李雯瑛

（朝陽市中心血站成分科，遼寧 朝陽 122000）

亞甲藍光化學法滅活血漿病毒對血漿成分的影響

李雯瑛

（朝陽市中心血站成分科，遼寧 朝陽 122000）

目的 探討亞甲藍光化學法滅活血漿病毒對血漿成分的影響。方法 2013年4月到2014年3月的一年間，每月隨機抽取新鮮血漿5袋，共計60袋作為研究對象，分別對亞甲藍光化學法滅活血漿病毒前后血漿中的凝血因子、血漿纖維蛋白原（Fg）、總蛋白（TP）含量進行測定，并檢測亞甲藍殘留量。結果 亞甲藍光化學法病毒滅活前后，TP、Fg以及凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ等各項指標無顯著變化，P＞0.05，差異無統(tǒng)計學意義。病毒滅活血漿中亞甲藍的殘留量僅為0.06±0.01μmol／L，其濾出率可以達到94.0%。結論 在單袋血漿病毒滅活的過程中，亞甲藍光化學法對血漿質量影響相對較小，是一種有效方法，實用性強，安全性好，值得臨床推廣應用。

亞甲藍光化學法； 滅活血漿病毒； 血漿成分； 影響

臨床血漿輸注是特殊危急情況救治患者的重要方式之一，而在輸全血或者血液成分的過程中，也有一定的病毒性疾病傳播風險［1］。雖然，在血液采集時，各采、供血機構的工作者會對采供血流程中各個環(huán)節(jié)進行積極的控制，但鑒于檢測方法、病毒檢測種類、檢測試劑以及病毒感染血液后“窗口期”的存在、新病毒出現(xiàn)等多種因素的影響［2］，血漿輸注時仍無法完全達到“零風險”的目標，因而，選擇有效的病毒滅活方法，提高血漿使用的安全性，對于降低經血傳播相關疾病的風險具有十分重要的意義。隨著近年來血液成分病毒滅活技術的發(fā)展，輸血安全性得到了顯著的提高。亞甲藍光化學法是用于單袋血漿病毒滅活的一種方法，因其具有安全、有效、實用的優(yōu)點，在臨床輸血過程中逐漸被推廣應用，但其仍存在缺少滅活后血漿的各項質控指標的標準和非脂包膜病毒的滅活等技術問題?？偟膩碚f，亞甲藍光化學法滅活血漿技術在我國的前景是美好的，其病毒滅活的效果已得到肯定，而分析亞甲藍化學法滅活對血漿成分影響則是保證血漿質量的基礎和前提。作者對2013年4月到 2014年3月間隨機抽取的新鮮血漿實施亞甲藍光化學法病毒滅活實驗，并對其滅活前后血漿成分進行了檢測。具體報告如下。

資料與方法

1 一般資料

2013年4月到2014年3月的一年間，每月隨機抽取新鮮血漿5袋，共計 60袋作為研究對象。每袋血漿的容量均為 200mL，分別在實施亞甲藍化學法病毒滅活前后在無菌條件下留取血漿標本（樣本的量為1mL），保存并待測。所有參與本次研究的血漿均嚴格按照相關操作規(guī)程進行采集制備，且從血漿的采集到血漿樣本的制備結束，總時長≤6h。60袋血漿中，A型、B型、O型、AB型分別有20袋、20袋、10袋和10袋，涉及的男性和女性人數(shù)均相等。

2 方法

2.1 儀器與試劑 費森尤斯傳統(tǒng)血袋，日立CR7型大容量離心機，費森尤斯無菌接駁機，威圖半自動生化分析儀，HDME-1A型醫(yī)用病毒滅活箱，MBPF-B200ML型一次性使用病毒滅活輸血過濾器，ACL-7000型血凝儀。總蛋白（TP）含量測定試劑盒、Fg含量測定試劑盒、凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ活性測定試劑盒。上述所有醫(yī)療耗材、儀器的質量均達標。

2.2 血漿病毒滅活 在經三聯(lián)采血袋采血、離心（3800r／min）后，將新鮮血漿分離出來，并通過無菌接駁機將新鮮血漿與病毒滅活裝置接通。使用亞甲藍壺將新鮮血漿沖入到血漿病毒滅活裝置之后，混合均勻，使其充分反應，并保持血漿中亞甲藍的濃度在1μmol／L，熱合斷離原血漿袋，將含血漿的光照袋置于病毒滅活柜中進行照射，照射的條件設定為：光照度 30000～40000光照單位，溫度控制 4～6℃，擺動頻率為 60次／min，照射時間 35min。照射和病毒滅活結束之后，采用濾器將亞甲藍濾去，導出并做好排氣等后續(xù)處理，速凍，獲得病毒滅活血漿。

2.3 檢測 采用全自動血凝儀經凝固法對病毒滅活血漿的多個凝血因子以及血漿纖維蛋白原（Fg）的含量進行測定。采用半自動生化儀經雙縮脲法對血漿蛋白的濃度進行測定。同時，采用分光光度法對血漿中的亞甲藍殘留量進行測定。具體測定方法：用含有1%乙酸的甲醇溶液作試劑空白，并在652～656nm波長處對其吸光度進行測定，按公式：供試血漿吸光度／對照血漿吸光度 ×對照血漿亞甲藍濃度進行計算。所有試劑盒均購自上海金標生物科技有限公司，要求在所有操作過程中嚴格按照試劑盒及儀器上的相關說明書進行操作。

3 統(tǒng)計學方法

本次實驗數(shù)據(jù)采用SPSS12.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料以平均值±標準差表示，對比采用配對 t檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

1 亞甲藍光化學法病毒滅活前后血漿各成分的變化比較

觀察亞甲藍光化學法病毒滅活項前后的總蛋白（TP）、血漿纖維蛋白原（Fg）以及凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ的變化情況可見，各項指標比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表1。

表1 亞甲藍光化學法病毒滅活前后血漿各成分的變化比較

2 亞甲藍光化學法病毒滅活后血漿中亞甲藍的殘留量

病毒滅活血漿中亞甲藍的殘留量僅為0.06± 0.01μmol／L，其濾出率可以達到94.0%。

討 論

亞甲藍屬于堿性生物染料的一種，它能夠與病毒的核酸、脂質包膜等相結合，并能在光照作用下發(fā)生反應［3］，生成單態(tài)氧，使得病毒的蛋白、核酸結構受到破壞，功能受到影響。研究證實，大部分脂質包膜病毒、部分非脂質包膜病毒都能夠被亞甲藍破壞［4］。因此，通過亞甲藍光化學法來對血漿進行病毒滅活的方法早在上世紀九十年代就已經出現(xiàn)，并在臨床應用中取得了良好的效果。

本文主要研究的是亞甲藍光化學法滅活血漿病毒對血漿成分的影響，它直接關系到病毒滅活后血漿的質量。新鮮血漿所含的成分較多，其中，不穩(wěn)定的凝血因子對光照及理化作用的敏感性相對較為敏感［5-6］，因而本研究就以亞甲藍光化學法病毒滅活前后血漿中的總蛋白（TP）、血漿纖維蛋白原（Fg）以及凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ的變化情況為依據(jù)進行含量對比與分析。研究發(fā)現(xiàn)，病毒滅活血漿中各項指標與滅活前相比，均出現(xiàn)一定程度的降低，但滅活前后比較，差異并無統(tǒng)計學意義，回收率均在80%以上，含量既符合國家質量標準，也符合國際要求，不會對臨床輸注效果造成影響。同時，對濾除后的亞甲藍殘留量進行測定，發(fā)現(xiàn)僅為0.06±0.01μmol／L，遠低于安全用量范圍。因此可以確定，在單袋血漿病毒滅活的過程中，亞甲藍光化學法對血漿質量影響相對較小，是一種有效方法，實用性強，安全性好，值得臨床推廣應用。

［1］何銳洪.研究亞甲藍光化學法病毒滅活對血漿有效成分的影響.國際檢驗醫(yī)學雜，2013，34（13）：1721-1722.

［2］趙淑艷.不同亞甲藍／光化學法滅活病毒對血漿成分的影響.中外健康文摘，2014，5（20）：120-121.

［3］徐國勝.亞甲藍光化學法病毒滅活對血漿質量的影響分析.中國醫(yī)藥指南，2013，11（20）：92-93.

［4］王超英.亞甲藍光化學法病毒滅活對血漿成分及白細胞殘留量的影響.臨床輸血與檢驗，2014，16（3）：290-292.

［5］馬靜瑤，徐元宏.亞甲藍光化學法病毒滅活血漿技術及應用.臨床輸血與檢驗，2012，14（3）：282-284.

［6］張艷華，李廣慶，楊丹，等.病毒滅活新鮮冰凍血漿前后各種成分含量比較.河北醫(yī)藥，2012，34（7）：1079-1080.

（張增武編輯）

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摘自《中國醫(yī)學論壇報》第42卷1期

2016年1月7日

Effect of Methylene Blue Photochemical Virus Inactivation on Plasma Components

LI Wen-ying
（Blood Components Preparation Department，Chaoyang Central Blood Station，Chaoyang 122000，China）

Objective To investigate the effect of methylene blue photochemical plasma virus inactivation method on plasma composition.Methods Total 60 bags of fresh plasma samples were selected randomly from April 2013 to March 2014，and 5 bags per month were used as the research object.The contents of coagulation factors，total protein（TP）and plasma fibrinogen（Fg）in plasma were determined respectively before and after methylene blue photochemical inactivation of plasma virus，and the residence of methylene blue was also detected.Results The TP，F(xiàn)G and coagulation factors II，V，VII，VIII，IX，X in plasma had not significantly difference before and after methylene blue photochemical virus inactivation（P＞0.05）.The residual amount of methylene blue in the virus-inactivated plasma was only 0.06±0.01 μmol／L，and its filtering rate could reach 94%.Conclusion The methylene blue photochemical method has a relatively small effect on plasma quality in the process of virus inactivation of single bag plasma sample，and it is practical，safe method and worthy of clinical application.

Methylene blue photochemical method； Plasma virus inactivation； Plasma components；Influence

10.11748／bjmy.issn.1006－1703.2016.01.030

2015-09-17；

2015-10-16