楊瑩瑩，葉松華，馮夏珍，王曉燕，宋高林，阮文輝

（山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院，山西太原　030006）

黃刺玫果中VC的含量測(cè)定

楊瑩瑩，葉松華，馮夏珍，王曉燕，宋高林，阮文輝

（山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院，山西太原030006）

采用改進(jìn)后的2，6-二氯靛酚-紫外分光光度法測(cè)定黃刺玫果中VC的含量。結(jié)果顯示，VC質(zhì)量濃度在2.03～39.27 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，R2=0.999 9，加樣回收率為98.82%～101.57%，RSD值為0.90%。改進(jìn)后的方法操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性好，準(zhǔn)確性和重復(fù)性能滿足試驗(yàn)需求，適用于黃刺玫果中VC的含量測(cè)定。

黃刺玫果；VC；紫外分光光度法

黃刺玫果為薔薇科薔薇屬野生落葉灌木黃刺玫（Rosa xanthina Lindl）的成熟果實(shí)，廣泛分布于我國(guó)北方各省的山區(qū)和丘陵地帶［1］。黃刺玫果富含多種維生素和氨基酸成分，尤其是VC含量豐富，因此有國(guó)外藥典收載其用于治療壞血病?！吨兴幋筠o典》謂黃刺玫果有健脾理氣、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)的作用［2］，現(xiàn)代研究表明其還具有防治心血管疾病和抗衰老等作用［3］。黃刺玫果作為一種藥食同源的天然保健食品，正被日益重視和廣泛應(yīng)用。

目前，文獻(xiàn)報(bào)道的VC含量測(cè)定方法有多種，主要有高效液相色譜法［4］、滴定分析法［5］、熒光法［6］、2，4-二硝基苯肼比色法以及紫外分光光度法［7］等。其中，滴定法步驟繁瑣、滴定終點(diǎn)不易判斷，高效液相色譜法、熒光法相對(duì)操作較簡(jiǎn)便且成本較高，2，4-二硝基苯肼比色法操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)。相比之下，紫外分光光度法操作簡(jiǎn)便、干擾因素少，應(yīng)用更為廣泛。由于VC本身不穩(wěn)定，直接紫外法測(cè)定過(guò)程中穩(wěn)定性較差，且不適用于深色樣品的測(cè)定。本文選用2，6-二氯靛酚-紫外分光光度法（間接紫外法），即將定量的2，6-二氯靛酚染料與還原型VC發(fā)生氧化還原反應(yīng)，多余的染料在酸性條件下顯色，經(jīng)溶劑萃取后測(cè)定其吸光度，計(jì)算VC含量。試驗(yàn)在傳統(tǒng)方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了條件優(yōu)化，改進(jìn)后的方法專屬性強(qiáng)、穩(wěn)定性好，且不受樣品本身顏色的影響，適用于黃刺玫果中VC的含量測(cè)定。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

野生黃刺玫果，采自山西省左權(quán)縣；VC對(duì)照品（分析純，99.7%），天津市申泰化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品；試驗(yàn)用水為蒸餾水；其他試劑均為分析純。

AB104.N型分析天平，上海托利-梅特勒儀器有限公司產(chǎn)品；YK-1000A型高速粉碎機(jī)，山東省青州市益康中藥機(jī)械有限公司產(chǎn)品；UV3000型紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì)，日本島津公司產(chǎn)品。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.1VC標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密稱取VC對(duì)照品100 mg，置于100 mL容量瓶中，用2%偏磷酸溶解，并稀釋至刻度。得質(zhì)量濃度為1 mg/mL的VC標(biāo)準(zhǔn)液，備用。

1.2.22，6-二氯靛酚標(biāo)準(zhǔn)液的配制

取碳酸氫鈉104 mg，溶于400 mL蒸餾水中，精確稱取2，6-二氯靛酚50 mg置于250 mL容量瓶中，用適量上述溶液溶解，冷卻后稀釋至刻度，過(guò)濾，置于棕色瓶中，冷藏備用。每次用前用VC標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)定，并計(jì)算滴定度。

1.2.3供試品溶液的制備

取黃刺玫果若干，粉碎后分離可食用部分，稱取10 g，加入1%檸檬酸溶液100 mL，混勻，40℃下超聲提取30 min，加入白陶土10 g混勻，脫色，過(guò)濾。取續(xù)濾液5 mL，加入乙酸鈉緩沖溶液（pH值4.0）5 mL，2，6-二氯靛酚2 mL，混勻，精密吸取二甲苯10 mL，振蕩萃取20 s，靜置分層，取二甲苯層作為供試品溶液，于500 nm處測(cè)定吸光度。由于脫色后樣品仍為淺紅色，為防止樣品本身顏色的影響，以不加入2，6-二氯靛酚染料的樣品經(jīng)上述步驟處理作為空白對(duì)照，扣除空白干擾。

2　結(jié)果與分析

2.1提取條件的選擇

2.1.1提取溶劑的選擇

不同提取溶劑對(duì)VC含量的影響見(jiàn)圖1。

圖1　不同提取溶劑對(duì)VC含量的影響

由于VC是一種不穩(wěn)定的維生素，在測(cè)定時(shí)選擇適宜的提取溶劑，不但可以提高VC的穩(wěn)定性，還可提高提取效率。試驗(yàn)比較了2%偏磷酸、2%草酸以及不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)檸檬酸作為提取溶劑對(duì)VC含量測(cè)定的影響。結(jié)果表明，1%檸檬酸作為提取溶劑時(shí)VC的含量最高，故選擇1%檸檬酸溶液作為提取溶劑。

2.1.2超聲時(shí)間的選擇

傳統(tǒng)方法未對(duì)樣品進(jìn)行超聲處理，本研究經(jīng)預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)超聲處理后VC含量有明顯提高，因此對(duì)超聲時(shí)間進(jìn)行了考察。在其他條件不變的情況下，分別在超聲0，10，20，30，40，50，60 min時(shí)測(cè)定其吸光度。

不同超聲時(shí)間對(duì)VC含量的影響見(jiàn)圖2。

由圖2可知，超聲30 min時(shí)提取效率達(dá)到最高；隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng)，提取率趨于穩(wěn)定但略有降低。因此，本試驗(yàn)選擇超聲時(shí)間為30 min。

2.1.3超聲溫度的選擇

圖2　不同超聲時(shí)間對(duì)VC含量的影響

在超聲的同時(shí)進(jìn)行適當(dāng)?shù)乃〖訜?，?duì)VC的提取率也有較大影響。取供試品4份，分別在30，40，50，60℃的恒溫水浴中超聲提取30 min后測(cè)定吸光度。結(jié)果顯示，在40℃水浴時(shí)VC的含量較高，而高于40℃時(shí)含量有所降低，可能是溫度升高VC加速氧化導(dǎo)致。因此，試驗(yàn)選擇40℃作為超聲溫度。

2.2方法學(xué)考察

2.2.1波長(zhǎng)的選擇

取適量樣品按1.2.3操作后，以二甲苯為參比溶液，將2，6-二氯靛酚標(biāo)準(zhǔn)液和樣品供試液于200～700 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果顯示，二者在500 nm處有最大吸收值，且吸收峰相同；由于黃刺玫果中含有花色素、黃酮等成分，其提取液有較深顏色，即使經(jīng)白陶土脫色后仍有顏色，為防止干擾，以相同樣品經(jīng)相同操作但不加2，6-二氯靛酚作為空白對(duì)照進(jìn)行基線掃描，結(jié)果顯示在500 nm處幾乎沒(méi)有吸收，故試驗(yàn)選擇500 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2.2線性關(guān)系考察

分別精密吸取2，6-二氯靛酚0.1，0.5，1.0，1.5，1.9 mL置于20 mL具塞試管中（相當(dāng)VC質(zhì)量濃度分別為40，30，20，10，2 μg/mL），用碳酸氫鈉溶液補(bǔ)足體積至2 mL，依次加入1%的檸檬酸溶液5 mL、乙酸鈉緩沖溶液（pH值4.0）5 mL，混勻，精密吸取二甲苯10 mL，振蕩萃取20 s，靜置分層后取上層溶液，于500 nm處測(cè)定吸光度，同時(shí)做空白對(duì)照。以吸光度為縱坐標(biāo)、2，6-二氯靛酚體積為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=0.292 9X-0.002 9，R2=0.999 9；相當(dāng)于VC質(zhì)量濃度在2.03～39.27 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖3。

圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2.3穩(wěn)定性試驗(yàn)

由于VC極易被空氣中的氧氣氧化，因此需考察樣品測(cè)定中的穩(wěn)定性。取供試品適量按1.2.3操作后分別放置0，30，60，90 min后測(cè)定吸光度。由結(jié)果可知，樣品處理后在90 min內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。與直接紫外法相比（放置2 min后VC含量明顯降低），該方法穩(wěn)定性好，可滿足樣品處理及測(cè)定過(guò)程中的穩(wěn)定性要求。

2.2.4重復(fù)性試驗(yàn)

按照1.2.3的方法制備5份供試品溶液，測(cè)定其吸光度，考察重復(fù)性。結(jié)果表明，VC的平均含量為174.49 mg/100 g，RSD值為0.35%，說(shuō)明該方法的重復(fù)性良好。

2.2.5加樣回收率試驗(yàn)

取已知VC含量的黃刺玫果提取液6份，每份5 mL，精密加入VC標(biāo)準(zhǔn)液適量，按1.2.3方法制備，測(cè)定吸光度，計(jì)算加樣回收率。

加樣回收率結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　加樣回收率結(jié)果

由表1可知，平均加樣回收率為100.19%，RSD值為0.90%。

2.3樣品測(cè)定

取5批樣品，按照1.2.3方法制備后測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算VC含量。

樣品中VC的含量見(jiàn)表2。

表2　樣品中VC的含量

由表2可知，黃刺玫果中的VC平均含量為175.77 mg/100 g。

3　結(jié)論

通過(guò)試驗(yàn)條件的優(yōu)化與方法學(xué)驗(yàn)證，建立了2，6-二氯靛酚-紫外分光光度法測(cè)定野生黃刺玫果中VC含量的方法。該方法操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性好，準(zhǔn)確度和重復(fù)性能均滿足試驗(yàn)要求，適用于野生黃刺玫果中VC含量的測(cè)定，同時(shí)可為野生黃刺玫果資源的綜合開發(fā)和利用提供參考。

［1］山西植物志編委會(huì).山西植物志 ［M］.北京：中國(guó)科學(xué)技術(shù)出版社，1998：335.

［2］江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典（上冊(cè)）［M］.上海：上海人民出版社，1985：1 269.

［3］陳帥，鐘方麗，祝波.刺玫果藥理學(xué)研究進(jìn)展 ［J］.吉林化工學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，28（5）：31-32.

［4］肖竦.RP-HPLC法測(cè)定刺梨中的VC含量 ［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（3）：1 356-1 358.

［5］李瑞國(guó)，鄭權(quán).4種常見(jiàn)蔬菜維生素C含量測(cè)定 ［J］.西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2011，24（1）：198-201.

［6］姜成君，殷帥，孟慶玉.熒光法測(cè)定保健食品中VC［J］.農(nóng)產(chǎn)品加工（學(xué)刊），2015（9）：45-50.

［7］孫榮欣，楊靈.黃瓜中VC含量測(cè)定的方法研究 ［J］.農(nóng)產(chǎn)品加工（學(xué)刊），2014（5）：61-62.◇

Determination of Vitamin C in Fruit of Rosa Xanthina Lindl

YANG Yingying，YE Songhua，F(xiàn)ENG Xiazhen，WANG Xiaoyan，SONG Gaolin，RUAN Wenhui
（Shanxi Institute of Medicine and Life Sciences，Taiyuan，Shanxi 030006，China）

A improved 2，6-dichloro meisoindigo phenol-UV spectrophotometry has been developed for the determination of vitamin C in fruit of wild Rosa xanthina Lindl.The results show that the linear relationship of vitamin C in the rang of 2.03～39.27 μg/mL is good，R2=0.999 9.The recovery is between 98.82%～101.57%，and RSD is 0.90%.The improved method has the advantages of simple operation，good stability，and its accuracy and reproducibility can meet the test requirements for determination of vitamin C in fruit of wild Rosa xanthina Lindl.

Rosa xanthina Lindl；VC；UV spectrophotometry

O657.9

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2016.01.039

2015-12-01

山西省基礎(chǔ)研究項(xiàng)目（2015021190）；山西省科技攻關(guān)項(xiàng)目（20110321081-01，20120313016-6）。

楊瑩瑩（1984— ），女，碩士，工程師，研究方向?yàn)樗幬锓治雠c質(zhì)量控制。