魯世絨

（廣西醫(yī)科大學(xué) 廣西南寧 530000）

車前子多糖對人外周血來源的樹突狀細(xì)胞免疫活性的影響

魯世絨

（廣西醫(yī)科大學(xué) 廣西南寧 530000）

目的：探討車前子多糖對樹突狀細(xì)胞免疫活性的影響。方法：從健康人外周血獲得單個核細(xì)胞，貼壁后的單核細(xì)胞加入GM-CSF、IL-4誘導(dǎo)為成熟的樹突狀細(xì)胞，在誘導(dǎo)過程中加入不同濃度車前多糖（PSP）作比較，用倒置顯微鏡及流式檢測其細(xì)胞形態(tài)、表型變化。結(jié)果：各組經(jīng)不同濃度PSP作用后，細(xì)胞表面CD80、CD86表達(dá)升高，在PSP作用濃度為40ug/ml時，表面分子表達(dá)量明顯高于其他對照組。結(jié)論：在體外培養(yǎng)時，車前子多糖能促進(jìn)樹突狀細(xì)胞的成熟。

車前子多糖 樹突狀細(xì)胞 免疫活性

前言

DC是生物體內(nèi)功能最強(qiáng)的一種抗原提呈細(xì)胞，在機(jī)體免疫調(diào)控中發(fā)揮重要作用［1］。有關(guān)DC的免疫治療已有大量報道，各種免疫療法對腫瘤患者產(chǎn)生一定影響。研究表明許多中藥有效成分具有一定的免疫調(diào)節(jié)活性，本文探究了車前子多糖在體外促進(jìn)DC成熟，為研究車前子多糖免疫調(diào)節(jié)機(jī)制提供了理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與藥物

淋巴細(xì)胞分離液購自北京索萊寶公司，rhGM-CSF 、rhIL-4， 購自德國R&D 公司，F(xiàn)ITC標(biāo)記的鼠抗人CD80單抗、PE標(biāo)記的CD86單抗購自BD-PharMingen，藥材取自江西。

1.2 主要方法

1.2.1 外周血單核細(xì)胞分離

采取健康人外周血200ml，用同等比例PBS稀釋后加入淋巴細(xì)胞分離液，1500rpm，20min離心，分為四層：血清、白膜層、淋巴分離液、紅細(xì)胞［2］。取白膜層單個核細(xì)胞于離心管中，用PBS洗兩次，用無血清的RPM1640重懸細(xì)胞，貼壁1h，取貼壁的細(xì)胞即單核細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。

1.2.2 DC的體外誘導(dǎo)分化及培養(yǎng)

將單核細(xì)胞分為兩組，車前子多糖組和對照組，加入完全1640，同時加入GM-CSF 1000 u/ml 、IL-4 450u/ml ，鋪于六孔板中，PSP組分為五個作用濃度（10ug/ml、20ug/ml、40ug/ml、60ug/ ml）。

2 DC的鑒定

2.1 DC形態(tài)的觀察

用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)。

2.2 DC表型的鑒定

采用流式細(xì)胞儀，在D C培養(yǎng)的第1 0天，收集細(xì)胞分別加入CD80，CD86單抗染色，室溫避光作用15min。加PBS洗兩次后用500ulPBS重懸細(xì)胞檢測。

3 結(jié)果

c o n t r o l 　C D 8 0 　C D 8 6 c o n t r o l 　1 8 　7 2 . 1 　6 0 . 3 P S P 1 0 u g / m l 　1 0 　8 1 . 6 　7 8 . 9 P S P 2 0 u g / m l 　1 5 　8 5 . 3 　8 2 . 1 P S P 4 0 u g / m l 　1 7 　8 9 . 0 　8 6 . 2 P S P 6 0 u g / m l 　0 6 　5 1 . 3 　6 2 . 7

3.1 DC形態(tài)的改變

d1天細(xì)胞體積較小，d2天細(xì)胞開始聚集，部分懸浮。d3天細(xì)胞體積變大，形狀變?yōu)闃渫粻罨蚍派錉畹?。d4天大量細(xì)胞懸浮且呈突刺狀。d7天可見大量突刺狀細(xì)胞，為典型的DC形態(tài)。

3.2 DC的免疫表型分析

各組細(xì)胞共培養(yǎng)7d，流式檢測其表型，結(jié)果見下表。

組間表達(dá)：各組DC分子表面CD80、CD86均有表達(dá)，車前子多糖作用組均高于對照組。但當(dāng)PSP濃度高于40ug/ml時，CD80、CD86的表達(dá)呈下降趨勢。

組內(nèi)表達(dá)：當(dāng)PSP濃度≤40ug/ml時，隨著PSP的增加，DC表面分子表達(dá)增加。當(dāng)60ug/ml濃度時，表面分子表達(dá)降低。

各濃度PSP組及對照組流式檢測結(jié)果%

4 討論

車前子是我國傳統(tǒng)中藥之一， PSP由木糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、半乳糖醛酸等組成，具有一定的防癌抗癌和調(diào)節(jié)免疫功能的作用［3］。

DC作為抗原提呈免疫細(xì)胞，在抗腫瘤免疫中起重要作用［4］。成熟DC吞噬功能較弱，而共刺激分子和MHC-Ⅱ分子表達(dá)增加，從而獲得提呈抗原和活化T細(xì)胞的功能，啟動特異性免疫應(yīng)答［5］。

實(shí)驗(yàn)證明，DC經(jīng)PSP刺激后，CD80、CD86的表達(dá)均增強(qiáng)，。研究發(fā)現(xiàn)PSP對免疫活性細(xì)胞無直接作用，DC表面存在多糖受體， PSP可與DC 表面存在的多糖受體結(jié)合，從而啟動和活化DC使其分泌細(xì)胞活性因子，活化的DC及活性因子增強(qiáng)T細(xì)胞等免疫活性細(xì)胞的功能。

本研究通過上述幾種實(shí)驗(yàn)證明車前子多糖能進(jìn)樹突狀細(xì)胞成熟。但其具體的分子生物學(xué)機(jī)制尚需進(jìn)一步的研究。

［1］許峰，王彬，葉穎江，等.異源DC融合瘤苗在抗人結(jié)腸轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞免疫中的作用［J］.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2006，23（12）：1497-1498.

［2］李幼平. 樹突狀細(xì)胞與移植免疫耐受研究進(jìn)展.生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志，1997；14（4）∶383

［3］魏吳普.神農(nóng)本草經(jīng)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，1963：18.

［4］Shimauchi， T. and V. Piguet， DC-T cell virological synapses and the skin： novel perspectives in dermatology. Exp Dermatol，2015.24（1）：p.1-4.

［5］陳蘊(yùn)穎，步宏.樹突狀細(xì)胞的表面標(biāo)志及其免疫學(xué)意義. 生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志，1998；15（4）∶409.

Q2

A

1674-2060（2016）02-0168-01