薄彧坤　趙國君　楊　丹（.包頭醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院包頭04040；.包頭市第四醫(yī)院藥劑科包頭04030）

蓽撥中胡椒堿的提取方法研究△

薄彧坤1趙國君2楊丹1（1.包頭醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院包頭014040；2.包頭市第四醫(yī)院藥劑科包頭014030）

目的：確定蓽撥中胡椒堿的最佳提取方法。方法：采用正交試驗(yàn)方法，尋找最佳的提取方案。結(jié)果：通過正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)數(shù)據(jù)可知，最佳實(shí)驗(yàn)條件為：乙醇濃度80％、提取次數(shù)2次，提取時間40min。結(jié)論：該條件可以準(zhǔn)確、有效地提取胡椒堿。

蓽撥 胡椒堿 正交試驗(yàn)

1　前言

蓽撥出自《開寶本草》,是多年生草質(zhì)藤本植物。干燥近成熟的果穗為蓽撥的藥用部分，果實(shí)含胡椒堿、蓽撥寧、揮發(fā)油、芝麻脂素等化學(xué)成分。

隨著人們收入水平的提高，高血壓、心臟病、心腦血管疾病的發(fā)病率上升。這些疾病都嚴(yán)重影響生活質(zhì)量。近些年藥理研究發(fā)現(xiàn)蓽撥有抗氧化、抗炎殺菌、抗腫瘤、鎮(zhèn)靜、抗焦慮、抗胃潰瘍、降血脂、抗動脈粥樣硬化等等藥理作用。蓽撥中提取的有效成分胡椒堿，不僅能夠增加人體對維生素B及β—胡蘿卜素的吸收，還具有降壓、降血脂、抗動脈粥樣硬化等等藥理作用，而且價格相對低廉、經(jīng)濟(jì)實(shí)用，具有很好的開發(fā)前景。本實(shí)驗(yàn)以胡椒堿為指標(biāo)，對蓽撥的提取方法進(jìn)行優(yōu)化，提高蓽撥中胡椒堿的提取率，對以胡椒堿為原料的藥品生產(chǎn)工藝有重要意義。

2　正文

2.1儀器、試劑、材料、試藥、樣品

儀器：高效液相色譜儀（島津LC-20AT）；超聲儀（天津市恒奧科技發(fā)展有限公司HS6150D）；過濾裝置；電子天平（上海精科天美科學(xué)儀器有限公司FA1204B）；紫外分光光度儀（TU1810北京普析通）

材料：燒杯；容量瓶；移液管；膠頭滴管

試劑：甲醇（色譜純）；純凈水；無水乙醇（分析純）

試藥：胡椒堿對照品（包頭市雅新生物科技有限公司批號：MUST-13080202）

樣品：蓽撥藥材（亳州市中藥飲片廠批號：20130310）。

2.2方法和結(jié)果

2.2.1溶液的制備

對照品溶液的制備：精密稱取胡椒堿對照品4mg，置5mL棕色量瓶中，加無水乙醇制成每1mL含0.8mg的溶液。

蓽撥藥材供試品液的制備：取蓽撥粉末約1g，加無水乙醇5mL，超聲處理20min，濾過，取濾液備用。

2.2.2最大吸收波長的選擇：取胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)品4mg用無水乙醇定容在5mL容量瓶中，用移液管取0.5mL定容在50mL容量瓶中，紫外分光光度儀測得最大吸收波長為343nm。

2.2.3方法學(xué)考察

2.2.3.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密吸取對照品溶液1.25、2.5、5.0、 7.5mL、10.0mL置10mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，在343nm處測得峰面積，以對照品濃度C（μg/mL）為橫坐標(biāo)X，以峰面積為縱坐標(biāo)Y繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得的標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為Y=107826X+14048，R2=0.9997（其中Y表示峰面積；X表示對照品濃度）。結(jié)果表明，胡椒堿在5.1～40.8μg/mL濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。結(jié)果見圖1。

2.2.3.2精密度試驗(yàn)：精密吸取對照品溶液2.5mL至5.0mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，在上述條件下重復(fù)測定5次。在上述條件下測定峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求的含量的RSD為0.78％（n=5）。結(jié)果表明精密度較好。

2.2.3.3重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱取同一批樣品1.0g，按“供試品溶液配制”項(xiàng)下操作，配置6份供試品，測的峰面積分別帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求的含量的RSD為1.6％（n=6）。結(jié)果表明本研究方法重現(xiàn)性好。

2.2.3.4加樣回收率試驗(yàn)：精密稱取已知含量的同一批樣品0.1g三份，分別精密加入一定量的胡椒堿標(biāo)準(zhǔn)品，按“供試品溶液配制”項(xiàng)下操作，配置3份供試品，在上述條件下測定峰面積，計(jì)算胡椒堿的平均回收率為100.7％，結(jié)果表明該方法回收率良好。

2.2.3.5穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一份樣品溶液在室溫下放置，分別在0，1，2，4，8，16，32，72h測定，RSD為0.91％（n=6）。結(jié)果表明胡椒堿在72h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.4正交試驗(yàn)方法與結(jié)果

2.2.4.1影響因素的選擇：根據(jù)胡椒堿成分提取相關(guān)文獻(xiàn)并結(jié)合實(shí)際，選擇乙醇濃度、提取次數(shù)、提取時間為影響因素，見表2，采用SPSS13.0的Conjoint模塊功能進(jìn)行正交試驗(yàn)與數(shù)據(jù)處理。

表2　因素水平表

2.2.4.2正交試驗(yàn)供試品的制備與測定：分別取蓽撥粉末約1g置于九個燒杯中，按表2設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)條件分別測定胡椒堿含量，結(jié)果見表3。

表3　實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表

2.2.4.3正交試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理

表4　數(shù)據(jù)結(jié)果表

表5　方差分析表

2.2.5結(jié)果：根據(jù)正交試驗(yàn)所得的數(shù)據(jù)可知，最佳提取條件為：乙醇濃度80％、提取次數(shù)為2次、提取時間為40min。

2.3討論

2.3.1最大波長：經(jīng)紫外分光光度法確認(rèn)可知，胡椒堿最大吸收波長為343nm。

2.3.2影響因素：在正交試驗(yàn)過程中，通過表4中的主效應(yīng)方差分析，按表4的數(shù)據(jù)可見因素主次順序?yàn)锽>A>C，因此對蓽撥中胡椒堿提取影響因素最大的是提取次數(shù)。

2.3.3溶劑選擇：在實(shí)驗(yàn)過程中對三種提取溶液的優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行了分析，甲醇雖然價格相對較低，但提取的效果不理想；乙酸乙酯價格較高、提取效果不理想、揮發(fā)性較強(qiáng)，而且長期吸入會對人的身體健康造成很大危害；乙醇的提取率很高，而且安全，但相對甲醇成本較高。通過權(quán)衡利弊，本實(shí)驗(yàn)采用乙醇作為溶劑對胡椒堿進(jìn)行提取，結(jié)果顯示的最佳提取工藝對小規(guī)模生產(chǎn)有借鑒意義。

[1]侯文潔，張衛(wèi)剛，薛文嬌.胡椒中胡椒堿的提取工藝研究[J].中國調(diào)味品，2008（5）：56-58.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].第一部，中國醫(yī)藥科技出版社，2010：219.

[3]劉笑，侯順超，顧林.胡椒堿不同提取方法的比較研究[J].中國釀造，2015，34（2）：47-50.

Study on extraction method of piperine in piperlongumine△

Bo Yukun1Zhao Guojun2Yang Dan1（1.School of medicine,Baotou Medical College,Baotou 014040；2.Department of pharmacy,Baotou Fourth Hospital,Baotou 014030）

Objective∶Determination of piperine in extraction method Methods∶According to the orthogonal test method,find the best extraction scheme.Results∶.From the orthogonal experimental design data,the best experimental conditions were∶ethanol concentration 80％,extraction times 2 times,extraction time was 40min.Conclusion∶the conditions can be accurate,effective alkali extraction of pepper.

Piper Ba Piperine Orthogonal test

R 284.1

B

1672-8351（2016）11-0120-02

△內(nèi)蒙古自治區(qū)教育廳課題，編號：NJZY14263