陳偉霞　楊麗麗　王磊　季光　邢練軍

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慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化和肝細胞癌患者T淋巴細胞亞群的表達差異

陳偉霞楊麗麗王磊季光邢練軍

目的探討HBV感染者生化指標、外周血T細胞亞群在不同病程中的變化及臨床意義。方法選取慢性乙型肝炎23例，肝炎后肝硬化21例，原發(fā)性肝癌35例，采用全自動生化、流式細胞分析，觀察生化指標，T淋巴細胞亞群的變化。結(jié)果ALT以慢性乙型肝炎組升高最顯著，和其他兩組相比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)、ALP、LDH以原發(fā)性肝癌組升高最明顯，膽堿酯酶(CHE)以原發(fā)性肝癌組降低最明顯，和其他兩組比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；觀察3組外周血T淋巴細胞結(jié)果顯示，CD8+T細胞、CD8+CD28+T細胞在慢性乙型肝炎組中最高，CD4+CD25+T細胞在原發(fā)性肝癌組中最高。結(jié)論HBV感染者不同病程中生化指標、T細胞亞群表達存在顯著差異，可作為病情演變、療效及預后評判的可靠依據(jù)。

HBV；生化指標；T淋巴細胞亞群

乙型肝炎是乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的以肝臟炎癥和壞死病變?yōu)橹鞯囊环N傳染病。據(jù)WHO報道，全世界約3.5億人感染HBV，其中有15%～40%的人因 HBV 感染逐漸發(fā)展形成肝硬化、肝衰竭、原發(fā)性肝細胞癌死亡[1-2]。慢性乙型肝炎形成的原因很復雜，人體感染HBV后，HBV并不直接對肝細胞造成損傷而與體內(nèi)的免疫細胞相互作用。其中機體T細胞免疫應答是決定HBV感染臨床轉(zhuǎn)歸的主要因素，所以外周血T淋巴細胞亞群的特征能夠反映患者的免疫狀態(tài)[3-4]。本研究比較慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化和原發(fā)性肝癌患者主要生化指標及T淋巴細胞亞群的變化，從而探討HBV感染后不同的臨床轉(zhuǎn)歸與宿主細胞免疫功能的關(guān)系。

資料和方法

一、臨床資料

79例HBV感染者均來上海龍華醫(yī)院感染科2013年1月至2015年12月期間住院患者。其中，慢性乙型肝炎23例(慢乙肝組)，男15例、女8例，平均年齡47.4歲；肝炎肝硬化21例(肝硬化組)，男14例、女7例，平均年齡50.5歲；原發(fā)性肝癌35例(肝癌組)，男25例、女10例，平均年齡53.2歲，慢性乙型肝炎和肝炎肝硬化患者均符合西醫(yī)診斷標準，參照2015年中華醫(yī)學會肝病學分會、感染病學分會聯(lián)合修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[5]，原發(fā)性肝癌的診斷依據(jù)臨床、血清學和影像學檢查，并符合中國抗癌協(xié)會肝癌專業(yè)委員會制定的原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標準。入選病例半年內(nèi)未接受免疫調(diào)節(jié)及抗病毒治療。

二、方法

抽取各組患者靜脈血4 mL，分2管。1管為普通管，分離血清后應用全自動生化分析儀檢測生化指標；另1管用乙二胺四乙酸二鉀抗凝，采用美國BD公司生產(chǎn)的FACS Calibur流式細胞儀直接免疫熒光法檢測外周T淋巴細胞亞群百分比。

三、統(tǒng)計學方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件，組間差異比較采用方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結(jié)　　果

一、HBV感染者不同病程中生化指標分析

慢性乙型肝炎組、肝炎肝硬化組、原發(fā)性肝癌組患者ALT、AST、CHE差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，且以慢性乙型肝炎組升高最顯著，而原發(fā)性肝癌組和肝炎肝硬化組之間則變化不顯著，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；γ-GT、ALP、LDH以原發(fā)性肝癌組升高最明顯，CHE以原發(fā)性肝癌組降低最明顯(P<0.05)(表1)。

二、HBV感染者不同病程中T細胞亞群功能分析

慢性乙型肝炎組CD8+T細胞、CD8+CD28+T細胞百分比均高于肝炎肝硬化組和原發(fā)性肝癌組，差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.05)；原發(fā)性肝癌組患者CD4+CD25+T細胞百分比高于慢性乙型肝炎組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；肝炎肝硬化組患者CD4+/CD8+高于慢性乙型肝炎組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；慢性乙型肝炎組、肝炎肝硬化組、原發(fā)性肝癌組患者CD3+細胞、CD4+細胞、NK細胞及CD4+CD45RA+細胞百分數(shù)差別均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)(表2)。

表1　各組患者生化指標分析(U/L)

注：▲與慢乙肝組比較P<0.05，★與肝硬化組比較P<0.05

表2　各組患者T細胞亞群分析(±s，%)

注：▲與慢乙肝組比較P<0.05

討　　論

人類HBV感染是世界范圍的公共衛(wèi)生問題。由于MHC多態(tài)性和易感性格局，以及其他關(guān)鍵基因的突變，中國有1.2億無癥狀攜帶者，在免疫低下的情況容易轉(zhuǎn)化為HBV慢性患者。HBV慢性感染可持續(xù)數(shù)十年，患者肝組織反復損傷，進行性進展為肝硬化和肝癌。

本研究中選擇慢性乙型肝炎患者、肝炎肝硬化患者及原發(fā)性肝癌患者為研究對象，進行外周血生化指標檢測。生化指標結(jié)果提示γ-GT、ALP、LDH以原發(fā)性肝癌組升高最明顯，CHE以肝癌組降低最明顯(P<0.05)。血清γ-GT主要來自肝臟，肝膽疾病時，γ-GT水平升高；ALP是需要經(jīng)過肝臟由膽汁排出，排泄過程中出現(xiàn)異常，引起ALP偏高；當肝病病情進一步惡化時，肝細胞損傷加重，LDH含量有不同程度增高；CHE是一種催化?；憠A水解的酶，由肝細胞合成，主要反映肝臟的合成和儲備能力[6-7]。原發(fā)性肝癌組相比慢性乙型肝炎組和肝炎肝硬化組，肝臟損傷更為嚴重，肝臟的合成和儲備功能降低。因此γ-GT、ALP、LDH升高最明顯。

HBV慢性感染是一個極為復雜的過程，涉及HBV逃逸、免疫識別與攻擊等若干機制以及宿主發(fā)生免疫耐受的機制。HBV感染的結(jié)局直接與抗HBV適應性細胞免疫應答的類型和強度相關(guān)。慢性HBV感染患者病毒持續(xù)復制，肝組織經(jīng)歷慢性損傷，容易發(fā)生纖維硬化和功能喪失，更傾向發(fā)生肝癌。由于每一個被感染宿主免疫應答差異以及HBV逃逸抗感染免疫策略的差異，并非每個慢性乙型肝炎患者發(fā)展為肝癌。本研究結(jié)果顯示，慢性乙型肝炎組CD8+T細胞、CD8+CD28+T細胞百分比均高于肝炎肝硬化組和原發(fā)性肝癌組(P均<0.05)。HBV 特異性T淋巴細胞免疫在病毒清除過程中起著重要作用，CD8+T細胞抑制病毒復制，決定是否能清除病毒的過程中起到關(guān)鍵作用。CD8+淋巴細胞上的 CD28+分子是參與乙型肝炎免疫應答的重要組成部分。有證據(jù)表明，說明機體參加免疫反應的免疫活性細胞已經(jīng)發(fā)生改變。CD8+CD28+被認為是T細胞亞群中的CD8+CTL，CD8+CD28+T淋巴細胞增多，為T細胞清除病毒做準備[8-10]。 朱春蘭等[11]發(fā)現(xiàn)，在健康對照組，HBV攜帶組，CHB、肝硬化組中，外周血CD8+CD28+T細胞數(shù)目呈遞減趨勢，兩兩之間比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P均<0.01)，與本研究結(jié)果一致。研究發(fā)現(xiàn)在肝炎肝硬化組和原發(fā)性肝癌組患者CD8+CD28+T細胞明顯降低，可能與HBV病毒持續(xù)存在、病情遷延不愈有關(guān)。CD8+T淋巴細胞表面CD28+分子的表達下降，會引起細胞毒性T細胞比例下降，而抑制性T細胞比例上升，導致病毒難以清除，病情逐漸進展。Franzese等通過四棱線蟲實驗分析發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+Treg能抑制乙型肝炎特異性CD8+T細胞介導的細胞免疫反應[12]。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞(Treg)是近十年發(fā)現(xiàn)的T細胞亞群，具有抑制效應T細胞功能的作用[13]。本研究結(jié)果顯示，在CD4+CD25+T細胞在原發(fā)性肝癌組中最高(P<0.05)，提示原發(fā)性肝癌CD4+CD25+T細胞增多引起細胞免疫反應下降。

綜上所述，本研究全面分析了慢性乙型肝炎、肝炎肝硬化、原發(fā)性肝癌等HBV感染的不同階段T細胞亞群的變化。研究結(jié)果顯示，不同類型慢性HBV感染者T細胞亞群存在差異，細胞免疫功能紊亂，不同類型患者應采用不同的免疫調(diào)節(jié)治療手段。

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(本文編輯：易玲)

國家自然科學基金項目(81302891)，上海市自然科學基金項目(14ZR1441600)

201203上海中醫(yī)藥大學附屬龍華醫(yī)院消化內(nèi)科/脾胃病研究所

邢練軍，Email：xingdoctor@126.com

2016-03-08)