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        研究熒光原位雜交技術(shù)用于急性早幼粒細胞白血病患者診治中的臨床效果

        2016-11-03 13:29:10廖麗娟
        中國實用醫(yī)藥 2016年25期
        關(guān)鍵詞:診治

        廖麗娟

        【摘要】 目的 研究在急性早幼粒細胞白血?。ˋPL)患者診治中應(yīng)用熒光原位雜交技術(shù)(FISH)的臨床效果。方法 20例疑似APL患者作為研究對象, 應(yīng)用FISH檢測PML-RARa融合基因, 分析檢測結(jié)果。結(jié)果 20例患者中確診為APL患者有15例, 其中 PML-RARa融合基因檢測結(jié)果為陽性的有14例, 陰性的有1例, 這1例患者經(jīng)檢查診斷為APL變異型, 誘導(dǎo)治療沒有取得顯著效果;疑似APL的5例患者 PML-RARa融合基因檢測結(jié)果都為陰性, 經(jīng)其他檢查診斷為急性髓細胞白血病M2。PML-RARa融合基因檢測敏感度為93.3%, 特異性為100.0%。結(jié)論 FISH能夠準(zhǔn)確檢測 PML-RARa融合基因, 提高APL的診斷準(zhǔn)確率, 值得推廣。

        【關(guān)鍵詞】 熒光原位雜交技術(shù);急性早幼粒細胞白血病;診治

        DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.25.029

        APL是一種特殊的急性白血病, 患者會有嚴重的出血傾向, 并且很容易伴發(fā)彌散性血管內(nèi)凝血, 死亡率較高[1]。APL患者中絕大多數(shù)都存在特異的染色體易位t, 從而有PML-RARa融合基因形成[2]。PML-RARa融合基因是APL的一項重要指標(biāo), 可以作為診斷標(biāo)準(zhǔn)之一。FISH操作簡便, 結(jié)果的準(zhǔn)確性高[3]。本研究主要分析FISH對于APL的診治效果, 報告如下。

        1 資料與方法

        1. 1 一般資料 選取本院2014年7月~2015年7月收治的20例疑似APL患者, 其中男13例, 女7例, 平均年齡(44.9±9.3)歲, 平均病程(1.42±0.97)年;有9例患者出血是主要臨床癥狀, 其中2例為結(jié)膜出血、1例為皮膚紫癜、3例為鼻出血、3例為齒齦出血;有8例患者乏力、頭暈為主要臨床癥狀;有3例患者發(fā)熱為主要臨床癥狀。20例患者經(jīng)臨床診斷確診為APL的患者有15例。

        1. 2 方法

        1. 2. 1 制備細胞 選取患者1 ml肝素抗凝骨髓, 利用Ficoll對單個核細胞進行分離, 利用0.56%氯化鉀溶液對細胞進行低滲處理, 然后完成固定和滴片。

        1. 2. 2 融合基因探針 PML探針為紅色熒光信號, RARa探針為綠色信號。

        1. 2. 3 雜交 在70%甲酰胺/2×SSC的溫度為73℃變性液中將玻片浸泡5 min, 然后借助乙醇進行1 min的脫水處理, 氣干待用。在73℃水浴中將探針混合物進行5 min的變性, 滴在45℃預(yù)溫的帶雜交玻片上, 然后完成蓋片和封膠處理, 放入37℃的濕盒中進行16~20 h的雜交處理。按照順序浸入73℃ 0.4×SSC、2×SSC/0.1% NP40中進行漂洗, 在避免陽光直射的條件下氣干, 添加10 DAPI進行復(fù)染, 然后進行蓋片封片。

        1. 3 判定標(biāo)準(zhǔn) 在同一視野下借助顯微鏡利用兩種濾光片對雜交信號進行觀察, PML-RARa融合基因陰性細胞可以觀察到2綠和2紅分離的雜交信號, 陽性細胞可以觀察到1紅1綠和2紅綠融合的4個信號。每例計數(shù)>200個中期分裂象, 計算陽性率。陰性對照:選擇10例正常骨髓樣本, 選擇PML-RARa融合基因探針完成FISH檢查, 有陽性信號出現(xiàn)百分率均數(shù)為0.8%, 標(biāo)準(zhǔn)差為1.03%, 異常閾值為均數(shù)與3倍標(biāo)準(zhǔn)差之和, 最后計算出為3.9%。所以, 陽性病例標(biāo)準(zhǔn)為陽性信號細胞百分率>3.9%。

        2 結(jié)果

        2. 1 15例被確診為APL的患者14例PML-RARa融合基因結(jié)果為陽性, 在陽性樣本中, 陽性細胞率在9.5%~80.2%之間(異常閾值=3.9%), 檢測敏感度為93.3%, 特異性為100.0%;PML-RARa融合基因結(jié)果為陰性的患者有1例, 對該患者進一步進行骨髓染色體檢查以及流式細胞學(xué)檢查最后診斷為變異型M3。疑似APL的5例患者利用FISH技術(shù)檢測PML-RARa融合基因結(jié)果顯示都是陰性, 另外進一步骨髓染色體檢查以及流式細胞學(xué)檢查也無法診斷為APL。

        2. 2 14例PML-RARa融合基因結(jié)果為陽性的患者接受并完成誘導(dǎo)治療的患者有12例, 其中2例在10 d內(nèi)死亡, 其余患者在結(jié)束治療后癥狀均有明顯緩解。12例患者中進行維持和鞏固治療的患者有10例, 其余2例失訪。10例接受鞏固維持治療的患者中有9例直到現(xiàn)在仍為緩解狀態(tài), 借助FISH技術(shù)檢測PML-RARa融合基因結(jié)果都是陰性。在治療期間出現(xiàn)病情加重的患者有1例, 借助FISH技術(shù)檢測PML-RARa融合基因結(jié)果為陽性, 最后由于心力衰竭死亡。

        2. 3 PML-RARa融合基因結(jié)果為陰性的1例APL患者進行了誘導(dǎo)治療60 d后還是沒有全部緩解, 借助FISH技術(shù)對PML-RARa融合基因進行檢測結(jié)果都顯示為陰性, 直到現(xiàn)在病情都沒有得到改善。

        2. 4 疑似APL的5例患者, 借助FISH技術(shù)對PML-RARa融合基因進行檢測結(jié)果都是陰性, 之后經(jīng)其他方式診斷為急性髓細胞白血病M2。給予常規(guī)化療治療后得到有效緩解。

        3 討論

        近些年對于分子生物學(xué)以及細胞遺傳學(xué)研究的不斷深入, 以往對于FAB的分型基礎(chǔ)為細胞化學(xué)和形態(tài)學(xué), 當(dāng)前逐漸形成了MICM分型, 聯(lián)合了分子生物學(xué)、細胞遺傳學(xué)、免疫學(xué)、細胞形態(tài)學(xué)[4]。以往FAB分型主要不足包括:①由于基礎(chǔ)為細胞化學(xué)檢查和細胞形態(tài)學(xué), 導(dǎo)致其診斷準(zhǔn)確性只有65%左右, 部分APL的細胞形態(tài)很容易混淆急性髓細胞白血病M2。②診斷APL一個重要的標(biāo)準(zhǔn)是早幼粒細胞>30%, 另外急性髓細胞白血病M2診斷的一個重要標(biāo)準(zhǔn)是早幼粒細胞>10%, 而計數(shù)早幼粒細胞有50%都是靠醫(yī)生直接的肉眼觀察[5, 6]。所以這兩類分型的白細胞主觀性比較強。

        本研究對PML-RARa融合基因借助FISH技術(shù)進行檢測, 結(jié)果敏感性為93.3%, 疑似APL的5例患者檢測結(jié)果均為陰性, 通過其他各類檢查排除APL, 這也很好的說明了PML-RARa融合基因借助FISH技術(shù)檢測的敏感性較高, 用于APL診斷中的價值非常顯著, 值得臨床推廣。

        參考文獻

        [1] 張濟, 李羿, 李君君, 等.應(yīng)用RT-PCR和熒光原位雜交監(jiān)測急性早幼粒細胞白血病微小殘留白血病.中國實驗診斷學(xué), 2012, 16(3):423-425.

        [2] 劉洋, 雷婷, 陳雙, 等.急性早幼粒細胞白血病染色體易位聯(lián)合R顯帶和間期熒光原位雜交技術(shù)分析.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報, 2013, 36(7):938-941.

        [3] 劉小寧, 于亮, 曹維克, 等.一例同時伴有t(7;17;15)和8p-的急性早幼粒細胞白血病的臨床研究.蘇州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版), 2011, 31(3):448-450.

        [4] 黃正剛, 陳啟文, 吳星恒, 等.熒光原位雜交技術(shù)檢測 PML/RARa 融合基因在兒童 APL 微小殘留病中的應(yīng)用.實用臨床醫(yī)學(xué), 2015, 16(11):65-68.

        [5] 王蓉, 繆扣榮, 仇海榮, 等.間期熒光原位雜交和常規(guī)染色體分析診斷急性早幼粒細胞白血病的比較.中國實驗血液學(xué)雜志, 2011, 19(4):983-986.

        [6] 吳東升. 三氧化二砷聯(lián)合全反式維甲酸治療初治急性早幼粒細胞白血病臨床觀察. 中外醫(yī)學(xué)研究, 2014, 12(12):30-31.

        [收稿日期:2016-04-22]

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