李麗平，彭小華，楊 堃，吳青蓮

（1、新余市中心血站，江西新余338000；2、新余市渝水區(qū)珠珊衛(wèi)生院，江西新余338033）

免疫反應(yīng)性或血型錯(cuò)誤標(biāo)本血辮檢測(cè)的重要性

李麗平1，彭小華1，楊 堃1，吳青蓮2

（1、新余市中心血站，江西新余338000；2、新余市渝水區(qū)珠珊衛(wèi)生院，江西新余338033）

目的探討無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本免疫反應(yīng)性或血型錯(cuò)誤時(shí)血辮檢測(cè)的重要性。方法取新余市中心血站2012年4月1日至2016年3月31日無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本34880例，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行免疫四項(xiàng)、ALT和血型的檢測(cè)，對(duì)免疫陰性和單試劑陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測(cè)，同時(shí)對(duì)免疫反應(yīng)性標(biāo)本、血型初篩錯(cuò)誤標(biāo)本和核酸拆分陽(yáng)性標(biāo)本取相對(duì)應(yīng)的血辮再檢。結(jié)果HBsAg雙試劑陽(yáng)性379例，單試劑陽(yáng)性30例，抗HCV雙試劑陽(yáng)性54例，單試劑陽(yáng)性16例，抗TP雙試劑陽(yáng)性133例，單試劑陽(yáng)性11例，抗HIV雙試劑陽(yáng)性4例，單試劑陽(yáng)性19例，核酸HBV-DNA陽(yáng)性55例，取相對(duì)應(yīng)的血辮再檢結(jié)果與試管結(jié)果相符。ABO血型初篩錯(cuò)誤113例，取相對(duì)應(yīng)的血辮鑒定，有4例血辮血型與試管血型不相符。結(jié)論當(dāng)血液標(biāo)本免疫反應(yīng)性或血型錯(cuò)誤時(shí)應(yīng)取相對(duì)應(yīng)的血辮進(jìn)行再檢，確保試管標(biāo)本與血辮同源，避免標(biāo)本原因?qū)е碌腻e(cuò)誤結(jié)果被利用。

血辮；免疫四項(xiàng)；ABO血型；再檢

按《血站實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范》和《血站技術(shù)操作規(guī)程》（2015版）要求對(duì)血液標(biāo)本進(jìn)行谷丙轉(zhuǎn)氨酶、HBsAg、抗HCV、抗TP、抗HIV和血型的檢測(cè)，對(duì)初次反應(yīng)性標(biāo)本或血型錯(cuò)誤標(biāo)本取相對(duì)應(yīng)的血辮進(jìn)行再檢。血液初次檢測(cè)往往受到諸多因素的影響，所以對(duì)初次反應(yīng)性標(biāo)本再檢是非常必要的，特別是取試管標(biāo)本相對(duì)應(yīng)的血辮再檢，它既可以去除操作和標(biāo)本因素的影響，如孔間相互污染、洗板不徹底、標(biāo)本分離不完全、標(biāo)本溶血等，減少血液資源浪費(fèi)，使獻(xiàn)血者的利益得到保護(hù)，又可以發(fā)現(xiàn)標(biāo)本是否留樣錯(cuò)誤，防止不合格血液被利用，保障輸血安全。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源與處理2012年4月1日至2016年3月31日本站共采集血液標(biāo)本3488例，留取2管標(biāo)本，其中一管（帶分離膠EDTA-K2抗凝）用于核酸檢測(cè)，另一管（EDTA-K2抗凝）用于血清學(xué)檢測(cè)。在2℃～8℃冰箱保存，4h內(nèi)離心。

1.2 儀器Uranus-AE-100全自動(dòng)酶免分析儀（深圳愛康電子公司）；上海浩源血液核酸篩查平臺(tái)：Hamil-ton STAR全自動(dòng)混樣儀（瑞士哈美頓公司）、Ezbead System-32提取儀（美國(guó)Texas BioGene公司）、7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增儀（美國(guó)ABI公司）。

1.3 試劑免疫試劑由廈門新創(chuàng)、北京萬泰兩個(gè)廠家提供，核酸檢測(cè)試劑由上海浩源生物科技有限公司提供，ALT試劑由深圳邁瑞和長(zhǎng)春匯力提供，ABO血型試劑由上海血液生物提供。

1.4 方法用兩種ELISA法試劑進(jìn)行免疫四項(xiàng)的檢測(cè)，結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)：S/CO≥1為陽(yáng)性，0.8≤S/CO＜1為灰區(qū)，S/CO＜0.8為陰性，對(duì)雙試劑陽(yáng)性標(biāo)本、單試劑陽(yáng)性標(biāo)本取相對(duì)應(yīng)的血液辮子和試管標(biāo)本進(jìn)行平行檢測(cè)，再檢血液辮子和試管標(biāo)本結(jié)果S/ CO≥0.8時(shí)該標(biāo)本判為陽(yáng)性，S/CO＜0.8判斷為陰性，對(duì)單試劑陽(yáng)性標(biāo)本和陰性標(biāo)本進(jìn)行核酸（定性）檢測(cè)，并對(duì)拆分陽(yáng)性的標(biāo)本進(jìn)行血辮確認(rèn)，核酸結(jié)果判定：Ct＞45為陰性，Ct≤45為陽(yáng)性。用兩個(gè)廠家的試劑進(jìn)行ALT檢測(cè)，結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)為：ALT＞50U/L為異常，ALT≤50U/L為正常。實(shí)驗(yàn)室對(duì)標(biāo)本做ABO正、反鑒定和Rh鑒定，對(duì)初篩血型和鑒定不符標(biāo)本取血辮進(jìn)行鑒定。

2 結(jié)果

2.1 試管及血辮檢測(cè)結(jié)果2012年4月1日至2016年3月31日本站共采集無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本34880例，HBsAg陽(yáng)性379例，單試劑陽(yáng)性30例，抗HCV雙試劑陽(yáng)性54例，單試劑陽(yáng)性16例，抗TP雙試劑陽(yáng)性133例，單試劑陽(yáng)性11例，抗HIV雙試劑陽(yáng)性4例，單試劑陽(yáng)性19例，HBVDNA陽(yáng)性55例，血辮結(jié)果與試管結(jié)果相符，結(jié)果見表1。

2.2 血型錯(cuò)誤標(biāo)本血辮復(fù)定結(jié)果血型初篩錯(cuò)誤113例，其中109例試管血型與血辮血型相符，4例試管血型與血辮血型不相符，結(jié)果見表2。

表1 免疫四項(xiàng)反應(yīng)性和核酸拆分陽(yáng)性標(biāo)本血辮確認(rèn)結(jié)果

表2 ABO血型試管鑒定結(jié)果與血辮鑒定結(jié)果

3 討論

表1中免疫四項(xiàng)陽(yáng)性標(biāo)本試管與血辮結(jié)果相符，HBV-DNA陽(yáng)性標(biāo)本試管與血辮結(jié)果均為陽(yáng)性，表2中A型與B型各有1例鑒定結(jié)果試管與血辮不符，O型有2例鑒定結(jié)果試管與血辮不符，通過再檢、調(diào)查及問詢采血者發(fā)現(xiàn)2例為標(biāo)本留錯(cuò)，2例為標(biāo)簽血型劃錯(cuò)，這四例血型鑒定試管與血辮不符主要是人為造成。如果沒有對(duì)陽(yáng)性標(biāo)本或血型錯(cuò)誤標(biāo)本取血辮再檢，而直接用原試管再檢的話，就可能有錯(cuò)誤結(jié)果被利用，造成嚴(yán)重的后果，因此建立血辮再檢程序不僅可以減少血液資源的浪費(fèi)［1，2］，還可以追溯標(biāo)本的同源性［3］，防止不合格血液的應(yīng)用。

《血站實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理規(guī)范》中13.5條款要求，建立初次反應(yīng)性標(biāo)本進(jìn)一步復(fù)檢的程序和結(jié)果判定規(guī)則［4］，該條款沒有明確采取什么樣的進(jìn)一步復(fù)檢程序。2015版《血站技術(shù)操作規(guī)程》4.10.1血清學(xué)檢測(cè)結(jié)果的判定，初次試驗(yàn)為有反應(yīng)性的檢測(cè)標(biāo)本的后續(xù)處理有2種選擇［5］，其提供了兩個(gè)方案，這兩個(gè)方案都存在缺陷，方案1中以原血樣（或血辮）進(jìn)行雙孔復(fù)試，其雙孔復(fù)檢結(jié)果為最終結(jié)果，如果只選擇以原血樣（即試管標(biāo)本）再檢或血辮再檢，可以避免初次檢測(cè)所造成的假陽(yáng)性反應(yīng)［6］，并不能確認(rèn)試管標(biāo)本與血袋是否為同一個(gè)人。方案2中不做重復(fù)試驗(yàn)，初次試驗(yàn)結(jié)論為檢測(cè)最終結(jié)論，不但存在試管與血袋不一致的問題，還存在假陽(yáng)性問題。所以再檢時(shí)取血辮與試管進(jìn)行兩孔平行試驗(yàn)，既可以避免假陽(yáng)性反應(yīng)導(dǎo)致的血液浪費(fèi)，又可以溯源至血袋，確保標(biāo)本與血袋的一致性［7-9］。

除建立血辮平行再檢程序外，還應(yīng)重視血液標(biāo)本的采集、留取［10］?！堆举|(zhì)量管理規(guī)范》中13.9條款、13.11條款和13.12條款均有血液標(biāo)本的內(nèi)容［11］，應(yīng)明確留取標(biāo)本時(shí)怎樣防止張冠李戴的現(xiàn)象，如采集標(biāo)本前讀獻(xiàn)血者的姓名，看是否與捐獻(xiàn)者一致，同時(shí)要注意一次只能采集一個(gè)人，特殊情況下需要一次采集兩個(gè)人時(shí)應(yīng)特別注意必須采集兩個(gè)不同血型的人，即使留樣錯(cuò)誤也會(huì)通過血型鑒定而被發(fā)現(xiàn)。

輸血安全面臨的主要風(fēng)險(xiǎn)之一就是被篩查病毒的“窗口期”問題，雖然核酸檢測(cè)的應(yīng)用可以縮短“窗口期”［12］，但血液標(biāo)本的錯(cuò)誤導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的錯(cuò)誤，一旦錯(cuò)誤結(jié)果被利用，將增加輸血風(fēng)險(xiǎn)。除了建立符合規(guī)范要求的，具有可操作性、追溯性和一致性的操作規(guī)程，還應(yīng)加強(qiáng)人員操作和質(zhì)量意識(shí)的培訓(xùn)，確保標(biāo)本來自相對(duì)應(yīng)的血袋，保障血液安全。

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2016-05-19；

2016-07-07）