楊瑩瑩,葉松華,馮夏珍,王曉燕,宋高林,阮文輝
(山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院,山西太原 030006)
黃刺玫果中VC的含量測(cè)定
楊瑩瑩,葉松華,馮夏珍,王曉燕,宋高林,阮文輝
(山西省醫(yī)藥與生命科學(xué)研究院,山西太原030006)
采用改進(jìn)后的2,6-二氯靛酚-紫外分光光度法測(cè)定黃刺玫果中VC的含量。結(jié)果顯示,VC質(zhì)量濃度在2.03~39.27 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,R2=0.999 9,加樣回收率為98.82%~101.57%,RSD值為0.90%。改進(jìn)后的方法操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性好,準(zhǔn)確性和重復(fù)性能滿足試驗(yàn)需求,適用于黃刺玫果中VC的含量測(cè)定。
黃刺玫果;VC;紫外分光光度法
黃刺玫果為薔薇科薔薇屬野生落葉灌木黃刺玫(Rosa xanthina Lindl)的成熟果實(shí),廣泛分布于我國(guó)北方各省的山區(qū)和丘陵地帶[1]。黃刺玫果富含多種維生素和氨基酸成分,尤其是VC含量豐富,因此有國(guó)外藥典收載其用于治療壞血病?!吨兴幋筠o典》謂黃刺玫果有健脾理氣、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)的作用[2],現(xiàn)代研究表明其還具有防治心血管疾病和抗衰老等作用[3]。黃刺玫果作為一種藥食同源的天然保健食品,正被日益重視和廣泛應(yīng)用。
目前,文獻(xiàn)報(bào)道的VC含量測(cè)定方法有多種,主要有高效液相色譜法[4]、滴定分析法[5]、熒光法[6]、2,4-二硝基苯肼比色法以及紫外分光光度法[7]等。其中,滴定法步驟繁瑣、滴定終點(diǎn)不易判斷,高效液相色譜法、熒光法相對(duì)操作較簡(jiǎn)便且成本較高,2,4-二硝基苯肼比色法操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)。相比之下,紫外分光光度法操作簡(jiǎn)便、干擾因素少,應(yīng)用更為廣泛。由于VC本身不穩(wěn)定,直接紫外法測(cè)定過(guò)程中穩(wěn)定性較差,且不適用于深色樣品的測(cè)定。本文選用2,6-二氯靛酚-紫外分光光度法(間接紫外法),即將定量的2,6-二氯靛酚染料與還原型VC發(fā)生氧化還原反應(yīng),多余的染料在酸性條件下顯色,經(jīng)溶劑萃取后測(cè)定其吸光度,計(jì)算VC含量。試驗(yàn)在傳統(tǒng)方法的基礎(chǔ)上進(jìn)行了條件優(yōu)化,改進(jìn)后的方法專屬性強(qiáng)、穩(wěn)定性好,且不受樣品本身顏色的影響,適用于黃刺玫果中VC的含量測(cè)定。
1.1材料與儀器
野生黃刺玫果,采自山西省左權(quán)縣;VC對(duì)照品(分析純,99.7%),天津市申泰化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品;試驗(yàn)用水為蒸餾水;其他試劑均為分析純。
AB104.N型分析天平,上海托利-梅特勒儀器有限公司產(chǎn)品;YK-1000A型高速粉碎機(jī),山東省青州市益康中藥機(jī)械有限公司產(chǎn)品;UV3000型紫外/可見(jiàn)分光光度計(jì),日本島津公司產(chǎn)品。
1.2試驗(yàn)方法
1.2.1VC標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制
精密稱取VC對(duì)照品100 mg,置于100 mL容量瓶中,用2%偏磷酸溶解,并稀釋至刻度。得質(zhì)量濃度為1 mg/mL的VC標(biāo)準(zhǔn)液,備用。
1.2.22,6-二氯靛酚標(biāo)準(zhǔn)液的配制
取碳酸氫鈉104 mg,溶于400 mL蒸餾水中,精確稱取2,6-二氯靛酚50 mg置于250 mL容量瓶中,用適量上述溶液溶解,冷卻后稀釋至刻度,過(guò)濾,置于棕色瓶中,冷藏備用。每次用前用VC標(biāo)準(zhǔn)液標(biāo)定,并計(jì)算滴定度。
1.2.3供試品溶液的制備
取黃刺玫果若干,粉碎后分離可食用部分,稱取10 g,加入1%檸檬酸溶液100 mL,混勻,40℃下超聲提取30 min,加入白陶土10 g混勻,脫色,過(guò)濾。取續(xù)濾液5 mL,加入乙酸鈉緩沖溶液(pH值4.0)5 mL,2,6-二氯靛酚2 mL,混勻,精密吸取二甲苯10 mL,振蕩萃取20 s,靜置分層,取二甲苯層作為供試品溶液,于500 nm處測(cè)定吸光度。由于脫色后樣品仍為淺紅色,為防止樣品本身顏色的影響,以不加入2,6-二氯靛酚染料的樣品經(jīng)上述步驟處理作為空白對(duì)照,扣除空白干擾。
2.1提取條件的選擇
2.1.1提取溶劑的選擇
不同提取溶劑對(duì)VC含量的影響見(jiàn)圖1。
圖1 不同提取溶劑對(duì)VC含量的影響
由于VC是一種不穩(wěn)定的維生素,在測(cè)定時(shí)選擇適宜的提取溶劑,不但可以提高VC的穩(wěn)定性,還可提高提取效率。試驗(yàn)比較了2%偏磷酸、2%草酸以及不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)檸檬酸作為提取溶劑對(duì)VC含量測(cè)定的影響。結(jié)果表明,1%檸檬酸作為提取溶劑時(shí)VC的含量最高,故選擇1%檸檬酸溶液作為提取溶劑。
2.1.2超聲時(shí)間的選擇
傳統(tǒng)方法未對(duì)樣品進(jìn)行超聲處理,本研究經(jīng)預(yù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn),經(jīng)超聲處理后VC含量有明顯提高,因此對(duì)超聲時(shí)間進(jìn)行了考察。在其他條件不變的情況下,分別在超聲0,10,20,30,40,50,60 min時(shí)測(cè)定其吸光度。
不同超聲時(shí)間對(duì)VC含量的影響見(jiàn)圖2。
由圖2可知,超聲30 min時(shí)提取效率達(dá)到最高;隨著超聲時(shí)間的延長(zhǎng),提取率趨于穩(wěn)定但略有降低。因此,本試驗(yàn)選擇超聲時(shí)間為30 min。
2.1.3超聲溫度的選擇
圖2 不同超聲時(shí)間對(duì)VC含量的影響
在超聲的同時(shí)進(jìn)行適當(dāng)?shù)乃〖訜?,?duì)VC的提取率也有較大影響。取供試品4份,分別在30,40,50,60℃的恒溫水浴中超聲提取30 min后測(cè)定吸光度。結(jié)果顯示,在40℃水浴時(shí)VC的含量較高,而高于40℃時(shí)含量有所降低,可能是溫度升高VC加速氧化導(dǎo)致。因此,試驗(yàn)選擇40℃作為超聲溫度。
2.2方法學(xué)考察
2.2.1波長(zhǎng)的選擇
取適量樣品按1.2.3操作后,以二甲苯為參比溶液,將2,6-二氯靛酚標(biāo)準(zhǔn)液和樣品供試液于200~700 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。結(jié)果顯示,二者在500 nm處有最大吸收值,且吸收峰相同;由于黃刺玫果中含有花色素、黃酮等成分,其提取液有較深顏色,即使經(jīng)白陶土脫色后仍有顏色,為防止干擾,以相同樣品經(jīng)相同操作但不加2,6-二氯靛酚作為空白對(duì)照進(jìn)行基線掃描,結(jié)果顯示在500 nm處幾乎沒(méi)有吸收,故試驗(yàn)選擇500 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。
2.2.2線性關(guān)系考察
分別精密吸取2,6-二氯靛酚0.1,0.5,1.0,1.5,1.9 mL置于20 mL具塞試管中(相當(dāng)VC質(zhì)量濃度分別為40,30,20,10,2 μg/mL),用碳酸氫鈉溶液補(bǔ)足體積至2 mL,依次加入1%的檸檬酸溶液5 mL、乙酸鈉緩沖溶液(pH值4.0)5 mL,混勻,精密吸取二甲苯10 mL,振蕩萃取20 s,靜置分層后取上層溶液,于500 nm處測(cè)定吸光度,同時(shí)做空白對(duì)照。以吸光度為縱坐標(biāo)、2,6-二氯靛酚體積為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程為Y=0.292 9X-0.002 9,R2=0.999 9;相當(dāng)于VC質(zhì)量濃度在2.03~39.27 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖3。
圖3 標(biāo)準(zhǔn)曲線
2.2.3穩(wěn)定性試驗(yàn)
由于VC極易被空氣中的氧氣氧化,因此需考察樣品測(cè)定中的穩(wěn)定性。取供試品適量按1.2.3操作后分別放置0,30,60,90 min后測(cè)定吸光度。由結(jié)果可知,樣品處理后在90 min內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。與直接紫外法相比(放置2 min后VC含量明顯降低),該方法穩(wěn)定性好,可滿足樣品處理及測(cè)定過(guò)程中的穩(wěn)定性要求。
2.2.4重復(fù)性試驗(yàn)
按照1.2.3的方法制備5份供試品溶液,測(cè)定其吸光度,考察重復(fù)性。結(jié)果表明,VC的平均含量為174.49 mg/100 g,RSD值為0.35%,說(shuō)明該方法的重復(fù)性良好。
2.2.5加樣回收率試驗(yàn)
取已知VC含量的黃刺玫果提取液6份,每份5 mL,精密加入VC標(biāo)準(zhǔn)液適量,按1.2.3方法制備,測(cè)定吸光度,計(jì)算加樣回收率。
加樣回收率結(jié)果見(jiàn)表1。
表1 加樣回收率結(jié)果
由表1可知,平均加樣回收率為100.19%,RSD值為0.90%。
2.3樣品測(cè)定
取5批樣品,按照1.2.3方法制備后測(cè)定吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算VC含量。
樣品中VC的含量見(jiàn)表2。
表2 樣品中VC的含量
由表2可知,黃刺玫果中的VC平均含量為175.77 mg/100 g。
通過(guò)試驗(yàn)條件的優(yōu)化與方法學(xué)驗(yàn)證,建立了2,6-二氯靛酚-紫外分光光度法測(cè)定野生黃刺玫果中VC含量的方法。該方法操作簡(jiǎn)便、穩(wěn)定性好,準(zhǔn)確度和重復(fù)性能均滿足試驗(yàn)要求,適用于野生黃刺玫果中VC含量的測(cè)定,同時(shí)可為野生黃刺玫果資源的綜合開發(fā)和利用提供參考。
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Determination of Vitamin C in Fruit of Rosa Xanthina Lindl
YANG Yingying,YE Songhua,F(xiàn)ENG Xiazhen,WANG Xiaoyan,SONG Gaolin,RUAN Wenhui
(Shanxi Institute of Medicine and Life Sciences,Taiyuan,Shanxi 030006,China)
A improved 2,6-dichloro meisoindigo phenol-UV spectrophotometry has been developed for the determination of vitamin C in fruit of wild Rosa xanthina Lindl.The results show that the linear relationship of vitamin C in the rang of 2.03~39.27 μg/mL is good,R2=0.999 9.The recovery is between 98.82%~101.57%,and RSD is 0.90%.The improved method has the advantages of simple operation,good stability,and its accuracy and reproducibility can meet the test requirements for determination of vitamin C in fruit of wild Rosa xanthina Lindl.
Rosa xanthina Lindl;VC;UV spectrophotometry
O657.9
A
10.16693/j.cnki.1671-9646(X).2016.01.039
2015-12-01
山西省基礎(chǔ)研究項(xiàng)目(2015021190);山西省科技攻關(guān)項(xiàng)目(20110321081-01,20120313016-6)。
楊瑩瑩(1984— ),女,碩士,工程師,研究方向?yàn)樗幬锓治雠c質(zhì)量控制。