姚菊霞

（定西市動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅定西　743000）

甘肅省首屆獸醫(yī)系統(tǒng)征文選登

豬四種疫苗分點(diǎn)同步免疫與單苗免疫的效果對比試驗(yàn)

姚菊霞

（定西市動物疫病預(yù)防控制中心，甘肅定西743000）

為了研究豬多苗分點(diǎn)同時免疫效果，探索一種切實(shí)可行的動物防疫新方法，以此提高基層動物防疫水平。本研究將口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征和豬鏈球菌4種疫苗進(jìn)行不同組合試驗(yàn)，即分別進(jìn)行單苗、兩兩組合、三三組合、4種疫苗同時分點(diǎn)注射。試驗(yàn)分為15組，每組20頭，用正向間接血凝試驗(yàn)和ELISA方法檢測免疫抗體。結(jié)果表明：口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征和豬鏈球菌4種疫苗分點(diǎn)同時注射產(chǎn)生的抗體水平，與單苗注射相比，差異不顯著（P＞0.05），疫苗注射后產(chǎn)生的抗體效價相對較高且穩(wěn)定，不同疫苗間產(chǎn)生的抗體干擾和拮抗作用不明顯，且抗體合格率均在70%以上，達(dá)到了國家規(guī)定的免疫要求，因此該免疫接種方法可在實(shí)際工作中推廣應(yīng)用。

豬；疫苗；不同組合；分點(diǎn)注射；免疫抗體；合格率

近年來，隨著畜牧業(yè)的快速發(fā)展，養(yǎng)豬業(yè)的規(guī)模和數(shù)量逐年增長，與此同時發(fā)生動物疫病的風(fēng)險也在增加，部分地區(qū)出現(xiàn)了多種豬病的流行，且不斷有新病出現(xiàn)［1］，從流行范圍和危害程度來看，豬口蹄疫、豬瘟和豬繁殖與呼吸綜合征仍然是目前危害養(yǎng)豬業(yè)的主要動物疫病。再加上其他畜禽重大疫病的流行和人畜共患病的暴發(fā)，使得動物疫病的防控形勢異常嚴(yán)峻，也給各級畜牧部門如何做好動物防疫工作提出新的挑戰(zhàn)和要求。加強(qiáng)動物疫病防控，提高動物疫病防制技術(shù)水平是搞好畜牧養(yǎng)殖業(yè)生產(chǎn)的關(guān)鍵，研究和推廣這項(xiàng)技術(shù)，對提高養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟(jì)效益，促進(jìn)畜牧業(yè)可持續(xù)發(fā)展有著十分重要的意義。

國家對動物疫病防控工作高度重視，實(shí)施強(qiáng)制免疫的動物疫苗種類較多且逐年增加，目前正用于強(qiáng)制免疫的豬疫苗主要有口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征等3種疫苗，采用“一畜一針，分次注射”傳統(tǒng)免疫方法，不但增加了基層獸醫(yī)工作者的工作量，加大了防疫工作難度，而且從近幾年甘肅省通渭縣免疫抗體監(jiān)測情況來看，豬口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征等疫病的免疫抗體效價較低。為了探索和創(chuàng)新動物免疫新方法，改進(jìn)和提高動物防疫水平，2013～2015年，研究組在甘肅省通渭縣開展了豬O型口蹄疫苗、豬瘟苗、豬繁殖與呼吸綜合征苗、豬鏈球菌苗分組分點(diǎn)同時免疫試驗(yàn)，從而確定4種疫苗分點(diǎn)同時免疫的效果。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動物

在甘肅省通渭縣轄區(qū)隨機(jī)選擇5個存欄量在100頭左右的養(yǎng)豬場，選取2～3月齡未經(jīng)任何疫苗免疫的健康豬300頭作為試驗(yàn)豬，免疫前對試驗(yàn)豬進(jìn)行基礎(chǔ)抗體滴度測定，所選試驗(yàn)豬豬瘟抗體檢測陰性，口蹄疫感染抗體檢測陰性，免疫抗體滴度低于1∶16。

1.2試驗(yàn)疫苗

豬口蹄疫O型滅活疫苗（O/MYA98/BY/2010株），由中農(nóng)威特生物科技股份有限公司生產(chǎn)，批號為H141060J；豬瘟活疫苗（脾淋源），由山東綠都生物科技有限公司生產(chǎn)，批號為1412053；豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗（NVDC-JXA1株），由瑞普（保定）生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號為141216；豬鏈球菌病2型滅活疫苗，由上海海利生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，批號為20140609。

1.3檢測試劑

O型口蹄疫抗體檢測試劑盒，購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，批號為20150511201；豬瘟抗體檢測試劑盒，購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，批號為20150512202；LSI豬繁殖和呼吸綜合征抗體檢測試劑盒，購自北京天之泰生物科技有限公司，批號為5-TTVETPRA-049；豬鏈球菌抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法），購自深圳市綠詩源生物技術(shù)有限公司，批號為20150501。

1.4試驗(yàn)分組

將從5個養(yǎng)豬場選取的300頭試驗(yàn)豬，分別編號為1～300號，隨機(jī)分為15組，每組20頭，依次為第1組1～20號、第二組2～40號……第15組281～300號。

1.5免疫方法

按照表1所示，進(jìn)行1～4種疫苗注射。單苗和2種疫苗免疫的注射部位為左右頸部；3種疫苗和4種疫苗同時分點(diǎn)免疫的注射部位為頸部左右和臀部左右各注射一針。對藍(lán)耳病相關(guān)組，30 d采血后進(jìn)行二次免疫。注射時嚴(yán)格消毒，規(guī)范操作。免疫劑量：口蹄疫疫苗2 ml/頭、豬瘟活疫苗2 ml/頭、藍(lán)耳病滅活疫苗2 ml/頭、豬鏈球菌苗2 ml/頭。

表1　試驗(yàn)豬疫苗注射分組

1.6臨床不良反應(yīng)觀察

所有試驗(yàn)豬在免疫注射后臨床觀察1～10 d，主要觀察豬的精神和采食狀況、體溫是否正常和是否有其他嚴(yán)重不良反應(yīng)等。

1.7免疫抗體檢測

分別于免疫后15 d、30 d、45 d和60 d，經(jīng)前腔靜脈采血，分離血清，用于抗體檢測。

1.7.1 O型口蹄疫抗體檢測采用正向間接血凝試驗(yàn)，具體操作參照試劑盒說明書進(jìn)行。判定標(biāo)準(zhǔn)：抗體效價≥1∶32，抗體陽性；抗體效價＜1∶32，抗體陰性。1.7.2豬瘟抗體檢測采用正向間接血凝試驗(yàn)，具體操作參照試劑盒說明書進(jìn)行。判定標(biāo)準(zhǔn)：抗體效價≥1∶32，抗體陽性；抗體效價＜1∶32，抗體陰性。

1.7.3豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測采用間接ELISA方法，具體操作參照試劑盒說明書進(jìn)行。判定標(biāo)準(zhǔn)：IRPC值＞20.0為抗體陽性；IRPC值≤20.0為抗體陰性。

1.7.4豬鏈球菌病抗體檢測采用ELISA方法，具體操作參照試劑盒說明書進(jìn)行。判定標(biāo)準(zhǔn)：S/P值≥0.2為抗體陽性；S/P值＜0.2為抗體陰性。

1.8數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

將檢測數(shù)據(jù)按疫苗種類分類統(tǒng)計(jì)，口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征和豬鏈球菌病均以抗體陽性率表示，并應(yīng)用DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)中單因素隨機(jī)分組方法進(jìn)行方差分析［2］。

2　結(jié)果與分析

2.1臨床觀察

除個別豬只在疫苗注射后24 h內(nèi)出現(xiàn)精神沉郁、體溫升高、慢草不食、飲水少量等現(xiàn)象外，未見其他不良反應(yīng)。出現(xiàn)副反應(yīng)癥狀的主要是口蹄疫疫苗注射組，且與試驗(yàn)豬的個體情況相關(guān)，個體弱小、營養(yǎng)狀況及體質(zhì)差的反應(yīng)較重；其他組未見明顯臨床癥狀。兩兩組合組、3種疫苗組合組、4種疫苗組合組與單苗注射組間未見明顯差異，平均副反應(yīng)率在10%以下。有臨床癥狀的豬只在48 h內(nèi)陸續(xù)全部恢復(fù)正常，未出現(xiàn)過敏死亡情況。

2.2不同免疫組口蹄疫抗體產(chǎn)生情況

從圖1可以看出，除第5組和第13組外其他組試驗(yàn)于15 d時抗體水平均達(dá)到最高值，且維持時間較長，第60 d時仍維持高水平穩(wěn)定態(tài)勢，抗體陽性率均在70%以上。與其他組相比，第1組抗體水平較低，下降較快；第5、6、7、11、12組總體較穩(wěn)定；且第1組與第15組之間差異顯著（P＜0.05），除第1組外其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

2.3不同免疫組豬瘟抗體產(chǎn)生情況

從圖2中可以看出，第8組、14組、15組在15 d時抗體達(dá)到最高值，其他各組試驗(yàn)抗體均于30 d時達(dá)到最高值；各組試驗(yàn)抗體合格率于15 d均已達(dá)到了國家規(guī)定70%的免疫要求，且維持時間較長；所有試驗(yàn)組于60 d時抗體水平均有所下降，但仍大于70%。方差分析顯示，第15組與其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

圖1　口蹄疫抗體檢測結(jié)果

圖2　豬瘟抗體檢測結(jié)果

2.4不同免疫組豬繁殖與呼吸綜合征抗體產(chǎn)生情況

從圖3中可以看出，注射豬繁殖與呼吸綜合征疫苗的8個組在免疫后15 d、30 d內(nèi)的抗體陽性率都為0；二免后45 d檢測時，各組抗體陽性率在75%以上，除第10組和第11組外均達(dá)到了峰值，60 d時抗體水平仍保持較高水平穩(wěn)定態(tài)勢。方差分析顯示，第15組與其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

圖3　豬繁殖與呼吸綜合征抗體檢測結(jié)果

2.5不同免疫組豬鏈球菌抗體產(chǎn)生情況

從圖4中可以看出，每組試驗(yàn)動物在15 d時已產(chǎn)生較高水平的抗體，30～45 d抗體達(dá)到最高值，60 d時抗體水平仍維持較高水平，均達(dá)到國家規(guī)定免疫要求70%。方差分析顯示，第15組與其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）。

圖4　豬鏈球菌病抗體檢測結(jié)果

3　討論

豬O型口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬鏈球菌4種疫苗兩兩組合、三三組合、或4種疫苗同時分點(diǎn)注射，平均副反應(yīng)率在10%以下，與單苗注射組相比，臨床癥狀差異不顯著。各種組合組試驗(yàn)動物出現(xiàn)精神沉郁、慢草不食、體溫變化等一般免疫副反應(yīng)的比例最高約為10%，有發(fā)病臨床癥狀的比例為1%，和傳統(tǒng)免疫相比，并未增加免疫副反應(yīng)。出現(xiàn)副反應(yīng)癥狀的豬只與試驗(yàn)動物的個體情況相關(guān)，個體弱小、營養(yǎng)狀況及體質(zhì)差的反應(yīng)較重。出現(xiàn)一般副反應(yīng)的豬只，在48 h內(nèi)很快自行恢復(fù)，未出現(xiàn)死亡等嚴(yán)重副反應(yīng)。

第15組口蹄疫免疫抗體水平高于第1組，維持時間較長且穩(wěn)定，表明口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬鏈球菌病疫苗同時分點(diǎn)免疫組產(chǎn)生的口蹄疫抗體水平要優(yōu)于單苗免疫組［3，4］。豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征、豬鏈球菌病疫苗產(chǎn)生的抗體效價均較高，在抗體產(chǎn)生的整個時期，單苗注射組和4種疫苗同時注射組在抗體達(dá)到最高值時抗體合格率均能達(dá)到或超過國家規(guī)定的免疫標(biāo)準(zhǔn)70%以上，且維持時間也較長。從本次試驗(yàn)結(jié)果看出，一畜2苗、3苗、4苗分點(diǎn)同時注射，對抗體不會產(chǎn)生拮抗作用，反而在一定程度上還有促進(jìn)協(xié)同作用［5，7］。

從本次試驗(yàn)看出，口蹄疫疫苗產(chǎn)生的抗體穩(wěn)定均勻；豬瘟疫苗產(chǎn)生抗體峰值的時間較遲，一般在免疫后4周左右；豬藍(lán)耳病疫苗一次免疫的效果不佳，因此，在以后的防疫工作中，需進(jìn)行2次加強(qiáng)免疫工作。

口蹄疫、豬瘟、豬繁殖與呼吸綜合征和豬鏈球菌苗分點(diǎn)同時免疫對4種抗體的產(chǎn)生沒有顯著影響，沒有增加免疫副反應(yīng)，通過綜合分析，可在實(shí)際工作中推廣應(yīng)用“豬一畜多苗多點(diǎn)同時聯(lián)合注射”免疫操作程序。

本次試驗(yàn)試驗(yàn)規(guī)模較大，抗體監(jiān)測時間較短，對分點(diǎn)免疫注射后抗體消長規(guī)律未能進(jìn)行深入跟蹤檢測，需在以后的工作中繼續(xù)深入研究。

［1］崔尚金.2005年我國豬病流行現(xiàn)狀及特點(diǎn)［J］.豬業(yè)科學(xué)，2006，（1）：34-35.

［2］唐啟義.實(shí)用統(tǒng)計(jì)分析及其DPS數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)［M］.北京：科學(xué)出版社，2002.

［3］楊慧，封林，黎強(qiáng)，等.口蹄疫和豬瘟疫苗同時免疫注射豬的試驗(yàn)效果［J］.四川畜牧獸醫(yī)，2008，35（10）：29-31.

［4］華樹明.豬口蹄疫、豬瘟、高致病性藍(lán)耳病分點(diǎn)免疫注射效果觀察［J］.獸醫(yī)導(dǎo)刊，2008，（4）：23-24.

［5］沈艷麗，蔡金山，趙志剛，等.豬多種疫苗分點(diǎn)同時注射的免疫抗體檢測試驗(yàn)［J］.山東畜牧獸醫(yī)，2011，32（1）：9-10.

［6］馬睿麟，蔡金山，沈艷麗，等.豬瘟、口蹄疫、豬繁殖與呼吸綜合征等多種疫苗免疫試驗(yàn)［J］.畜牧與獸醫(yī)，2010，42（10）：79-82.

［7］張長龍，嚴(yán)寶英，賈文孝，等.豬瘟、豬口蹄疫、高致病性豬藍(lán)耳病疫苗有效免疫試驗(yàn)初探［J］.中國畜牧獸醫(yī)文摘，2009，30（7）：28-29.

［本文獲甘肅省首屆獸醫(yī)系統(tǒng)征文比賽一等獎］

（編輯：趙鵬飛）

S858.28

A

1006-799X（2016）15-0003-03

姚菊霞（1986-），女，甘肅定西人，獸醫(yī)師，主要從事動物疫病防治技術(shù)研究推廣工作。