李寧俠，付 琳，董恒利，李 凱，李毓新

血漿Lp-PLA2與尿AD7c-NTP聯(lián)合診斷AD的初步研究

李寧俠，付 琳，董恒利，李 凱，李毓新

目的 探析血漿脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（Lp-PLA2）與AD相關(guān)神經(jīng)絲蛋白（AD7c-NTP）聯(lián)合檢測在阿爾茨海默?。ˋD）診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 選擇西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科與西安市北方醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科收治53例AD患者作為觀察組，另從同期來進(jìn)行健康體檢者中隨機(jī)抽取53例作為對(duì)照組，比較兩組血漿Lp-PLA2與尿AD7c-NTP水平，并計(jì)算單純Lp-PLA2與尿AD7c-NTP診斷AD的診斷率及二者聯(lián)合診斷率。結(jié)果 觀察組Lp-PLA2與AD7c-NTP水平均顯著高于對(duì)照組（P＜0.01）；Lp-PLA2診斷AD的診斷率為71.7%（38/53），AD7c-NT為75.5%（40/53），均低于聯(lián)合診斷的92.5%（49/53）（P＜0.05）。結(jié)論 L血漿Lp-PLA2與尿AD7c-NTP聯(lián)合診斷AD可有效避免漏診，實(shí)現(xiàn)早期確診，為患者預(yù)后改善奠定基礎(chǔ)。

阿爾茨海默病；脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2；AD相關(guān)神經(jīng)絲蛋白；診斷

阿爾茨海默?。ˋlzheimer′s disease，AD）為進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病，與年齡有關(guān)。流行病學(xué)調(diào)查表明［1］，AD已成為死亡率位居第4位的疾病，僅次于心、腦血管疾病及腫瘤，我國60歲以上人群AD患病率達(dá)2%～5%。AD以記憶障礙伴認(rèn)知障礙為核心癥狀，且起病隱蔽、病程呈不可逆發(fā)展，預(yù)后差，而早期診治對(duì)改善患者生活質(zhì)量及提高生存率意義重大，早期診斷方法的選擇也因此成為臨床熱門研究課題。目前，臨床主要以tau蛋白、血清β生物標(biāo)志物A、神經(jīng)心理學(xué)評(píng)分、影像學(xué)檢查等作為AD診斷依據(jù)，但上述方法敏感性低、缺乏良好辨識(shí)率，多數(shù)患者就診時(shí)往往已處于晚期，失去早期治療機(jī)會(huì)。有研究提出［2］，AD相關(guān)神經(jīng)絲蛋白（AD7c-NTP）在AD患者腦中呈分泌性上調(diào)表達(dá)；脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（Lp-PLA2）為獨(dú)立于心血管因素且與癡呆風(fēng)險(xiǎn)的炎癥因子。本研究對(duì)血漿Lp-PLA2與尿AD7c-NTP聯(lián)合檢測在AD診斷中的應(yīng)用價(jià)值進(jìn)行初步探索。

1 資料與方法

1.1 病例資料 選擇西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科與西安市北方醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科2012年1月～2015年12月收治的53例AD患者作為觀察組，另從同期進(jìn)行健康體檢者中隨機(jī)抽取53例作為對(duì)照組。兩組性別、年齡、空腹血糖、體質(zhì)量指數(shù)、總膽固醇、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、C反應(yīng)蛋白等基線資料的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，表1）。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) AD組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)精神科分會(huì)所制定 《中國精神障礙分類與診斷標(biāo)準(zhǔn)》［3］中AD標(biāo)準(zhǔn)診斷；（2）Hachinski缺血量表評(píng)分≤4分；（3）MMSE評(píng)分：文化程度中學(xué)以上≤24分，小學(xué)≤20分，文盲≤17分；（4）CDR評(píng)分1～2分；（5）簽署知情同意書。對(duì)照組納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）智能檢查正常；（2）簽署知情同意書。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）心電圖、血常規(guī)、血壓、血糖、血脂、維生素B12、甲狀腺功能異常者；（2）合并肝腎障礙或內(nèi)分泌疾病者；（3）頭顱CT或MRI證實(shí)存在頭顱占位性病變或感染者。

1.4 檢測指標(biāo)

1.4.1 Lp-PLA2 非空腹?fàn)顟B(tài)下采血，3000 r/min離心15 min，取上清置于EP管中，于-80℃下保存待測。應(yīng)用Spectra Max M2酶標(biāo)儀（美國Molecular Device公司生產(chǎn)）檢測，標(biāo)準(zhǔn)品稀釋與加樣均按試劑盒（上海高創(chuàng)化學(xué)科技有限公司）說明書操作，加待測血清，并設(shè)置不加樣品及酶標(biāo)試劑的空白對(duì)照孔，用空白對(duì)照孔進(jìn)行調(diào)零，測定450 nm波長下各孔吸光度（A值），并于加入終止液后15 min內(nèi)完成測定。繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算Lp-PLA2值。

1.4.2 AD7c-NTP 應(yīng)用Spectra Max M2酶標(biāo)儀及AD7c-NTP酶聯(lián)免疫檢測試劑盒 （深圳市安群工程有限公司）檢測。留取晨尿中段尿，混勻后首先觀察，若尿液顏色很深或較渾濁則棄去，重新采集清亮合格尿標(biāo)本，400 r/min離心5min，專用塑料試管將離心后尿液存于-20℃下待測，時(shí)間＜1 w。測定時(shí)首先將標(biāo)本平衡至室溫，按試劑盒說明書操作。測定450 nm波長處吸光度值，用試劑盒內(nèi)所含AD7c-NTP標(biāo)準(zhǔn)品制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定尿樣本中AD7c-NTP濃度。每組標(biāo)本重復(fù)測定3次，取平均值。

1.5 診斷標(biāo)準(zhǔn) 血漿Lp-PLA2診斷AD判定標(biāo)準(zhǔn)：Lp-PLA2＞45 ng/ml；尿AD7c-NTP診斷AD判定標(biāo)準(zhǔn)：AD7c-NTP＞1.44μg/L。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料以例和百分率表示，行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料以±s表示，行成組t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血漿Lp-PLA2和尿AD7c-NTP水平比較觀察組Lp-PLA2與尿AD7c-NTP水平均顯著高于對(duì)照組（P＜0.01，表2）。

表2　-PLA2和尿AD7c-NTP水平比較（n=53）兩組血漿Lp

2.2 血漿Lp-PLA2與尿AD7c-NTP及二者聯(lián)合診斷AD的診斷率比較 血漿Lp-PLA2和尿AD7c-NT診斷AD的診斷率均低于二者聯(lián)合診斷（P＜0.05，表3）。

表3　血漿Lp-PLA2與尿AD7c-NTP及二者聯(lián)合診斷AD的診斷率比較

3 討論

3.1 AD及其生物標(biāo)志物研究現(xiàn)狀 AD發(fā)病機(jī)制目前尚不明確，以β淀粉樣蛋白毒性假說、突觸功能障礙、tau蛋白過度磷酸化、線粒體損傷、神經(jīng)遞質(zhì)障礙、細(xì)胞凋亡學(xué)說等假說為主［4］。目前臨床常用AD生物標(biāo)志物包括腦脊液標(biāo)志物Aβ42、血液標(biāo)志物載脂蛋白E等，其中Aβ42有較高診斷率，達(dá)80%～90%［5］，已得到廣泛認(rèn)可。但目前研究結(jié)果顯示［6］，其敏感性與特異性均較差，推薦作為輔助診斷手段。2012年，國際AD協(xié)會(huì)多名專家呼吁著力探索AD血液學(xué)標(biāo)志物，尤其對(duì)于疑似臨床前期或輕度認(rèn)知功能障礙診斷的標(biāo)志物。

表1　 兩組基線資料的比較（n=53）

3.2 Lp-PLA2診斷AD的價(jià)值分析 有研究將Lp-PLA2作為癡呆獨(dú)立危險(xiǎn)因素［7］，認(rèn)為Lp-PLA2升高者發(fā)生癡呆概率更高。Lp-PLA2屬磷脂水解酶家族，具水解血小板活化因子作用，為重要炎癥因子之一。Lp-PLA2與低密度脂蛋白膽固醇結(jié)合易增加猝死風(fēng)險(xiǎn)。有研究發(fā)現(xiàn)［8］，AD早期病理主要表現(xiàn)為突觸丟失及相關(guān)突觸素下降，主要與Aβ沉積有關(guān)。而最新研究顯示［9］，Lp-PLA2阻斷劑可抑制Aβ所介導(dǎo)突觸變性，誘導(dǎo)血小板活化因子產(chǎn)生，促進(jìn)機(jī)體分泌地諾前列酮，抑制突觸變性。本研究中，AD患者Lp-PLA2水平明顯高于對(duì)照組，提示Lp-PLA2升高為AD患者重要病理改變之一。同時(shí)應(yīng)用Lp-PLA2＞45 ng/m l作為標(biāo)準(zhǔn)所得AD診斷率為71.7%，提示將其作為AD診斷的生物標(biāo)志物具有一定價(jià)值。值得注意的是，目前有關(guān)Lp-PLA2診斷AD的臨界值并無統(tǒng)一結(jié)果，但不少臨床研究顯示［10］，智能正常人群Lp-PLA2往往≤45 ng/ml，因而本研究將其作為判定標(biāo)準(zhǔn)。俞春江等［11］的研究也發(fā)現(xiàn)，不同認(rèn)知功能障礙患者Lp-PLA2水平差異較大，血管性癡呆最高、AD其次、輕度認(rèn)知功能障礙最低。

3.3 尿AD7c-NTP診斷AD的價(jià)值分析 大量臨床研究顯示［12］，早期 AD患者AD7c-NTP明顯升高。AD7c-NTP為神經(jīng)絲蛋白家族成員，主要在組織學(xué)不完整變性神經(jīng)元中表達(dá)。神經(jīng)元細(xì)胞衰亡后，AD7c-NTP被釋放至腦脊液并經(jīng)尿液排出。AD早期，AD7c-NTP基因過度表達(dá)致AD7c-NTP免疫活性增強(qiáng)，引起細(xì)胞骨架病變。此外，AD7c-NTP過度表達(dá)還會(huì)引起線粒體功能受損，成為AD早期重要生物學(xué)事件，患者腦脊液及尿液中含量與AD嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，利于病情評(píng)估。本研究中AD患者尿AD7c-NTP水平明顯高于對(duì)照組，單獨(dú)應(yīng)用尿AD7c-NTP診斷AD診斷率為75.5%。尿AD7c-NTP檢測具有無創(chuàng)性，易被老年患者及家屬接受。

3.4 血漿Lp-PLA2與尿AD7c-NTP聯(lián)合檢測臨床價(jià)值分析 為提高AD診斷診斷率，聯(lián)合診斷已成為大勢所趨。本研究將二者聯(lián)合后所得診斷率高達(dá)92.5%（49/53），顯著高于Lp-PLA2或尿AD7c-NTP單獨(dú)檢測，提示聯(lián)合診斷意義重大。筆者認(rèn)為，Lp-PLA2與AD7c-NTP分別從炎癥反應(yīng)及線粒體功能受損等不同方面進(jìn)行診斷，由于不同患者發(fā)病機(jī)制不同，因而其主要病理改變也存在差異，若患者為突觸功能障礙或神經(jīng)遞質(zhì)障礙所致AD，則應(yīng)用Lp-PLA2診斷可取得較好效果，尿AD7c-NTP無明顯變化；若為線粒體損傷所致AD，則Lp-PLA2不明顯。二者聯(lián)合后，從不同病變發(fā)現(xiàn)病情并診斷，可避免漏診，提高診斷準(zhǔn)確性，臨床價(jià)值更大。

綜上所述，Lp-PLA2與AD7c-NTP水平改變?yōu)锳D患者重要病理改變的體現(xiàn)，二者聯(lián)合診斷AD可有效避免漏診，實(shí)現(xiàn)AD早期確診，為患者預(yù)后改善奠定基礎(chǔ)。

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A preliminary study on plasma Lp-PLA2 combined with urinary AD7c-NTP in diagnosis of AD

Li Ningxia1，F(xiàn)u Lin2，Dong Hengli1，Li Kai1，Li Yuxin1
1.Department of Laboratory，the Second Affiliated Hospital of Xi′an Medical College，Xi′an，Shaanxi，710038，China；2.Departmentof Neurology，Xi′an North Hospital，Xi′an，Shaanxi，710038，China

Objective To explore the application value of plasma lipoprotein associated phospholipase A2（Lp-PLA2）combined with AD associated neurofilament protein （AD7c-NTP）in the diagnosis of Alzheimer′s disease （AD）.Methods A total of 53 AD patientswho were admitted to Departmentof Laboratory of the Second Affiliated Hospital of Xi′an Medical College and Department of Neurology in Xi′an North Hospital were selected to constitute an observation group；another 53 persons who underwent physical examination during the same period were random ly selected to constitute a control group.Plasma Lp-PLA2 and urinary AD7c-NTP levels in the two groups were compared.The diagnostic rates of simple Lp-PLA2 and urinary AD7c-NTP and the combination in AD were calculated.Results The levels of Lp-PLA2 and AD7c-NTP in the observation group were significantly higher than those in the control group（P＜0.01）.The accuracy rate of Lp-PLA2 in diagnosis of AD was 71.7% （38/53）while that of urinary AD7c-NT was 75.5%（40/53）which were lower than that of the combined diagnostic rate［92.5%（49/53）］（P＜0.05）.Conclusion The diagnosis of AD by Lp-PLA2 combined with AD7c-NTP can effectively avoid missed diagnosis，realize early diagnosis and lay foundation for the improvementof the prognosis of patients.

AD；Lp-PLA2；AD7c-NTP；diagnosis

R 745.1

A

1004-0188（2016）10-1099-03

10.3969/j.issn.1004-0188.2016.10.003

2016-01-26）

710038西安，西安醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科（李寧俠，董恒利，李 凱，李毓新）；西安市北方醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科（付 琳）