王國(guó)江 高曉燕 李婷 張海清 陳向明 胡陽(yáng)

201318上海市浦東新區(qū)周浦醫(yī)院皮膚科（王國(guó)江、高曉燕）；上海市嘉定區(qū)南翔醫(yī)院皮膚科（李婷、張海清、陳向明、胡陽(yáng)）

蒿甲醚體外抗毛囊蠕形螨活性分析

王國(guó)江 高曉燕 李婷 張海清 陳向明 胡陽(yáng)

201318上海市浦東新區(qū)周浦醫(yī)院皮膚科（王國(guó)江、高曉燕）；上海市嘉定區(qū)南翔醫(yī)院皮膚科（李婷、張海清、陳向明、胡陽(yáng)）

目的觀察蒿甲醚體外抗毛囊蠕形螨效果，為蒿甲醚治療毛囊蠕形螨感染性皮膚病提供依據(jù)。方法采用花生油將蒿甲醚分別稀釋成濃度為20、10、5和2.5 g/L，分別處理實(shí)驗(yàn)組蠕形螨；對(duì)照組蠕形螨單純用花生油處理。各組均隨機(jī)選取32只活體毛囊蠕型螨進(jìn)行體外抗螨實(shí)驗(yàn)，pH儀分別測(cè)定各組蒿甲醚pH值。結(jié)果20、10、5和2.5 g/L蒿甲醚組及對(duì)照組體外殺螨時(shí)間中位數(shù)（P25～P75）分別為3.00（2.00～3.88）、6.00（4.13～7.25）、13.00（11.63～14.50）、17.00（15.25～20.75）和34.00（23.50～39.50）h，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（H=133.954，P＜0.001）；各蒿甲醚組蟲(chóng)體死亡時(shí)間均短于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），且隨蒿甲醚濃度增高殺螨時(shí)間逐步縮短，但10 g/L蒿甲醚組和20 g/L蒿甲醚組間蟲(chóng)體死亡時(shí)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。各蒿甲醚組與對(duì)照組藥液pH均在7.0～7.1之間，接近中性。結(jié)論20、10、5和2.5 g/L蒿甲醚對(duì)體外活體蠕形螨均有殺滅作用，蒿甲醚可能成為治療毛囊蠕型螨感染的備選藥物之一。

螨感染；螨；殺螨劑；寄生蟲(chóng)敏感性試驗(yàn)；蒿甲醚

蒿甲醚是青蒿素的衍生物之一，同類(lèi)藥物還有蒿乙醚和青蒿琥酯等，主要用于各類(lèi)瘧疾的治療。近年研究發(fā)現(xiàn)，青蒿素及其衍生物還具有廣譜抗寄生蟲(chóng)作用，對(duì)血吸蟲(chóng)、肺孢子蟲(chóng)、弓形蟲(chóng)、陰道毛滴蟲(chóng)、利什曼原蟲(chóng)、鞭毛蟲(chóng)等均有殺滅作用［1］。本課題組既往研究顯示，口服青蒿琥酯治療酒渣鼻的療效與鹽酸多西環(huán)素腸溶膠囊相似［2］。然而蒿甲醚是否對(duì)毛囊蠕形螨有殺滅作用還值得進(jìn)一步探索。傳統(tǒng)毛囊蠕形螨感染的治療藥物主要是硝基咪唑類(lèi)藥物，但該類(lèi)藥物只對(duì)部分毛囊蠕型螨皮炎有效，對(duì)部分患者療效較差。本研究采用不同濃度蒿甲醚進(jìn)行體外抗螨實(shí)驗(yàn)，觀察其有無(wú)抗毛囊蠕型螨的藥理作用，并尋找該藥的有效抗螨濃度。

一、材料與方法

1.試劑：蒿甲醚注射液（昆明制藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)20140820），每支1ml，含蒿甲醚80mg，溶劑為花生油（上海遠(yuǎn)香貿(mào)易有限公司生產(chǎn)，批號(hào)201401205）。

2.蠕形螨來(lái)源：2014年1-12月期間，選擇本院皮膚科門(mén)診2個(gè)月內(nèi)未經(jīng)任何藥物治療的酒渣鼻且實(shí)驗(yàn)室檢查有蠕形螨感染者32例，常規(guī)消毒皮膚，采用擠壓刮拭法，用一次性刮匙刮取毛囊螨感染者面部皮脂置于潔凈載玻片上，每例患者隨機(jī)選取活體螨蟲(chóng)5條，分別分配到5組中，每組1條。32例患者共獲取活毛囊蠕形螨160只，每組32只活螨。室溫22～25℃，將載玻片放入濕盒，在1 h內(nèi)開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

3.藥物與分組：根據(jù)小鼠預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，＞20 g/L蒿甲醚可能會(huì)增大引起小鼠刺激性皮炎的概率，故確定20 g/L蒿甲醚為濃度上限。用花生油將蒿甲醚分別稀釋成濃度為20、10、5和2.5 g/L，分別處理實(shí)驗(yàn)組蠕形螨。對(duì)照組蠕形螨單純用花生油處理。

4.藥液pH值測(cè)定：各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組隨機(jī)抽取8份藥液，測(cè)定pH值。

5.體外抗螨實(shí)驗(yàn)［3］：在22～25℃室溫下進(jìn)行。先將刮取的皮脂標(biāo)本均勻涂布，再用蓋玻片的一角挑取少許皮脂，均勻涂布在各組載玻片上，逐張按以下步驟觀察：光鏡下鑒定活動(dòng)良好的毛囊蠕形螨1條，細(xì)針蘸取出活螨，放到另外一張潔凈載玻片上，滴加藥液或?qū)φ栈ㄉ停由w玻片，即刻分別觀察上述各組每條螨蟲(chóng)存活時(shí)間，每0.5 h觀察1次，以螨蟲(chóng)肢體在1min內(nèi)不運(yùn)動(dòng)判斷為死亡。

6.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件，多組間蠕形螨死亡時(shí)間比較采用Kruskal?WallisH檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

1.藥液pH值：20、10、5和2.5 g/L蒿甲醚組和對(duì)照組pH值分別為7.05±0.27、7.01±0.03、7.02±0.02、7.1±0.03、7.08±0.03，各組pH值差別微小，基本為中性，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響可以忽略不計(jì)。

2.體外抗螨實(shí)驗(yàn)：各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的蟲(chóng)體死亡時(shí)間見(jiàn)表1。經(jīng)Kruskal?WallisH檢驗(yàn)，各組間蟲(chóng)體死亡時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（H=133.954，P＜0.001）。各實(shí)驗(yàn)組蟲(chóng)體死亡時(shí)間均短于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），隨蒿甲醚濃度增高殺螨時(shí)間逐步縮短，但10 g/L蒿甲醚組和20 g/L蒿甲醚組間蟲(chóng)體死亡時(shí)間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3.光鏡下觀察蟲(chóng)體：活體蠕形螨多呈黑色，彎曲，肢體運(yùn)動(dòng)（圖1）。蠕型螨在死亡前運(yùn)動(dòng)幅度逐漸減小，顏色變淡灰色，蟲(chóng)體變直、皺縮（圖2）。

三、討論

近年研究顯示，酒渣鼻患者皮膚單位面積毛囊蠕型螨數(shù)量明顯增多［4］。反射式共聚焦顯微鏡顯示，抗螨治療后面部皮疹好轉(zhuǎn)，毛囊蠕型螨數(shù)量同時(shí)也明顯減少［5］。O′Reilly等［6］發(fā)現(xiàn)，毛囊蠕型螨相關(guān)性菌體蛋白與紅斑性毛細(xì)血管擴(kuò)張型酒渣鼻存在正相關(guān)。青蒿類(lèi)藥物有抗多種寄生蟲(chóng)、抗炎及抗腫瘤等藥理作用。本研究顯示，在室溫下，5 g/L以上濃度蒿甲醚體外具有殺滅毛囊蠕形螨的作用，5～20 g/L蒿甲醚殺滅毛囊蠕形螨時(shí)間為3.09～12.84 h，是一種溫和的殺蟲(chóng)藥物。有文獻(xiàn)［7］報(bào)道，青蒿素類(lèi)藥物可以通過(guò)抑制基質(zhì)金屬蛋白酶2、基質(zhì)金屬蛋白酶9和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子發(fā)揮抗血管生成作用，這可能是外用青蒿素類(lèi)藥物治療酒渣鼻炎性紅斑的機(jī)制之一。

因蒿甲醚注射液是以花生油做藥物溶劑，所以本實(shí)驗(yàn)藥物稀釋液及對(duì)照組均采用花生油。研究發(fā)現(xiàn)，室溫下單純用花生油處理的蠕形螨平均存活時(shí)間約為35 h，而石蠟油處理的蠕形螨平均存活時(shí)間約為27 h［8］，前者蟲(chóng)體存活時(shí)間長(zhǎng)可能與花生油提供了蟲(chóng)體所需部分能量有關(guān)。

表1 不同濃度蒿甲醚體外抗蠕形螨實(shí)驗(yàn)各組蠕形螨死亡時(shí)間比較（h）

圖1 活體蠕型螨呈黑色、彎曲（×100）圖2 20 g/L蒿甲醚作用3 h，蠕型螨死亡，呈灰色，蟲(chóng)體伸直、萎縮（×100）

總之，蒿甲醚有明顯抗毛囊蠕形螨活性，為其治療毛囊蠕形螨感染性皮膚病提供重要用藥依據(jù)，但其殺蟲(chóng)機(jī)制還需進(jìn)一步研究。

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［2］李婷,胡陽(yáng),俞愛(ài)華,等.口服青蒿琥酯治療酒渣鼻31例臨床觀察［J］.中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志,2015,29（3）:330?332.DOI:10.13735/j.cjdv.1001?7089.201402021.Li T,Hu Y,Yu AH,et al.Clinical research of the efficacy of artesunate in 31 patients with rosacea［J］.Chin JDerm Venereol,2015,29（3）:330?332.DOI:10.13735/j.cjdv.1001?7089.201402021.

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In vitro activity of artemether against Demodex folliculorum

Wang Guojiang,Gao Xiaoyan,Li Ting,Zhang Haiqing,Chen Xiangming,Hu Yang

Department ofDermatology,Zhoupu Hospital of Pudong New Distrct,Shanghai 201318,China（Wang GJ,Gao XY）;Department ofDermatology,Nanxiang Hospital of Jiading District,Shanghai 201802,China（Li T,Zhang HQ,Chen XM,Hu Y）

Chen Xiangming,Email:LC_1212@sina.com

Objective To assess thein vitroantimite activity ofartemether againstDemodex folliculorum,and to provide evidence for the use of artemether in the treatment of skin diseases caused byDemodex folliculoruminfection.M ethods Artemetherwas diluted to different concentrations（20,10,5 and 2.5 g/L）with peanut oil.The pH values ofworking solutions of artemether and peanut oilweremeasured.Demodex folliculorummiteswere divided into several groups（32mites in each group）to be treated with artemether（20,10,5 and 2.5 g/L,artemether groups）or peanutoil（control group）.Results There were significant differences in the time required for killing ofDemodex folliculorumamong the 20?,10?,5?and 2.5?g/L artemether groupsand controlgroup（Median［P25-P75］:3.00［2.00-3.88］vs.6.00［4.13-7.25］vs.13.00［11.63-14.50］vs.17.00［15.25-20.75］vs.34.00［23.50-39.50］hours,H=133.954,P＜0.001）.Additionally,the time required for killing ofDemodex folliculorumwas significantly shorter in these artemether groups than in the control group（allP＜0.001）,and was gradually shortened with the increase of artemether concentrations,butwas similar between the 10?and 20?g/L artemether groups（P＞0.05）.Moreover,the pH values ofworking solutions of artemether and peanut oil ranged between 7.0 and 7.1,and were close to neutral.Conclusion Artemether at20,10,5 and 2.5 g/L can killDemodex folliculorum in vitro,so artemethermay serve asan alternative drug for the treatmentofDemodex folliculoruminfection.

Mite infestations;Mites;Acaricides;Parasitic sensitivity tests;Artemether

陳向明，Email：LC_1212@sina.com

10.3760/cma.j.issn.0412?4030.2016.11.012

上海市浦東新區(qū)科委項(xiàng)目（PKJ2016?Y09）

Fund program:Pudong New DistrictScience and Technology Committee Project in Shanghai（PKJ2016?Y09）

2016?02?15）

（本文編輯：周良佳顏艷）