申屠敏華++王賽斌++李棟++楊爐剛++陳向東

[摘要] 目的 研究苦丁茶對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠心室重構(gòu)的影響。 方法 將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為SHR苦丁茶處理組、SHR空白組以及WKY對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)8周后觀察大鼠血壓、心肌厚度、LVWI值、CVF值、PVCA值、H-E和Masson染色病理學(xué)情況以及心肌AdipoR1 mRNA與AdipoR1蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果 苦丁茶作用8周后，SHR苦丁茶處理組大鼠收縮壓、左心室厚度、LVWI值、CVF值和PVCA值均低于SHR空白組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。病理學(xué)改變上SHR苦丁茶處理組心肌纖維化程度低于SHR空白組。SHR苦丁茶處理組大鼠AdipoR1 mRNA和AdipoR1蛋白相對(duì)表達(dá)量相比SHR空白組明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 苦丁茶可以抑制自發(fā)性高血壓大鼠心肌重構(gòu)。

[關(guān)鍵詞] 苦丁茶；自發(fā)性高血壓；心肌重構(gòu)；收縮壓；心肌纖維化

[中圖分類號(hào)] R285.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-9701（2016）26-0030-04

高血壓作為常見(jiàn)的心血管疾病，其發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)[1]，常合并腦卒中、心肌梗死、心力衰竭及慢性腎臟病等主要并發(fā)癥，不僅致殘、致死率高，而且嚴(yán)重消耗醫(yī)療和社會(huì)資源，給家庭和國(guó)家造成沉重負(fù)擔(dān)[2]。高血壓通過(guò)壓力負(fù)荷及一系列神經(jīng)內(nèi)分泌因素，引起心室重構(gòu)，增加心力衰竭的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)[3]。苦丁茶是我國(guó)一種常見(jiàn)的飲品，已有研究將苦丁茶用于高血壓的治療中，本文擬探討苦丁茶對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠心室重構(gòu)的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

本實(shí)驗(yàn)采用12只SHR大鼠，購(gòu)于中科院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，均為雄性，12周齡，體重200～250 g，選擇自發(fā)性高血壓（SHR）背景品系WKY大鼠6只作為對(duì)照。動(dòng)物均飼養(yǎng)于溫州醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心SPF級(jí)別動(dòng)物房，將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為SHR苦丁茶處理組、SHR空白組以及WKY對(duì)照組，每組各6只。

實(shí)驗(yàn)所用苦丁茶選擇磐安當(dāng)?shù)夭枞~生產(chǎn)基地，為大冬葉青苦丁茶。精選優(yōu)質(zhì)茶葉，經(jīng)過(guò)粉碎機(jī)粉碎，制成茶粉，灌胃時(shí)，將茶葉粉末溶解在蒸餾水中（濃度為1.0 g/100 mL）即可使用。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

SHR空白組與WKY對(duì)照組給予蒸餾水灌胃，SHR苦丁茶處理組給予苦丁茶溶液灌胃，每天上午9：00開(kāi)始灌胃給藥1次（劑量為1.0 g/kg），連續(xù)進(jìn)行8周。每周測(cè)量一次體重，并根據(jù)體重變化調(diào)整給藥劑量。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）血壓測(cè)定：每周日采用尾袖法通過(guò)無(wú)創(chuàng)血壓儀測(cè)量清醒安靜狀態(tài)下的各組大鼠尾動(dòng)脈的收縮壓和心率。測(cè)量之前加熱大鼠10 min至37℃，使尾動(dòng)脈充盈以便測(cè)量。測(cè)壓環(huán)置于大鼠尾根部，然后讓大鼠休息3～5 min，開(kāi)始測(cè)量。每次取連續(xù)3次血壓差值不超過(guò)5 mmHg的血壓平均值作為應(yīng)測(cè)血壓值，并記錄心率。（2）灌胃8周后，各組大鼠分別測(cè)定體重（BW），然后將大鼠處死取出左心室測(cè)量左心室重量（LVW），計(jì)算左室重量指數(shù)（LVWI=LVW/BW），并測(cè)量左心室厚度；電鏡、H-E染色和Masson染色觀察心肌組織形態(tài)學(xué)改變，并測(cè)定心肌膠原容積分?jǐn)?shù)（CVF）和血管周圍膠原面積（PVCA）；RT-PCR方法檢測(cè)心肌組織心肌脂聯(lián)素受體1 mRNA（AdipoR1 mRNA）表達(dá)水平，蛋白質(zhì)印跡法（Western-blot）檢測(cè)心肌組織AdipoR1蛋白表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究使用的統(tǒng)計(jì)分析軟件為IBM公司的SPSS 21.0，本研究均為計(jì)量資料，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，進(jìn)行t檢驗(yàn)前先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，三組計(jì)量資料間比較采用方差分析。檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)取α=0.05，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 收縮壓和左心室肥厚情況

隨機(jī)分組前三組大鼠的血壓平均值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），SHR苦丁茶處理組與SHR空白組血壓相似，但是均顯著高WKY對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)8周后，SHR空白組及WKY對(duì)照組血壓與實(shí)驗(yàn)前比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而SHR苦丁茶處理組血壓顯著下降，與實(shí)驗(yàn)前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。實(shí)驗(yàn)8周后三組大鼠的平均血壓比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中SHR苦丁茶處理組大鼠血壓平均值小于SHR空白組，表明苦丁茶可顯著降低自發(fā)性高血壓大鼠的血壓，見(jiàn)表1。

實(shí)驗(yàn)8周后三組大鼠間LVWI平均值、左室壁厚度平均值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中SHR苦丁茶處理組實(shí)驗(yàn)8周后LVWI值和左室壁厚度均小于SHR空白組，說(shuō)明苦丁茶可在一定程度上抑制左心室肥厚的進(jìn)程，見(jiàn)表2。

2.2 病理學(xué)改變

2.2.1 H-E染色 實(shí)驗(yàn)8周后大鼠心肌H-E染色顯示，WKY對(duì)照組心肌纖維排列整齊致密，SHR苦丁茶處理組和SHR空白組心肌纖維沒(méi)有WKY對(duì)照組排列的整齊致密，但SHR苦丁茶處理組較SHR空白組心肌纖維排列更整齊致密。SHR空白組心肌排列紊亂，存在斷裂帶。提示苦丁茶處理后大鼠心肌良性肥厚，改善心肌纖維化。見(jiàn)封三圖2。

2.2.2 Masson染色 實(shí)驗(yàn)8周后大鼠心肌Masson染色顯示，WKY對(duì)照組心肌間質(zhì)僅見(jiàn)少量膠原纖維，與WKY對(duì)照組相比，SHR苦丁茶處理組和SHR空白組心肌間質(zhì)膠原纖維均明顯增加，但SHR苦丁茶處理組較SHR空白組少；提示苦丁茶處理可改善大鼠心肌纖維化。見(jiàn)封三圖3。

2.3 三組心肌CVF和PVCA情況

心肌膠原成分增多是心肌纖維化的主要表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)8周后，相比于WKY對(duì)照組，SHR空白組大鼠血管周圍和心肌間質(zhì)的膠原明顯較多，可見(jiàn)心肌組織被大量膠原纖維聯(lián)結(jié)成網(wǎng)狀包繞，而SHR苦丁茶處理組的情況較SHR空白組心肌纖維化有所改善。三組大鼠心肌CVF和PVCA平均值間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中SHR苦丁茶處理組和SHR空白組的CVF和PVCA均顯著高于WKY組；而SHR苦丁茶處理組的CVF和PVCA明顯低于SHR空白組。見(jiàn)表3。

2.4 三組心肌AdipoR1 mRNA與AdipoR1蛋白表達(dá)情況

熒光定量RT-PCR和Western-blot檢查結(jié)果顯示，三組間AdipoR1 mRNA相對(duì)表達(dá)量、AdipoR1蛋白相對(duì)表達(dá)量差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中與WKY對(duì)照組大鼠相比，SHR處理組大鼠AdipoR1 mRNA和AdipoR1蛋白相對(duì)表達(dá)量均低，但是相對(duì)于SHR對(duì)照組，SHR苦丁茶處理組大鼠AdipoR1 mRNA和AdipoR1蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯增加。見(jiàn)表4。

3 討論

心室重構(gòu)是指心肌對(duì)壓力或容量超負(fù)荷產(chǎn)生代償性、適應(yīng)性改變，包括心肌細(xì)胞肥大、間質(zhì)纖維化和心肌細(xì)胞凋亡等，進(jìn)而發(fā)展為心力衰竭[4]。高血壓通過(guò)影響機(jī)體內(nèi)皮功能、細(xì)胞內(nèi)鈣超載、炎癥反應(yīng)、腎素血管緊張素系統(tǒng)等造成心血管重構(gòu)[5]。心臟結(jié)構(gòu)的重構(gòu)是高血壓引起的最重要的靶器官損害，心臟的重構(gòu)主要表現(xiàn)為心肌間質(zhì)纖維化和心肌肥厚缺血缺氧，而心肌間質(zhì)纖維化在心力衰竭的發(fā)生過(guò)程中更為重要[6]。

高血壓心室重構(gòu)發(fā)生的機(jī)制還不是完全清楚，但是近年來(lái)有許多研究顯示氧化應(yīng)激參與心室重構(gòu)的發(fā)生發(fā)展[7]。周淑嫻等[8]研究了大鼠急性心肌梗死后氧化應(yīng)激對(duì)心室重構(gòu)的影響，得出氧化應(yīng)激參與心室重構(gòu)的病理生理過(guò)程的結(jié)論，建議干預(yù)氧化應(yīng)激可作為防治心室重構(gòu)的手段。在心室重構(gòu)的過(guò)程中，核轉(zhuǎn)錄因子kappa B（NF-κB）激活，其下游TNF-α、白細(xì)胞介素1（IL-1）和白細(xì)胞介素6（IL-6）等因子表達(dá)增加，這些炎性因子的增加將加速心肌細(xì)胞凋亡以及心肌纖維化，另外，NF-κB的激活還可以進(jìn)一步調(diào)誘導(dǎo)型NOS/NO的表達(dá)，加重心肌組織損傷[9]。

眾多臨床研究已證實(shí)血管緊張素抑制劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑類（ACEI）、他汀類以及維生素C、維生素E等抗氧化藥物可以延緩心室重構(gòu)的發(fā)生和發(fā)展[4]。另外，具有抗氧化、清除自由基的中藥也廣泛用于心室重構(gòu)的防治，參附注射液[10]、三七總皂苷[11]、黃芪苷Ⅳ[12]、丹參酮ⅡA[13]、燈盞花[14]、葡萄籽原花青素[15]、通心絡(luò)[16]、心脈康[17]等中藥或者中藥提取成分均具有干預(yù)心室重構(gòu)的作用。

苦丁茶作為應(yīng)用歷史悠久的藥食兩用中藥，古代本草典籍中稱其為“瓜盧”、“皋盧”、“過(guò)羅”等，又因其味較苦，可以作茶飲而被稱為苦丁茶?？喽〔韬胸S富的茶多酚，可以很好地保護(hù)心血管?，F(xiàn)有研究報(bào)道苦丁茶具有降血脂[18]、抗血小板凝集[19]、擴(kuò)血管[20]、清除NO2-和·OH的作用[21]，可以降低血壓及保護(hù)高血壓引起的靶器官損傷作用[22]，在臨床上也有利用治療高血壓的臨床研究，黃鎮(zhèn)才[23]利用苦丁茶治療35例高血壓病患者，觀察治療兩個(gè)月，降壓效果明顯，總有效率達(dá)85.7 %；潘桂等[24]利用苦丁茶聯(lián)合維生素C治療高血壓病，降壓效果明顯，長(zhǎng)期服用，1年后隨訪血壓一直維持正常范圍。但是還沒(méi)有苦丁茶對(duì)高血壓心室重構(gòu)的文獻(xiàn)發(fā)表。

本研究顯示，苦丁茶作用后8周后大鼠收縮壓明顯降低，可在一定程度上抑制左心室肥厚的進(jìn)程，降低LVWI值。病理學(xué)改變上可改善心肌纖維化，SHR苦丁茶處理組的CVF和PVCA明顯低于SHR空白組，且SHR苦丁茶處理組大鼠AdipoR1 mRNA相對(duì)表達(dá)量和AdipoR1蛋白相對(duì)表達(dá)量較SHR空白組明顯增加，從而起到抑制大鼠心肌重構(gòu)的作用。

綜上所述，苦丁茶作為藥食兩用的中藥，日常生活中可以長(zhǎng)期飲用，可有效預(yù)防高血壓所致的心室重構(gòu)?？喽〔韪深A(yù)心室重構(gòu)的作用可能與其所含的三萜皂苷、多酌類、多糖類和揮發(fā)油類等化學(xué)成分相關(guān)[25]，本研究證實(shí)苦丁茶可干預(yù)心室重構(gòu)過(guò)程，為在苦丁茶中尋找具有抑制心室重構(gòu)過(guò)程的單體化學(xué)成分提供證據(jù)，對(duì)發(fā)掘祖國(guó)中醫(yī)藥寶藏具有重要意義。

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（收稿日期：2016-05-07）