閆朝春，安仲武，秦繼寶

（連云港市東方醫(yī)院檢驗科，江蘇連云港222042）

激活劑對檢測活化部分凝血活酶時間的差異性研究

閆朝春，安仲武，秦繼寶

（連云港市東方醫(yī)院檢驗科，江蘇連云港222042）

目的探討不同激活劑作為活化部分凝血活酶時間（APTT）檢測試劑時對APTT測定結果的影響。方法用鞣花酸和白陶土兩種激活劑分別在LG-PABER-1型血凝分析儀和Sysmex CA-500全自動血凝分析儀上進行APTT檢測，并在血漿中分別加入肝素鈉和乏因子血漿進行APTT檢測。運用t檢驗和方差分析對檢測結果進行統(tǒng)計學分析。結果⑴在LG血凝儀上運用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑，對37例臨床標本進行APTT測定結果顯示：白陶土作為激活劑測得的結果高于鞣花酸測得的結果（P＜0.05）。⑵同一批號的鞣花酸作為激活劑在Sysmex血凝儀和LG血凝儀上分別對40例臨床標本進行APTT測定，結果顯示：LG血凝儀上測得的結果高于Sysmex血凝儀測得的結果（P＜0.05）。⑶鞣花酸和白陶土作為不同激活劑對含有不同濃度肝素鈉的血漿35例進行APTT測定結果顯示：隨著肝素鈉濃度的增加，兩種激活劑的APTT結果明顯延長，與未加肝素鈉組比較有顯著差異（P＜0.05）。且鞣花酸組變化比白陶土組變化更明顯。⑷運用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑，對加入不同乏凝血因子的血漿后的血漿33例進行APTT測定顯示：隨著血漿中加入乏因子血漿的比例增多，兩種激活劑的APTT結果延長也明顯，與未加乏因子血漿的血漿的APTT比較有顯著差異（P＜0.05）。且白陶土組變化比鞣花酸組更明顯。結論不同激活劑APTT檢測結果存在差異，且對肝素或乏因子血漿的敏感性存在差異；同一激活劑在不同儀器上APTT檢測結果存在差異。建議不同的實驗室應建立自己的參考范圍。

活化部分凝血活酶時間；鞣花酸；白陶土

活化部分凝血活酶時間（activated partial thromboplastin time，APTT）測定是凝血功能檢測的一項重要指標，也是術前檢查的重要指標。它是臨床上反映內源性凝血因子缺乏的主要指標之一［1］?？煞从衬蜃樱á?、Ⅸ、Ⅺ、Ⅻ）、凝血酶原、纖維蛋白原以及因子Ⅴ、Ⅹ的水平［2］。檢測方法目前多已儀器化，可運用半自動和全自動血凝分析儀進行檢測。檢測原理是將磷脂（部分凝血活酶）和激活劑加到血漿中，經過孵育，再加入適當濃度的鈣離子，測定纖維蛋白形成的時間，即為活化部分凝血活酶時間［3-5］。本文探討不同激活劑及激活劑在不同儀器上對APTT測定的影響，現(xiàn)將臨床研究報道如下。

1 材料與方法

1.1 樣本采集與處理選取本院臨床作凝血功能檢測的無黃疸、無溶血、無脂血標本。標本為靜脈血置于含有1/10體積0.109mol/L枸櫞酸鈉抗凝劑（1份抗凝劑+9份全血）的硅化玻璃真空采血管中（浙江拱東醫(yī)療科技有限公司提供，批號1306243，公稱液體容量2ml），輕輕地顛倒混勻，以3000r/ min離心15min，收集血漿進行試驗。

1.1.1 肝素鈉溶液（12.5U/ml）肝素鈉由江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司提供，規(guī)格為2ml：12500單位；國藥準字H32020612。將肝素鈉配制成終濃度為12.5U/ml的溶液。

1.1.2 乏因子血漿乏Ⅷ或Ⅸ因子血漿由西門子公司提供（批號983512）。

1.2 主要儀器與試劑儀器為LG-PABER-1型血凝分析儀（北京世帝科學儀器公司）和Sysmex CA-500全自動血凝分析儀（希森美康上海公司）。試劑為上海太陽生物技術有限公司提供，激活劑為鞣花酸（批號為892019）和白陶土（批號為311023）及0.025M的CaCl2溶液（批號為892030）。

1.3 方法⑴在LG-PABER-1血凝儀上運用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑，對37例臨床標本進行APTT測定。⑵運用同一批號的鞣花酸作為激活劑在Sysmex CA-500血凝儀和LG-PABER-1血凝儀上分別對40份臨床標本進行APTT測定。⑶運用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑對含有不同濃度肝素鈉的血漿35份在LG-PABER-1血凝儀上進行APTT測定。12.5U/ml的肝素鈉加入血漿稀釋，使每份血漿含肝素鈉終濃度分別為0.000U/ml、0.104U/ml、0.156U/ml、0.208U/ml、0.312U/ml、0.417 U/ml、0.625 U/ml，進行APTT測定。⑷運用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑，對加入不同乏因子血漿后的血漿33份在LG-PABER-1血凝儀上進行APTT測定，加入方法為血漿與乏因子血漿按6：0、5：1、4：2、3：3、2：4混勻，制成待檢血漿進行檢測。

1.4 統(tǒng)計學方法計量資料以均數(shù)±標準差（x±s）表示，所有數(shù)據由Excel行基本運算，導入Stata 9.2統(tǒng)計軟件包，組間均數(shù)比較運用t檢驗和方差檢驗進行分析。

2 結果

2.1 在LG-PABER-1血凝儀上運用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑，對37份臨床標本進行APTT測定結果顯示：鞣花酸測得的APTT為26.1±4.5秒，白陶土測得的APTT為38.8±6.1s，兩組數(shù)據存在差異（P＜0.05），且運用白陶土測得的結果較運用鞣花酸測得的結果明顯延長。

2.2 運用同一批號的鞣花酸作為激活劑在Sysmex CA-500血凝儀和LG-PABER-1血凝儀上分別對40例臨床標本進行APTT測定。結果顯示LGPABER-1測得的APTT為26.1±4.4s，SYSMEXCA-500測得的APTT為23.9±4.8s，兩組數(shù)據存在差異（P＜0.05），且LG-PABER-1血凝儀上測得的結果高于Sysmex CA-500血凝儀測得的結果。

2.3 運用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑對含有不同濃度肝素鈉的血漿35份進行APTT測定結果顯示：隨著肝素鈉濃度的增加，兩種激活劑的APTT結果明顯延長，與未加肝素鈉組比較有顯著差異（P＜0.05）。且鞣花酸組變化比白陶土組變化明顯，結果見表1。

2.4 運用鞣花酸和白陶土作為不同激活劑，對加入不同乏因子血漿后的血漿33份進行APTT測定顯示：隨著血漿中加入乏因子血漿的比例增多，兩種激活劑的APTT結果延長也明顯，與未加乏因子血漿的血漿的APTT比較有顯著差異（P＜0.05）。且白陶土組變化比鞣花酸組更明顯，結果見表2。

3 討論

APTT是臨床最常用的反映內源性凝血系統(tǒng)凝血活性的敏感篩查試驗，對于內源性凝血因子缺陷及相關抑制物的檢測和蛋白C抵抗現(xiàn)象的篩檢，肝素治療的監(jiān)測，DIC早期的診斷，術前檢查等方面有著廣泛的用途［6］。探索有效控制影響APTT實驗結果因素的系列方法，臨床可獲得準確的結果，有助于對APTT試驗質量控制和標準化操作；有助于醫(yī)生對血栓前狀態(tài)，血栓性疾病患者體內血凝情況做出合理評價，有利于患者得到及時有效的診斷與治療［7］。

表1 不同激活劑對含肝素鈉血漿測定APTT結果（n=35，x±s）

表2 不同激活劑對含不同乏因子血漿的血漿測定APTT結果（n=33，x±s）

作者通過在同一儀器上運用不同激活劑對同一批標本進行檢測APTT，研究結果發(fā)現(xiàn)運用鞣花酸和白陶土為激活劑測定APTT結果存在很大差異（P＜0.05）。白陶土時間長于鞣花酸，分析其原因可能是：白陶土不溶于水，使試劑成為混懸液，它以細小顆粒存在，可影響磁珠的運動，摩擦力有所增加，阻力亦增大，黏度便會增加，完成相同振幅所需時間延長；同等條件下，激活凝血因子形成纖維蛋白的過程變長；鞣花酸溶于水，以離子方式存在，為透明液體，該試劑用于全自動血凝儀，它的血漿凝固時間基本上不受試劑本身因素的影響［8］。因此，同一份標本在其它條件相同的情況下，用兩種激活劑進行檢測時，白陶土時間比鞣花酸要延長。在運用鞣花酸為激活劑在不同儀器上進行APTT檢測結果也存在一定的差異（P＜0.05）。原因可能為檢測原理的差異，LG血凝儀是利用磁感應原理的凝血檢測法，在樣品中加入一粒磁性小鐵珠，測試槽兩側安裝獨立的線圈，交替產生電磁場，使小磁珠在恒定的血漿黏度中保持恒定的擺幅運動；采用電磁式感應器，測定磁珠的不同振幅，根據不同項目，儀器產生不同的磁場強度，由于是感應磁珠的相對運動，所以不會受到原血漿粘度的影響。當血漿凝固時，其黏稠度便會增加，磁珠擺幅逐漸變小至原振幅的50%時，計算機根據磁珠振幅情況可精確測試血漿凝固時間［3］。Sysmex血凝儀的原理是按一定比例混合后的樣本與試劑因發(fā)生散射光的光強與凝集的程度存在一定的關系，并通過光電轉換系統(tǒng)把這種微小的變化轉化成放大的電信號。通過微處理器記錄變化曲線，與標準曲線相比較，從而換算出檢測項目的數(shù)值［9］。說明運用這兩種原理進行APTT檢測存在一定的差異。建議各實驗室應根據自己的儀器和試劑建立自己的正常參考范圍。

APTT是檢測肝素用量的首選指標。應用小劑量普通肝素時（500～10000U/24h）可不做實驗室檢測，但應用中等劑量（10000～20000U/24h）或大劑量（20000～30000U/24h）時必須定期進行APTT實驗檢測，否則臨床醫(yī)生無法判斷結果。一般情況下，行肝素抗凝后，APTT檢測結果較健康對照組延長1.5～2.5倍可取得最佳抗凝效果，且出血風險較小。因此，APTT達健康對照值1.5倍時稱為肝素“起效閾值”［10］。本文研究證實了肝素含量增多，APTT延長明顯的觀點。肝素可抑制凝血酶，從而妨礙纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，阻止血小板的粘附和聚集，使血漿中抗凝物質含量增多，影響凝血試驗，使凝血時間延長［11］。筆者通過實驗發(fā)現(xiàn)，隨著肝素鈉濃度的增加，兩種激活劑的APTT結果延長也增加，與未加肝素鈉組比較有顯著差異（P＜0.05）。在監(jiān)測肝素時檢測APTT鞣花酸作為激活劑比白陶土作為激活劑更敏感。

NCCLS出了一個H47-A準則，要求APTT試劑/儀器系統(tǒng)應能查出少于0.3U/ml（30%）活性因子Ⅷ、Ⅸ和Ⅺ的異常延長結果［7］。研究發(fā)現(xiàn)：鞣花酸作為激活劑時，可檢出Ⅷ因子活性低于50%的甲型血友病，白陶土作為激活劑時，當凝血因子活性小于35%或更低時即可顯示延長［4，5］。本文對于乏凝血因子的血漿檢測APTT的研究發(fā)現(xiàn)，隨著血漿中加入乏因子血漿的比例增多，兩種激活劑的APTT結果延長也明顯，與未加乏因子血漿的血漿的APTT比較有顯著差異（P＜0.05）。鞣花酸與白陶土比較，白陶土更敏感。

總之，影響APTT檢測的因素［12，13］很多，筆者也曾對于乙醇［14］和酸堿［2］進行探討。對于試劑與儀器對APTT測定的影響值得臨床引起重視，各實驗室應建立自己的參考范圍，這也是APTT難以標準化的因素之一。至于不同儀器使用［15］對APTT檢測結果存在影響以及變異的關系，有待于作進一步的探討。

［1］匡芳梅，賴蘭英.貧血對PT和APTT檢測結果的影響［J］.實驗與檢驗醫(yī)學，2014，32（6）：750-752.

［2］閆朝春，金艷鳳，徐冬祥，等.酸堿度變化對實驗室檢測凝血4項指標結果的影響［J］.檢驗醫(yī)學與臨床，2010，7（9）：783-784.

［3］許文榮，谷俊俠.臨床血液學檢驗［M］.南京：東南大學出版社，2001：165-168.

［4］叢玉隆.血栓與止血實驗診斷的現(xiàn)代及發(fā)展［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2001，24（1）：5-7.

［5］王鴻利，謝爽.血栓與止血檢測［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2005，28（3）：333-336.

［6］王勇，姚曉暉，王建褔.凝血四項試劑室溫放置不同時間對測定結果的影響［J］.實驗與檢驗醫(yī)學，2012，30（5）：499-500.

［7］張茉莉，謝守軍，薛承巖.影響活化部分凝血活酶時間測定的因素［J］.河北醫(yī)學，2006，12（11）：1196-1197.

［8］諸靜英，程大衛(wèi)，鄒靜娟.對兩種APTT試劑正常參考值的評估［J］.中國血液流變學雜志，2002，12（1）：57-59.

［9］林娟，門慶娟，劉長青，等.CA-500系列全自動血凝儀原理及日常維護［J］.醫(yī)療設備信息，2002，5：54.

［10］蔣靈霓.凝血及纖溶實驗室檢測的影響因素及臨床應用［J］.國際檢驗醫(yī)學雜志，2009，30（2）：196-198.

［11］董仁康，鄧懋青.血凝試驗的臨床影響因素分析［J］.西南軍醫(yī)，2007，9（3）：79-80.

［12］閆朝春.2臺血凝分析儀的性能比較及臨床應用評價［J］.國際檢驗醫(yī)學雜志，2014，35（13）：1770-1773.

［13］李秀蘭，於蘭婭.凝血試驗檢測結果的影響及分析［J］.實驗與檢驗醫(yī)學，2010，28（4）：404-405.

［14］閆朝春，蔣玲，馮茜，等.乙醇對凝血功能四項指標檢測的影響［J］.檢驗醫(yī)學與臨床，2010，7（8）：696-697.

［15］張敏，徐敬然，壽爽.SYSMEX CS-5100和SYSMEX CA-7000血凝分析儀檢測結果的比對分析［J］.實驗與檢驗醫(yī)學，2015，33（4）：444-446.

Comparison of two activators on activated partial thromboplastin time（APTT）test

YAN Chaochun，AN Zhongwu，QIN Jibao.

Department of Laboratory，Oriental Hospital of Lianyungang，Lianyungang Jiangsu 222042，China.

Objective To investigate the influence of different activators on activated partial thromboplastin time（APTT）test. Methods The APTT level of plasma which differential concentration heparin or poorⅧandⅨplasma was added into was determined by ellagic acid and kaolin in blood clotting analyzers between LG-PABER-1 analyzer and Sysmex CA-500 analyzer.The results were operated by t test and analysis of variance in statistics.Results⑴The APTT levels of 37 cases clinical specimen were tested by ellagic acid and kaolin with the same calcium chloride in LG analyzer.And the result of kaolin group was much higher than result of ellagic acid group（P＜0.05）.⑵The APTT levels of 40 cases specimen were tested by the same ellagic acid with the same calcium chloride in LG analyzer and Sysmex analyzer.And the result of LG analyzer was much higher than Sysmex analyzer's（P＜0.05）.⑶The APTT levels of 35 cases specimen that had differential concentration heparin were tested by two activators.The APTT was obviously increase along with increasing concentration of heparin（P＜0.05）.And ellagic acid group had marked change than kaolin group.⑷The APTT levels of 33 cases specimen that had differential poorⅧandⅨplasma were tested by two activators.The increasing degree of APTT was obviously increase along with increasing concentration of poorⅧandⅨplasma（P＜0.05）.And kaolin group had marked change than ellagic acid group.Conclusions The APTT level was different when in differential analyzer，when by differential activator.Reference range must been established himself by differential analyzer and activator in differential laboratory.

Activated partial thromboplastin time（APTT）；Ellagic acid；Kaolin

R446.11+1

A

1674-1129（2016）05-0571-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2016.05.011

2016-05-03；

2016-08-18）

閆朝春，男，1977年6月生，本科，副主任技師，研究方向：臨床醫(yī)學檢驗與管理，E-mail：YCC8255@163.COM.