馮真真

婦科門診患者人乳頭狀瘤病毒基因分型檢測(cè)結(jié)果分析

馮真真

人乳頭狀瘤病毒；基因分型；宮頸癌

人乳頭狀瘤病毒（human papillomavirus，HPV）是專性感染人表皮和黏膜鱗狀上皮細(xì)胞的常見DNA病毒，其中高危型人乳頭狀瘤病毒（high-risk human papillomavirus，HR-HPV）是導(dǎo)致宮頸上皮內(nèi)增生和宮頸癌的主要因素［1］。防治HPV成為預(yù)防和治療宮頸癌的關(guān)鍵［2］。該研究回顧性分析婦科門診患者806例可疑宮頸病變的HPV-DNA分型檢查結(jié)果，以了解本地區(qū)婦科門診患者HPV各亞型的分布情況和感染特點(diǎn)，指導(dǎo)宮頸病變的篩查和隨訪。

1　資料與方法

1.1一般資料以2015年1月—2015年12月在筆者所在醫(yī)院婦科門診就診的慢性宮頸炎、陰道異常出血和流液、白帶增多及疑為HPV感染的806例為研究對(duì)象，年齡20～70歲，中位年齡48歲。

1.2方法取婦科門診806例患者的宮頸脫落細(xì)胞使用基因芯片法進(jìn)行HPV-DNA分型 （26種）檢測(cè)，此檢測(cè)可檢測(cè)到17種高危亞型分別是HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，53，56，58，59，66，67，68，73和 9種低危亞型分別是 HPV6，11，40，42，43，44，54，55，57。

1.2.1標(biāo)本采集所有婦科患者均用陰道窺器暴露陰道及宮頸，將宮頸刷于子宮頸外口處，輕壓并依順時(shí)針?lè)较蛐D(zhuǎn)3～4周，取得脫落細(xì)胞，并置于相應(yīng)的細(xì)胞保存液中。采集的樣本應(yīng)盡快送檢，樣本4℃保存不超過(guò)24 h，-20℃保存不超過(guò)6個(gè)月，避免反復(fù)凍融。

1.2.2儀器與試劑伯樂(lè)C-1000 PCR擴(kuò)增儀；HPV-GenoCam-9600基因芯片檢測(cè)閱讀系統(tǒng)；R16型高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)；K30B型干式恒溫器；恒溫水浴箱。HPV-DNA分型檢測(cè)試劑盒（港龍生物技術(shù)有限公司）。

1.2.3HPV檢測(cè)主要步驟用試劑盒對(duì)采集的脫落細(xì)胞進(jìn)行樣本的預(yù)處理和DNA提?。挥?0 L反應(yīng)體系對(duì)所提取的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增；擴(kuò)增產(chǎn)物加到處理好的芯片上進(jìn)行DNA雜交和顯色。

2　結(jié)果

2.1婦科門診患者的年齡分布及HPV感染情況

共檢測(cè)婦科門診患者806例，其中HPV感染陽(yáng)性患者417例，感染率為51．7%。＜35歲組、35～50歲組、＞50歲組 HPV感染陽(yáng)性分別占病例數(shù)的18．0%、23．1%、10．7%。見表1。

表1　患者的年齡分布及HPV感染情況

2.2HPV感染婦科門診患者的各亞型分布在HPV感染的陽(yáng)性樣本中，HPV單一型感染占61．9%（258/417）。感染率排在前5位的高危型HPV亞型依次為16、58、68、18、59型，5種高危型占總數(shù)的69．8%（180/258），其中HPV16和HPV58為主要感染。發(fā)現(xiàn)感染低危型HPV 6、11、40、43、44、53、54、55、66、67型，其中常見的低危型別是6、11、55。2種以上型別的多重HPV感染占26．4%（110/417），混合感染中除了13種高危型HPV不同型別的多重感染外，高危型別與低危型別也有混合感染。

3　討論

子宮頸癌由人乳頭狀瘤病毒（HPV）感染引起的，是婦女最常見的惡性腫瘤，每年全球約有46．6萬(wàn)的新發(fā)病例，給婦女健康造成了很大的威脅［3，4］。近年來(lái)宮頸癌發(fā)病有年輕化的趨勢(shì)。原位癌高發(fā)年齡為30～35歲，浸潤(rùn)癌為45～55歲。而高危型HPV持續(xù)感染是宮頸內(nèi)皮瘤樣病變以及宮頸癌最常見的致病因素［5］。宮頸癌由初期感染經(jīng)量變到質(zhì)變病變成癌的病理過(guò)程約為10年，及時(shí)篩查癌前病變并使用合理的治療方法可將癌變的發(fā)展及時(shí)扼殺，臨床調(diào)查發(fā)現(xiàn)，早期阻斷宮頸癌前病變可使其達(dá)到100%的治愈率，對(duì)宮頸癌的治療有極其重要的意義［6］。2006年，美國(guó)陰道鏡和宮頸病理學(xué)會(huì)（ASCCP），對(duì)于超過(guò)30歲婦女建立了科學(xué)的篩查方案，進(jìn)行細(xì)胞學(xué)與HR－HPV聯(lián)合篩查，可以有效發(fā)現(xiàn)宮頸癌前病變，及時(shí)進(jìn)行干預(yù)［7］。

該調(diào)查研究結(jié)果中顯示婦科門診就診的慢性宮頸炎、陰道異常出血和流液、白帶增多及疑為HPV感染的806例患者中感染率排在前5位的高危型HPV亞型依次為16、58、68、18、59型，5種高危型占總數(shù)的69．8%。婦科門診患者有臨床癥狀時(shí)，HPV檢查又是高危亞型，罹患宮頸癌的概率很大，對(duì)感染高危亞型的患者應(yīng)及時(shí)進(jìn)行進(jìn)一步檢查，并應(yīng)進(jìn)行及時(shí)的隨訪及觀察。對(duì)于低危亞型的HPV6或11感染，應(yīng)及時(shí)檢查臨床上是否出現(xiàn)疣狀突起，及時(shí)讓性伴侶也進(jìn)行HPV檢查。臨床醫(yī)師根據(jù)患者的臨床癥狀、HPV感染的亞型及相關(guān)檢查對(duì)患者進(jìn)行及時(shí)的分流管理。

因此，了解婦科門診患者HPV感染性陽(yáng)性患者的年齡分布、感染亞型分布的情況，進(jìn)行合理的篩查隨訪管理，使宮頸癌和癌前病變?cè)缙诎l(fā)現(xiàn)和及時(shí)治療，在預(yù)防HPV感染高危人群的宮頸癌的發(fā)生具有重要意義。進(jìn)行HPV檢測(cè)的目的是發(fā)現(xiàn)有患宮頸癌高風(fēng)險(xiǎn)的人群，而非檢測(cè)出單純的HPV感染者。

［1］李華，劉利勝，宋現(xiàn)讓，等．宮頸癌患者感染高危型人乳頭狀瘤病毒的基因型分析［J］．中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2015，25（22）：3909－3910．

［2］劉永良．導(dǎo)流雜交基因芯片檢測(cè)HPV－DNA亞型1760例結(jié)果分析［J］．診斷病理學(xué)雜志，2015，22（1）：59－60．

［3］Hospenthal DK，Crouch HK，English JF，et al．Multidrug－resistant bacterial colonization of combat－injured personnel at admission to medical centers after evacuation from Afghanistan and Iraq［J］．J Trauma，2011，21（1）：S52－57．

［4］Chua KY，Grayson ML，Burgess AN，et al．The growing burden of multidrug－resistant infections among returned Australian travelers［J］．Med J Aust，2014，200（2）：116－118．

［5］Tzenov YR，Andrew PG，Voisey K，et al．Human papilloma virus（HPV）E7－mediated attenuation of retinoblastoma（Rb）induces hPygopus2 expression via Elf－1 in cervical cancer［J］．Mol Cancer Res，2013，11（1）：19－30．

［6］Burki TK．Cervical cancer：screening and risk with age［J］．Lancet Oncol，2014，15（3）：e107．

［7］Gold MA，Thomas MA，Huh WK，et al．High－risk human papillomavirus detection in woman with low－grade squamous intraepithelial lesions or higher－grade cytology using the cervista hpv hr test［J］．J Low Genit Tract Dis，2013，17（1）：51－57．

［2016－05－14收稿，2016－06－11修回］

［本文編輯：吳蓉］

R737.33

B

10.14172/j.issn1671-4008.2016.11.009

453000河南新鄉(xiāng)，解放軍371醫(yī)院檢驗(yàn)科（馮真真）

1.2.4HPV檢測(cè)結(jié)果的判讀統(tǒng)計(jì)臨床HPV陰性標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果（INS）值，按平均值加3倍的標(biāo)準(zhǔn)差確定陰性參考值為11．0。HPV分型基因芯片檢測(cè)閱讀系統(tǒng)可自動(dòng)檢測(cè)INS值，當(dāng)INS＜11．0時(shí)，HPV陰性；當(dāng)INS≥11．0時(shí)，HPV陽(yáng)性，并報(bào)告HPV型別（本試劑盒檢測(cè)26種HPV型中的一種或多種）。