李仕偉，林艷麗，瞿 衛(wèi)，王自正

（南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院 南京臨床核醫(yī)學(xué)中心，江蘇 南京210006）

·研究報(bào)告·

探討EB病毒抗體對鼻咽癌篩查和療效的臨床價值

李仕偉，林艷麗，瞿 衛(wèi)，王自正

（南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京醫(yī)院 南京臨床核醫(yī)學(xué)中心，江蘇 南京210006）

鼻咽癌； EB病毒； VCA-IgA； EA-IgG； NA1-IgA

EB病毒（epstein-barr virus，EBV）屬皰疹病毒科，為線形雙鏈DNA病毒，人類是 EBV唯一天然宿主。EBV在口咽部上皮細(xì)胞內(nèi)增殖，然后感染淋巴細(xì)胞。據(jù)報(bào)道，我國95%以上人群在3～5歲時已感染了EBV［1］。這些被感染的B淋巴細(xì)胞大量進(jìn)入血液循環(huán)而造成全身性感染，并可長期潛伏在人體淋巴組織中，當(dāng)機(jī)體免疫功能低下時，潛伏的 EBV活化形成復(fù)發(fā)感染。鼻咽癌與 EBV感染的關(guān)系十分密切，絕大多數(shù)鼻咽癌患者中均具有較高的抗EBV抗原的抗體［2］。故我們檢測 EBV相關(guān)抗原的抗體（VCA-IgA、EA-IgG和NA1-IgA）對鼻咽癌患者和正常人組進(jìn)行檢測，其結(jié)果如下：

資料與方法

1 一般資料

收集2014年3月至2015年6月對已確診鼻咽癌患者59例，其中（男45例，女19例），年齡37～75歲。采用鼻咽癌2008分期以鼻咽鏡活檢鼻咽組織明確病理檢查結(jié)果為診斷依據(jù)，鼻咽癌 EBV攜帶者以抽血血清中的抗體陽性為確診依據(jù)，具體標(biāo)準(zhǔn)：VCA-IgA、EA-IgG和NA1-IgA稀釋度1∶10。并在治療后進(jìn)行三項(xiàng)抗體復(fù)查。同期體檢健康者 50例為照組，男34例，女16例；年齡22～70歲。

2 方法

采用酶聯(lián)免疫法。VCA-IgA、EA-IgG和NA1-IgA的測定實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，放置室內(nèi)溫（18～25℃）平衡30分鐘，取1包洗液用500mL純化水溶解后備用，將恒溫箱或水浴箱設(shè)備溫度調(diào)整37℃，待溫度穩(wěn)定后使用。實(shí)驗(yàn)步驟：取出一定量的包被孔，編號。設(shè)空白對照1孔、陰性和陽性對照各 2孔，用微量加樣器加入陰性對照和陽性對照各 100μL／孔，其余孔加入樣品稀釋液100μL，再分別加入10μL待檢樣本，置37℃溫育30分鐘。洗板6次。最后在吸水紙上拍干。每孔加入酶結(jié)合物100 μL（空白孔不加），貼上板貼。置37℃溫育 20分鐘。再洗板 6次，最后在加入底物液、顯色液各 50μL，輕輕混勻，置 37℃避光反應(yīng) 10分鐘，每孔加入終止液50μL，振蕩混勻后立即測試結(jié)果。用 BIO-RAD MOGEL680酶聯(lián)免疫分析儀450nm單波長檢測或用450／（620～630）nm雙波長測定各孔的吸光值。依據(jù)試劑盒說明書，VCA-IgA、EA-IgG和 NA1-IgA有效判斷：陰性對照 OD值不高于0.12，陽性對照不低于0.400。CUT OFF值 ＝0.1＋陰性對照平均OD值（該值不足0.05時，按0.05計(jì)算）。樣本OD值大于CUT OFF值為陽性，否則為陰性。

3 統(tǒng)計(jì)分析

結(jié) 果

59例鼻咽癌患者 EB病毒抗體三項(xiàng)檢測結(jié)果比較見表1。

表1 59例鼻咽癌患者 EB病毒抗體三項(xiàng)檢測結(jié)果與正常對照組比較（±s）

表1 59例鼻咽癌患者 EB病毒抗體三項(xiàng)檢測結(jié)果與正常對照組比較（±s）

注：治療前與正常人比較，P＜0.01；治療前與治療后比較，P＞0.05

項(xiàng)目 正常人 治療前治療后1月 3月 6月VCA-IgA 0.024±0.014 2.141±0.041 1.894±0.06 4 1.07±0.023 1.092±0.014 5 1.784±0.021 1.784±0.021 EA-IgG 0.023±0.017 2.014±0.312 1.845±0.210 1.891±0.121 1.715±0.019 NA1-IgA 0.025±0.019 1.347±0.061 1.121±0.03

討 論

WHO腫瘤分類將鼻咽癌分為三種類型：Ⅰ型鱗狀細(xì)胞癌、Ⅱ型為非角化癌、Ⅲ型為未分化癌。后兩者均可歸為未分化癌。其中，臨床上最常見是鱗狀細(xì)胞癌。

目前認(rèn)為有三個最主要的因素可能參與鼻咽癌的發(fā)生過程：①遺傳因素，如不正常的人類白細(xì)胞抗原（human leucocyte igen，HLA）基因；②病毒因素，如EB病毒早期感染和長期反復(fù)感染，導(dǎo)致鼻咽部上皮永生化，并使其進(jìn)一步惡化。③環(huán)境因素，吸煙等［3］，體外實(shí)驗(yàn)表明［4］，香煙煙霧提取物促進(jìn) EBV復(fù)制，吸煙不僅可以增加個人鼻咽癌患病率而且可以在健康男性的血清中參與 EBV的激活。

從表1中59例鼻咽癌患者檢測 EBV三項(xiàng)抗體研究表明，鼻咽癌患者同時伴有一種或多種的抗體存在，我們檢測EBV三項(xiàng)抗體中以VCA-IgA早期抗原免疫球蛋白A抗體（VCA-IgA）陽性率高達(dá)81.6%～93.0%，治療前與正常對照組50例檢測 EBV三項(xiàng)抗體OD值相比較（P＜0.01），治療后一月至半年，患者抗體的滴度雖有下降，但治療前與治療后比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證明EBV血清學(xué)檢測不能準(zhǔn)確預(yù)測鼻咽癌患者的治療效果和預(yù)后。其原因是鼻咽癌患者雖經(jīng)治療，但有90%以上的人感染EBV病毒并且持續(xù)存在，這是因?yàn)?EBV可以在有免疫的機(jī)體內(nèi)通過相關(guān)免疫逃避作用機(jī)制而長期潛伏［5］。

綜上所述，EBV抗體三項(xiàng)可作鼻咽癌高危人群的早篩，當(dāng)血清學(xué)檢測呈陽性，觸診頸部淋巴結(jié)腫大由可疑是鼻咽癌，若發(fā)現(xiàn)臨床鼻咽鏡下有可疑變化，應(yīng)送病理科活檢，最好在鼻咽纖維鏡下作細(xì)致觀察，看有無微小病灶；若鼻咽鏡下無異常發(fā)現(xiàn)，但EBV血清學(xué)檢查滴度較高或抗體檢測陽性時，則應(yīng)定期隨防觀察，進(jìn)一步請?？漆t(yī)生檢查，早診斷、早治療，所以EB病毒的診斷鼻咽癌高危人群進(jìn)行定期篩查具有重要意義。

［1］蘇梨云.徐錦，孫家娥，等.EB病毒感染實(shí)驗(yàn)室診斷方法棎討.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2006，21（4）：513-516.

［2］Henle G，Henle W.Epstein-Barr virus-specific lgA serum antibodies as an outstanding feature of nasopharyngeal carcinoma.lnt J Cancer，1976，17：1.

［3］Chang E T，Adami H O.The enigmatic epidemiogy of nasophryngeal carcioma.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2006，15（10）：1766-1777.

［4］Xu F H，Xiong D，Xu Y F，et al An epidmiological and molecular study of the relationship between smoking，risk of nasopharyngeal carcinoma，and Epstein-Barr virus activation.J Nat Canc Inst，2012，104（18）：1396-1410.

［5］李群.EB病毒VCA-IgA和EA-IgA抗體與鼻咽癌診斷的關(guān)系.海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，13（2）：180-183.

（李 凌編輯）

10.11748／bjmy.issn.1006－1703.2016.01.034

2015-09-13；

2015-11-23

林艷麗