薛達(dá)冰

（廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 廣西南寧 530021）

石斛多糖對(duì)腫瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗腫瘤作用的影響

薛達(dá)冰

（廣西醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院 廣西南寧 530021）

目的：探討石斛多糖對(duì)腫瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗腫瘤作用的影響。方法：利用石斛多糖和腫瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）共同作用荷瘤小鼠，測(cè)量小鼠的腫瘤重量和觀察小鼠的生存期。結(jié)果：石斛多糖和腫瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）共同作用能明顯抑制小鼠的腫瘤生長和延長小鼠的生存期。結(jié)論：石斛多糖能加強(qiáng)腫瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）的抗腫瘤作用。

細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞 石斛多糖 抗腫瘤

隨著腫瘤生物治療技術(shù)的發(fā)展，科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，在體外誘導(dǎo)出腫瘤特異性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）能產(chǎn)生明顯的抗腫瘤效應(yīng)［1］，現(xiàn)在這種技術(shù)已經(jīng)成為腫瘤生物治療領(lǐng)域的新方法［2］。現(xiàn)在對(duì)于腫瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的抗腫瘤研究主要集中在如何加強(qiáng)其殺傷腫瘤的功能。趙永靈等研究表明，石斛多糖能夠提高T淋巴細(xì)胞活性以及數(shù)量［3］。本文將探討石斛多糖對(duì)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL）抗腫瘤作用的影響，以期能發(fā)現(xiàn)一種提高細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗腫瘤的新藥物。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和細(xì)胞

磷酸緩沖液、RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基、胎牛血清、青霉素、鏈霉素、小鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（mGM-CSF）、小鼠白細(xì)胞介素-4（mIL-4）、石斛多糖、小鼠肝癌細(xì)胞系H22。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

處死小鼠后，取出股骨，沖洗出骨髓中的細(xì)胞，收集細(xì)胞，裂解紅細(xì)胞后，在六孔板中加入10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基和50 ng/ml重組小鼠GM-CSF、5ng/ml重組小鼠IL-4，第八天加入利用液氮反復(fù)凍融法制備的小鼠肝癌細(xì)胞抗原，然后在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)18h，收集細(xì)胞用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

無菌條件下處死小鼠后，取出小鼠的脾臟，制備單個(gè)脾細(xì)胞懸液，采用密度梯度離心法獲得單個(gè)核細(xì)胞。使用無菌的尼龍棉純化T淋巴細(xì)胞。將使用含IL-2的RPMI-1640完全培養(yǎng)基將T淋巴細(xì)胞重懸成2×106個(gè)/ml，于六孔板中進(jìn)行培養(yǎng)，并加入2×105個(gè)/孔的負(fù)載肝癌細(xì)胞抗原的樹突狀細(xì)胞刺激T細(xì)胞增殖分化，37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)6天，收集T淋巴細(xì)胞作為腫瘤特異細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

小鼠皮下接種小鼠肝癌細(xì)胞，待腫瘤長到5 mm直徑時(shí)將小鼠隨機(jī)分為4組，每組10只，分別設(shè)腫瘤特異CTL及灌胃石斛多糖組，另設(shè)注射PBS對(duì)照組，石斛多糖對(duì)照組，腫瘤特異CTL組。治療方法為腫瘤特異CTL每周腹腔注射2×106個(gè)/只，共治療三次，石斛多糖每天灌胃0.3g·kg-1，灌胃兩周。四周后觀察治療效果，用電子天平測(cè)量腫瘤的重量。記錄小鼠生存期。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析，計(jì)量數(shù)據(jù)使用（±s）表示，組與組之間用方差分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 小鼠腫瘤重量及生存期

由表1結(jié)果可知，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞聯(lián)合石斛多糖治療組小鼠的腫瘤重量明顯比空白對(duì)照組、單用石斛多糖組、單用細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞組輕，并且細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞聯(lián)合石斛多糖治療組小鼠的生存期明顯比空白對(duì)照組、單用石斛多糖組、單用細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞組要長。

表1 不同的治療方案的荷瘤小鼠的腫瘤重量及生存期（±s）

表1 不同的治療方案的荷瘤小鼠的腫瘤重量及生存期（±s）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05；與石斛多糖組比較，▲P＜0.05；與CTL組比較，△P＜0.05

組別 　n 　　重量 （g） 　　生存期（d a y s）對(duì)照組 　1 0 　4 . 6 6 ± 0 . 1 1 　8 5 . 8 0 ± 1 . 1 7石斛多糖組 　1 0 　4 . 3 1 ± 0 . 1 0 * 　9 1 . 3 0 ± 1 . 0 7 * C T L組 　1 0 　3 . 9 1 ± 0 . 1 2 *▲ 　9 6 . 2 0 ± 0 . 8 4 *▲石斛多糖和C T L組 　1 0 　3 . 5 0 ± 0 . 0 8 *▲△ 　1 0 2 . 8 0 ± 1 . 4 9 *▲△

3 討論

腫瘤細(xì)胞能夠在體內(nèi)不斷的惡性增殖，主要的原因在于它能夠逃避免疫系統(tǒng)的識(shí)別，使得體內(nèi)不能產(chǎn)生特異殺傷腫瘤的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞。在體外利用腫瘤抗原沖擊樹突狀細(xì)胞，能夠誘導(dǎo)出腫瘤特異性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞。體外獲得的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞回輸?shù)襟w內(nèi)后，能夠提高體內(nèi)的抗腫瘤免疫反應(yīng)。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)石斛多糖具有抑制腫瘤的細(xì)胞生長［4］以及提高機(jī)體免疫力［5］的作用。本文利用石斛多糖與腫瘤特異性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞共同作用于荷瘤小鼠，發(fā)現(xiàn)荷瘤小鼠的腫瘤重量比其它對(duì)照組明顯輕，小鼠的生存時(shí)間比其它對(duì)照組明顯長。以上結(jié)果說明利用石斛多糖可以提高腫瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞抗腫瘤的效果，這也為臨床使用腫瘤特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞為基礎(chǔ)的腫瘤免疫治療提供一個(gè)新的方向。

［1］Steinman R M， Banchereau J. Taking dendritic cells into medicine ［J］.Nature 2007， 449（7161），419-426.

［2］Banchereau J， Palucka AK. Dendritic cells as therapeutic vaccines against cancer［J］.Nat Rev Immunol 2005，5（4），296-306.

［3］Zhao YL ，Wang SL ，Li XY .Studies on the polysaccharides of Dendrobium aphyllum［J］.ActaBotYunnan 1994，16，392-396.

［4］馬國祥，徐國鈞.鼓槌石斛及其化學(xué)成分的抗腫瘤活性作用［J］.中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，1994，25（3），188-189.

［5］宋寧，陸瑛，邱明華.球花石斛多糖免疫調(diào)節(jié)作用的研究［J］.天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2006，18，445-448.

R73

A

1674-2060（2016）02-0192-01

薛達(dá)冰（1989-），男，廣西北海人，在讀碩士，研究方向：腫瘤生物治療。