李玉泉

吉林省白山市中心血站檢驗(yàn)科，吉林白山134300

核酸檢測(cè)與酶免檢測(cè)平行篩查血液的效果評(píng)價(jià)

李玉泉

吉林省白山市中心血站檢驗(yàn)科，吉林白山134300

目的探討在實(shí)施血液平行篩查過(guò)程中，分析核酸檢測(cè)以及酶免檢測(cè)在血液篩查中應(yīng)用價(jià)值。方法選擇2010年8月—2016年6月血站檢驗(yàn)科獻(xiàn)血者的血液樣品39236份標(biāo)本作為該次實(shí)驗(yàn)對(duì)象；針對(duì)所有獻(xiàn)血者的血液樣品，分別開(kāi)展ELISA檢測(cè)以及NAT檢測(cè)，在實(shí)施ELISA檢測(cè)的過(guò)程中，檢測(cè)項(xiàng)目主要體現(xiàn)為HBsAg檢測(cè)、抗-HIV檢測(cè)以及抗-HCV檢測(cè)等。對(duì)最終的臨床檢測(cè)結(jié)果實(shí)施對(duì)比分析。結(jié)果在所有標(biāo)本中，NAT檢測(cè)陽(yáng)性率達(dá)到0.56%；ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率達(dá)到了0.51%；NAT以及ELISA檢測(cè)陽(yáng)性率為0.40%；ELISA檢測(cè)陰性，NAT檢測(cè)陽(yáng)性率為0.16%。最終對(duì)鑒別結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，屬于HBV-DNA的患者27例，屬于HCV-RNA的患者2例；屬于NAT陰性ELISA陽(yáng)性的標(biāo)本共包括42份，所占比例為0.11%；針對(duì)ELISA雙試劑檢測(cè)陽(yáng)性同NAT陽(yáng)性分析發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)性符合率達(dá)到了78.9%；HBsAg同NAT陽(yáng)性符合率為80.3%；抗-HCV同NAT陽(yáng)性符合率為66%；抗-HIV雙試劑陽(yáng)性同NAT陽(yáng)性率符合率達(dá)到了100%。結(jié)論在實(shí)施血液平行篩查過(guò)程中，有效選擇NAT方法以及ELISA方法，能夠有效發(fā)揮防漏互補(bǔ)的特點(diǎn)，可以將獻(xiàn)血者的血液檢測(cè)窗口期有效縮短，針對(duì)血液安全做出有效保障，針對(duì)血液平行篩查的安全性做出有效保證。

核酸檢測(cè)；酶免檢測(cè)；平行篩查血液

在選擇ELISA（酶聯(lián)免疫檢測(cè)）對(duì)獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)后最終顯示合格的標(biāo)本中，選擇NAT（血站核酸檢測(cè)）加以檢測(cè)后，針對(duì)病毒感染的患者可以進(jìn)行有效明確。針對(duì)檢察人員臨床實(shí)施NAT檢測(cè)以及實(shí)施ELISA檢測(cè)，可以獲得顯著的血液篩查效果，最終將血液安全性顯著提高［1］。為了探討在實(shí)施血液平行篩查過(guò)程中，核酸檢測(cè)以及酶免檢測(cè)的在血液篩查中的應(yīng)用價(jià)值，該文主要將我站的獻(xiàn)血者的血液標(biāo)本作為該次實(shí)驗(yàn)觀察對(duì)象，分別選擇核酸檢測(cè)的方法以及酶免檢測(cè)的方法進(jìn)行干預(yù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1　資料與方法

1.1一般資料

選擇2010年8月—2016年6月血站檢驗(yàn)科檢測(cè)的獻(xiàn)血者標(biāo)本39236份作為該次實(shí)驗(yàn)對(duì)象；對(duì)于每位獻(xiàn)血者，對(duì)其血液標(biāo)本進(jìn)行留取，劑量為3×5 mL。第1管屬于EDTA-K2真空抗凝管，血站檢驗(yàn)科實(shí)施血清學(xué)檢測(cè)；第2管屬于帶分離膠無(wú)菌EDTA-K2真空抗凝管，臨床實(shí)施NAT檢測(cè)；第3管屬于帶分離膠EDTA-K2真空抗凝管，有效進(jìn)行標(biāo)本留取。針對(duì)所有標(biāo)本完成采集后，于冰箱（2～8℃）中進(jìn)行保存。針對(duì)NAT管，對(duì)其完成采血的4 h之內(nèi)，有效實(shí)施離心處理（1 600 g×20 min），在2 d內(nèi)有效完成檢測(cè)工作，對(duì)于無(wú)法實(shí)施檢測(cè)的標(biāo)本，于-20℃的環(huán)境中進(jìn)行保存。

1.2方法

檢驗(yàn)科的工作人員，合理進(jìn)行相關(guān)設(shè)備的準(zhǔn)備工作，主要選擇STARLET全自動(dòng)酶免加樣儀、FAME16/20全自動(dòng)酶免檢測(cè)分析儀以及ProcleixTIC-RIS全自動(dòng)核酸檢測(cè)分析系統(tǒng)實(shí)施核酸檢測(cè)。做好試劑的準(zhǔn)備工作［2］。對(duì)于相關(guān)檢測(cè)方法主要根據(jù)試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行相關(guān)操作。主要選擇ELISA試劑對(duì)HBsAg、抗-HIV以及抗-HCV實(shí)施檢測(cè)。與此同時(shí)，選擇Procleix TIGRIS全自動(dòng)核酸分析系統(tǒng)實(shí)施單人份核酸檢測(cè)。選擇ELISA陰性標(biāo)本、NAT聯(lián)檢陽(yáng)性標(biāo)本實(shí)施HBV-DNA、HIV-RNA以及HCV-RNA實(shí)施鑒別試驗(yàn)［3］。

2　結(jié)果

在所有標(biāo)本中，最終表現(xiàn)為NAT陽(yáng)性的標(biāo)本共包括220份，檢測(cè)陽(yáng)性率達(dá)到了0.56%；最終檢測(cè)表現(xiàn)出ELISA陽(yáng)性的標(biāo)本達(dá)到了199份，檢測(cè)陽(yáng)性率達(dá)到了0.51%；檢測(cè)NAT以及ELISA陽(yáng)性的標(biāo)本為157份，檢測(cè)陽(yáng)性率為0.40%；ELISA檢測(cè)陰性，NAT檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)本達(dá)到了63份，所占比例為0.16%；最終對(duì)鑒別結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，屬于HBV-DNA的患者27例，屬于HCV-RNA的患者2例；屬于NAT陰性ELISA陽(yáng)性的標(biāo)本共包括42份，所占比例為0.11%；針對(duì)ELISA雙試劑檢測(cè)陽(yáng)性同NAT陽(yáng)性分析發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)性符合率達(dá)到了78.9%；HBsAg同NAT陽(yáng)性符合率為80.3%；抗-HCV同NAT陽(yáng)性符合率為66%；抗-HIV雙試劑陽(yáng)性同NAT陽(yáng)性率符合率達(dá)到了100%，具體結(jié)果可見(jiàn)表1、表2以及表3。

表1　ELISA同NAT平行檢測(cè)結(jié)果

表2　ELISA陽(yáng)性標(biāo)本NAT聯(lián)檢情況

3　討論

諸多疾病均會(huì)通過(guò)血液的形式進(jìn)行傳播，例如丙型肝炎疾病、乙型肝炎疾病以及艾滋病等，針對(duì)人體均會(huì)表現(xiàn)出較大程度的影響。對(duì)此需要研究有效方法加以血液檢測(cè)，最終才能夠?qū)⑤斞獋鞑サ娘L(fēng)險(xiǎn)有效排除，從而將相關(guān)糾紛出現(xiàn)的概率顯著降低［4］。在實(shí)施血液篩查過(guò)程中，酶聯(lián)免疫法獲得了極為廣泛的應(yīng)用。此外選擇核酸檢測(cè)方法加以檢測(cè)，最終針對(duì)醫(yī)療質(zhì)量的提高可以發(fā)揮顯著的促進(jìn)作用。檢測(cè)方法的有效應(yīng)用，可以將輸血傳播途徑加以有效排除，從而有效降低疾病傳染的概率，提高用血患者的安全性，實(shí)現(xiàn)獻(xiàn)血者本身的價(jià)值［5］。

近年來(lái)，為了將艾滋病的防治力度有效提高，針對(duì)諸多獻(xiàn)血者血液在進(jìn)行篩查過(guò)程中，TMA核酸檢測(cè)技術(shù)以及ELISA檢測(cè)平行篩查獲得廣泛應(yīng)用。通過(guò)對(duì)39236份獻(xiàn)血者標(biāo)本實(shí)施平行檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，最終發(fā)現(xiàn)表現(xiàn)出NAT陽(yáng)性的標(biāo)本220份，檢測(cè)陽(yáng)性率達(dá)到了0.56%。最終檢測(cè)表現(xiàn)出ELISA陽(yáng)性的標(biāo)本達(dá)到了199份，檢測(cè)陽(yáng)性率達(dá)到了0.51%；檢測(cè)NAT以及ELISA陽(yáng)性的標(biāo)本為157份，檢測(cè)陽(yáng)性率為0.40%；ELISA檢測(cè)陰性，NAT檢測(cè)陽(yáng)性的標(biāo)本達(dá)到了63份，所占比例為0.16%；最終對(duì)鑒別結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，屬于HBV-DNA的患者27例，屬于HCV-RNA的患者2例；屬于NAT陰性ELISA陽(yáng)性的標(biāo)本共包括42份，所占比例為0.11%；針對(duì)ELISA雙試劑檢測(cè)陽(yáng)性同NAT陽(yáng)性分析發(fā)現(xiàn)，陽(yáng)性符合率達(dá)到了78.9%；HBsAg同NAT陽(yáng)性符合率為80.3%；抗-HCV同NAT陽(yáng)性符合率為66%；抗-HIV雙試劑陽(yáng)性同NAT陽(yáng)性率符合率達(dá)到了100%。從而證明將ELISA檢測(cè)結(jié)果同NAT檢測(cè)結(jié)果二者表現(xiàn)較不一致，采用兩種方法對(duì)病毒標(biāo)志物加以檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，分析原因?yàn)橄嚓P(guān)的標(biāo)志物主要在患者的外周血中存在的時(shí)間不同導(dǎo)致。從而證明采用此兩種方法對(duì)獻(xiàn)血者進(jìn)行檢測(cè)，較易表現(xiàn)出假陽(yáng)性以及漏檢的情況。將此兩種方法加以篩查后，最終可以將血液安全性顯著提高。

通過(guò)9.6倍超濃縮加以有效處理后，最終HBV病毒含量以及HCV病毒含量分別為5.92±1.98倍以及4.7±1.43倍，其可以將NAT檢測(cè)靈敏度顯著提高，可以將NAT篩查陽(yáng)性標(biāo)本鑒別率顯著提高。因?yàn)闂l件受到了限制，無(wú)法利用超濃縮技術(shù)對(duì)鑒別陽(yáng)性標(biāo)本實(shí)施多次鑒別，但是因?yàn)樾枰獙?duì)血液加以考慮，最終針對(duì)NAT聯(lián)檢陽(yáng)性全部表現(xiàn)出潛在感染的情況，對(duì)于其他血液有效進(jìn)行報(bào)廢處理［6］。

針對(duì)獻(xiàn)血者實(shí)施ELISA檢測(cè)，其表現(xiàn)出較高特異度，但是下列幾方面仍然會(huì)對(duì)其產(chǎn)生一定程度的影響。其一在操作方面會(huì)表現(xiàn)出一定程度的影響，在實(shí)施自動(dòng)化加樣的過(guò)程中，對(duì)于非一次性加樣針同含有較高抗原血樣相遇后，無(wú)法徹底實(shí)施清洗，從而導(dǎo)致出現(xiàn)了污染的情況，臨床可以利用復(fù)檢手動(dòng)有效實(shí)施排除。其二在試劑方面會(huì)表現(xiàn)出一定程度的影響，如果出現(xiàn)了抗原制備不純的情況之后，會(huì)導(dǎo)致出現(xiàn)假陽(yáng)性的情況。采用不同試劑進(jìn)行聯(lián)合檢測(cè)，對(duì)于最終表現(xiàn)出陽(yáng)性的標(biāo)本，存在較高概率表現(xiàn)出真陽(yáng)性的情況。其三在樣品方面會(huì)表現(xiàn)出一定程度的影響，對(duì)于樣品溶血、自身抗體以及交叉反應(yīng)物質(zhì)針對(duì)最終的檢測(cè)結(jié)果均會(huì)表現(xiàn)出一定程度的影響。對(duì)此需要選擇特異性較高以及靈敏度較高的檢測(cè)方法實(shí)施臨床檢測(cè)，合理完成專(zhuān)門(mén)試劑質(zhì)量評(píng)估方案的創(chuàng)建，確保試劑以及檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)全部合格，確保在實(shí)施血液病毒感染檢測(cè)的過(guò)程中，需要選擇成熟檢測(cè)技術(shù)［7］。

對(duì)于NAT檢測(cè)，并非絕對(duì)可靠，無(wú)法選擇NAT檢測(cè)對(duì)ELISA檢測(cè)加以取代，在實(shí)施NAT檢測(cè)的過(guò)程中，往往受到諸多因素的影響，例如核酸檢測(cè)窗口期、出現(xiàn)了病毒核酸變異的情況、病毒含量過(guò)低以及實(shí)驗(yàn)操作的相關(guān)問(wèn)題均會(huì)導(dǎo)致，其均會(huì)導(dǎo)致最終在實(shí)施NAT檢測(cè)的過(guò)程中，表現(xiàn)出假陰性的情況。但是臨床通過(guò)實(shí)施NAT檢測(cè)，針對(duì)血液篩查表現(xiàn)出較大的幫助。

當(dāng)前，HBV疾病較為流行，通過(guò)輸血感染HBV的患者例數(shù)呈現(xiàn)出逐漸增加的趨勢(shì)。在實(shí)施血液篩查的過(guò)程中，NAT又會(huì)表現(xiàn)出系列的問(wèn)題，并且此種技術(shù)針對(duì)實(shí)驗(yàn)條件表現(xiàn)出較多的要求，如果針對(duì)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)條件有所忽略，或者難以有效實(shí)現(xiàn)，最終較易表現(xiàn)出假陰性或者表現(xiàn)出假陽(yáng)性的情況，從而導(dǎo)致在實(shí)施臨床診斷的過(guò)程中，表現(xiàn)出諸多的負(fù)面影響。

綜上所述，為了將血液安全性顯著提高，臨床除了對(duì)檢測(cè)人員實(shí)施ELISA檢測(cè)之外，配合實(shí)施NAT檢測(cè)具有重要的意義。對(duì)此血站需要根據(jù)實(shí)際情況展開(kāi)臨床檢測(cè)，合理選擇具體的檢測(cè)模式進(jìn)行干預(yù)。選擇單人份核酸檢測(cè)同ELISA檢測(cè)平行篩查獻(xiàn)血者血液模式有效實(shí)施檢測(cè)，最終可以有效發(fā)揮防漏互補(bǔ)的效果，可以將檢測(cè)周期顯著縮短，針對(duì)檢測(cè)人員血液安全供應(yīng)做出有效保證，最終有效避免出現(xiàn)疾病感染的現(xiàn)象。

［1］孫波.輸血前血液篩查中新型HBV基因突變及抗原分析的研究［D］.濟(jì)南：山東大學(xué)，2013：1059-1061.

［2］程衛(wèi)芳，段有紅，周學(xué)勇，等.2種核酸檢測(cè)平臺(tái)在與ELISA平行檢測(cè)中的應(yīng)用［J］.中國(guó)輸血雜志，2013（12）：1235-1237.

［3］王立林，盧亮，聶冬梅，等.2種核酸篩查系統(tǒng)對(duì)血清學(xué)陽(yáng)性獻(xiàn)血者檢測(cè)結(jié)果的分析［J］.中國(guó)輸血雜志，2015（9）：1090-1093.

［4］于志軍，鄧雪蓮，高慧卉，等.血清學(xué)檢測(cè)與核酸檢測(cè)在獻(xiàn)血者血液篩查中的相關(guān)性研究［J］.實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014（5）：532-534.

［5］王慶敏，蔣昵真，黃成垠.單采血小板樣本混樣核酸與酶免平行檢測(cè)結(jié)果分析［J］.臨床輸血與檢驗(yàn)，2016（3）：217-220.

［6］朱為剛，王立林，聶冬梅，等.核酸檢測(cè)試劑cobas MPX v2.0降低輸血HBV殘余風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估［J］.中國(guó)輸血雜志，2016（6）：574-577.

［7］詹少兵.HIV-1 P24抗原免疫PCR檢測(cè)及其適配子篩選應(yīng)用&HPV血清學(xué)檢測(cè)方法研究［D］.北京：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心，2013：1025-1027.

Evaluation of Effect of Nucleic Acid Test and Enzyme Immunoassay Test in the Parallel Screening of Blood

LI Yu-quan
Department of Clinical Laboratory，the Blood Center of Baishan City，Baishan，Jilin Province，134300 China

Objective To study and analyze the application value of nucleic acid test and enzyme immunoassay test in the screening of blood.Methods 39236 pieces of blood specimens of blood donors in the department of clinical laboratory in blood station from June 2010 to August 2016 were selected as the experimental objects，and the blood samples of all blood donors were respectively tested by ELISA and NAT，and the ELISA test items mainly included HBsAg test，anti-HIV test and anti-HCV test，and the final clinical test results were compared and analyzed.Results In all specimens，the test positive rates of NAT，ELISA and NAT combined with ELISA were respectively 0.56%，0.51%and 0.40%，ELISA test was negative，the positive rate of NAT was 0.16%，and the analysis of test results showed that HBV-DNA was in 27 cases，HCVRNA was in 2 cases，and negative NAT and positive ELISA was in 42 specimens，accounting for 0.11%，and the analysis of positive ELISA dual wavelength and positive NAT showed that the positive coincidence rate reached 78.9%，the positive coincidence rate of HBsAg and NAT reached 80.3%，and the positive coincidence rate of anti-HCV and NAT was 66%and the anti-HIV dual wavelength and NAT positive coincidence rate reached 100%.Conclusion In the implementation course of blood parallel screening，the effective choice of NAT method and ELISA method can effectively give play to the features of leak-proof and complementation，effectively shorten the blood test window phase of blood donors，and effectively ensure the blood safety and safety of blood parallel screening.

Nucleic acid test；Enzyme immunoassay test；Parallel screening of blood

R7

A

1672-5654（2016）10（b）-0092-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.29.092

李玉泉（1968.2-），女，吉林白山人，本科，中級(jí)，研究方向：血站檢驗(yàn)。

（2016-07-14）