重要性,我們建議未來(lái)臨床上可針對(duì)SNPs的不同檢測(cè)結(jié)果予以相應(yīng)的用藥方案的建議:若患者為JAK2 rs10119004位點(diǎn)GG型,建議適當(dāng)減少給藥劑量,并密切觀察血藥濃度,一旦伏立康唑血藥濃度過(guò)低,則及時(shí)增加劑量;如患者為JAK2 rs10119004位點(diǎn)GA型及STAT3 rs12948909位點(diǎn)TT型時(shí),則在常規(guī)劑量適量增加給藥即可,同時(shí)監(jiān)測(cè)伏立康唑血藥濃度。該策略可能對(duì)提高伏立康唑臨床抗真菌療效,降低藥物毒副作用,指導(dǎo)臨床伏立康唑的合理使用有積極作用。值得注意的是,由于本研究納入的樣本數(shù)量有限,患者多來(lái)自于同一人群,且真菌性角膜感染的發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜,故研究的結(jié)論仍有待后續(xù)深入的機(jī)制研究或多中心臨床實(shí)驗(yàn)加以論證。
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Effects of JAK2-STAT3 gene polymorphism on voriconazole plasma concentration in patient with fungal corneal ulcer
Jing Peng1,2, Shuang-Le Li2, Hong-Bo Zeng2, Ying-Ping Deng1
1Department of Ophthalmology, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China;2Department of Ophthalmology, the First People’s Hospital, Zigong 643000, Sichuan Province, China
Ying-Ping Deng. Department of Ophthalmology, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu 610041, Sichuan Province, China. dyp558@163.com
?AIM: To investigate the effects of Janus Kinase 2-Signal Transducers and Activator of Transcription 3 (JAK2/STAT3) gene polymorphism on the voriconazole plasma concentration in patient with fungal corneal ulcer.
fungal corneal ulcer;voriconazole; JAK2; STAT3
1(610041)中國(guó)四川省成都市,四川大學(xué)華西醫(yī)院眼科;2(643000)中國(guó)四川省自貢市第一人民醫(yī)院眼科
彭璟,畢業(yè)于瀘州醫(yī)學(xué)院,大學(xué)本科,主治醫(yī)師,研究方向:眼表疾病、屈光手術(shù)。
鄧應(yīng)平,畢業(yè)于華西醫(yī)科大學(xué),博士,教授,碩士研究生導(dǎo)師,主任醫(yī)師,研究方向:眼表疾病、屈光手術(shù).dyp558@163.com
2016-08-20
2016-11-08
:Peng J, Li SL, Zeng HB,etal. Effects of JAK2-STAT3 gene polymorphism on voriconazole plasma concentration in patient with fungal corneal ulcer.GuojiYankeZazhi(IntEyeSci) 2016;16(12):2204-2208
10.3980/j.issn.1672-5123.2016.12.08
Received:2016-08-20 Accepted:2016-11-08