郝興亮

(山東東營(yíng)勝利油田中心醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，山東　東營(yíng)　257034)

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水通道蛋白4、5、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及意義

郝興亮

(山東東營(yíng)勝利油田中心醫(yī)院 呼吸內(nèi)科，山東東營(yíng)257034)

目的探討水通道蛋白(AQP)4、AQP5、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中的表達(dá)變化及臨床意義。方法選取2013年1月至2015年6月該院收治的NSCLC患者80例，用免疫組化法檢測(cè)其活檢的肺組織，探究并分析AQP4、AQP5、VEGF與NSCLC病理類型之間的關(guān)系。結(jié)果各T分期和臨床分期的患者AQP4、5表達(dá)無(wú)明顯差異(P>0.05)，各N分期患者AQP4、5的表達(dá)陽(yáng)性率差異顯著(P<0.05)。復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者的AQP4、5表達(dá)陽(yáng)性率與未復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者相比差異明顯(P<0.05)。各T分期患者VEGF表達(dá)無(wú)明顯差異(P>0.05)，各N分期、臨床分期患者VEGF的表達(dá)陽(yáng)性率差異明顯(P<0.05)，復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者的VEGF表達(dá)陽(yáng)性率與未復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者比較差異明顯(P<0.05)。結(jié)論NSCLC患者存在AQP4、AQP5、VEGF水平異常，而其表達(dá)可能與NSCLC病理類型和侵襲性有關(guān)。

非小細(xì)胞肺癌；水通道蛋白；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

非小細(xì)胞癌(NSCLC)主要以手術(shù)切除為主，對(duì)于遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者，可以在放化療后進(jìn)行手術(shù)治療。水通道蛋白(AQP)是位于細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)，主要負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外水平衡。有研究〔1〕表明，AQP在腫瘤的轉(zhuǎn)移以及擴(kuò)散等侵襲過程中表達(dá)增強(qiáng)，可能與腫瘤的侵襲能力有關(guān)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)具有較強(qiáng)的誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)的作用，而腫瘤的生長(zhǎng)需要豐富的血運(yùn)來提供足夠的營(yíng)養(yǎng)，因此腫瘤患者往往伴隨著VEGF水平的升高。目前關(guān)于AQP1與腫瘤的相關(guān)性研究較多，而國(guó)內(nèi)尚缺少關(guān)于AQP4、5及VEGF與NSCLC的相關(guān)性的研究，本文旨在探究AQP4、5及VEGF與NSCLC的關(guān)系。

1　資料與方法

1.1一般資料選取2013年1月至2015年6月我院收治的NSCLC患者80例為觀察組，男50例，女30例，年齡46～84〔平均(58.6±5.6)〕歲，病程1～3年，平均(1.6±0.3)年，腺癌40例、鱗癌30例、腺鱗癌3例、大細(xì)胞癌7例。所有患者均于我院確診為NSCLC，且經(jīng)過術(shù)后病理確診。所有標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片，蘇木素-伊紅(HE)染色后經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)。所有病例均無(wú)術(shù)前化療、放療治療史。T分期：T1、T2、T3、T4分別為24、36、8、12例；N分期：N0、N1、N2分期分別為28、32、20例；臨床分期(UICC1997年)：Ⅰ期22例、Ⅱ期30例、Ⅲ期26例、Ⅳ期2例，復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移50例。以上患者性別、年齡、病程均無(wú)明顯差異(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法用免疫組化法檢測(cè)其活檢的肺組織，探究并分析AQP4、AQP5、VEGF與NSCLC病理類型之間的關(guān)系。檢測(cè)方法：AQP4、5以及VEGF的表達(dá)采用免疫組織化學(xué)鏈霉辛合素-生物素復(fù)合物(SABC)法，兔抗人AQP4、AQP5、VEGF多克隆抗體、即用型SABC免疫組織化學(xué)染色試劑盒、抗原修復(fù)液和二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色試劑盒均購(gòu)自上海嵐派生物技術(shù)有限公司，所有操作均由檢驗(yàn)科人員嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。以磷酸緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照，以已知AQP4、AQP5強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)的正常腎組織和VEGF強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)的人胎盤組織標(biāo)本分別作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)腫瘤細(xì)胞內(nèi)有棕黃色顆粒為陽(yáng)性〔2〕。高倍鏡下(×400)每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)視野，計(jì)數(shù)1 000個(gè)細(xì)胞。AQP4、AQP5陽(yáng)性結(jié)果判斷：陽(yáng)性細(xì)胞<5%為表達(dá)陰性(包括無(wú)染色或僅血管內(nèi)皮著色)，陽(yáng)性細(xì)胞≥5%為表達(dá)陽(yáng)性。VEGF陽(yáng)性結(jié)果判斷：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為陰性，5%～25%為弱陽(yáng)性(+)，26%～50%為中等陽(yáng)性()，>50%為強(qiáng)陽(yáng)性()。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法應(yīng)用SPSS21.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)。

2　結(jié)　果

各T分期和臨床分期患者AQP4、5表達(dá)無(wú)明顯差異(P>0.05)，各N分期差異明顯(P<0.05)。復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者的AQP4、5表達(dá)陽(yáng)性率與未復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者比較差異明顯(P<0.05)。見表1。各T分期患者VEGF表達(dá)無(wú)明顯差異(P>0.05)，各N分期、臨床分期患者VEGF的表達(dá)陽(yáng)性率差異明顯(P<0.05)。復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者的VEGF表達(dá)陽(yáng)性率與未復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移患者比較差異明顯(P<0.05)。見表1。

表1　AQP4、5、VEGF的表達(dá)與NSCLC病理結(jié)果相關(guān)性〔n(%)〕

3　討　論

肺癌是最常見的肺原發(fā)性惡性腫瘤，多數(shù)肺癌起源于支氣管黏膜上皮，亦稱支氣管肺癌〔3〕。近年來，隨著空氣質(zhì)量的下降以及吸煙人數(shù)的上升，肺癌發(fā)病率明顯上升，目前發(fā)病率已經(jīng)居男性腫瘤之首。NSCLC是肺癌的主要類型，與小細(xì)胞肺癌不同，NSCLC對(duì)放化療效果并不理想，主要以手術(shù)治療為主，同時(shí)由于其臨床分型較多，治療方案也較小細(xì)胞肺癌多〔4〕。AQP是存在于細(xì)胞膜上特殊跨膜蛋白質(zhì)，主要負(fù)責(zé)水分子的快速轉(zhuǎn)運(yùn)，從而維持細(xì)胞內(nèi)外水分平衡。最初人們確定AQP的功能是在研究其調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)外的滲透作用時(shí)發(fā)現(xiàn)的。繼AQP1被發(fā)現(xiàn)并證明與腫瘤的侵襲有關(guān)之后，AQP的研究便逐漸成為熱門〔5〕。由于腫瘤生長(zhǎng)的需要，細(xì)胞對(duì)于物質(zhì)的需求量大大增加，包括腫瘤細(xì)胞的增殖、分裂、侵襲、轉(zhuǎn)移過程中對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求，其中水分是最重要的物質(zhì)之一，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸也離不開水分的轉(zhuǎn)運(yùn)。研究〔6〕表明，癌細(xì)胞對(duì)于水分的需求是正常細(xì)胞的2倍以上，可見水分運(yùn)輸對(duì)于癌細(xì)胞發(fā)生發(fā)展的重要性。目前認(rèn)為AQP家族與腫瘤的侵襲能力有關(guān)。

AQP4和AQP5屬于AQP家族，具有和AQP1相似的功能。林琳等〔7〕采用免疫組化法對(duì)大腸癌患者癌組織和周圍正常組織進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)AQP4、5在癌組織的表達(dá)明顯高于正常組織，而采用干預(yù)腫瘤組織上的AQP表達(dá)的方法則會(huì)引起腫瘤組織的凋亡，說明AQP與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有一定的聯(lián)系。文中結(jié)果提示AQP4、AQP5與NSCLC的T分期(即腫瘤大小)和臨床分期無(wú)明顯相關(guān)性，而與N分期(腫瘤的淋巴轉(zhuǎn)移)和復(fù)發(fā)或者轉(zhuǎn)移情況明顯相關(guān)，可能與表達(dá)增強(qiáng)的AQP有助于增加腫瘤的侵襲性有關(guān)，與Yu等〔8〕研究結(jié)果一致。VEGF是目前已知最強(qiáng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞刺激因子，它能夠刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增生，從而形成新的毛細(xì)血管。臨床數(shù)據(jù)表明，VEGF在正常人體內(nèi)的表達(dá)水平并不強(qiáng)，而在腫瘤組織等增殖迅速的組織表達(dá)顯著增強(qiáng)。在VEGF的刺激下，腫瘤組織獲得豐富的血供，這在一定程度上增加了腫瘤的侵襲能力。因此，部分藥物通過降低VEGF的表達(dá)來降低腫瘤的生長(zhǎng)速度，并取得了一定的成果。但目前關(guān)于VEGF與NSCLC的研究尚少。本研究提示VEGF與腫瘤T分期(腫瘤大小)無(wú)明顯相關(guān)性，而與腫瘤N分期(淋巴轉(zhuǎn)移)、臨床分期和復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移情況明顯相關(guān)，可能與血管內(nèi)皮因子刺激下腫瘤組織新生血管的迅速生長(zhǎng)有關(guān)，與Tang等〔9〕研究結(jié)果一致?？傊甆SCLC患者存在AQP4、AQP5、VEGF水平異常，而其表達(dá)可能與NSCLC病理類型和侵襲性有關(guān)。

1邱智泉.AQP、CCL20及NDRG2在原發(fā)性肝細(xì)胞癌伴膽管癌栓中的表達(dá)意義及功能研究〔D〕.上海：第二軍醫(yī)大學(xué),2012.

2Deacon K,Onion D,Kumari R,etal.Elevated SP-1 transcription factor expression and activity drives basal and hypoxia-induced vascular endothelial growth factor(VEGF)expression in non-small cell lung cancer〔J〕.J Biol Chem,2012;287(47):39967-81.

3劉魁,彭文鴻.水通道蛋白-5與肺疾病相關(guān)研究進(jìn)展〔J〕.臨床肺科雜志,2012;17(11):2064-6.

4金晶星.七氟烷對(duì)單肺通氣肺損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究〔D〕.合肥：安徽醫(yī)科大學(xué),2012.

5Song N,Liu B,Wu J,etal.Vascular endothelial growth factor(VEGF)-2578C/A and-460C/T gene polymorphisms and lung cancer risk:a meta-analysis involving 11 case-control studies〔J〕.Tumour Biol,2014;35(1):859-70.

6馬俊美,白曉敏,張素玲，等.肺癌患者血清中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué),2015;23(14):1980-2.

7林琳,哈敏文.VEGF、PTN在肺癌患者外周血及胸腔積液中表達(dá)及其意義〔J〕.科技通報(bào),2012;28(2):27-8.

8Yu S,Sun J,Zhang J,etal.Aberrant expression and association of VEGF and Dll4/notch pathway molecules under hypoxia in patients with lung cancer〔J〕.Histol Histopathol,2013;28(2):277-84.

9Tang XP,Li J,Yu LC,etal.Clinical significance of survivin and VEGF mRNA detection in the cell fraction of the peripheral blood in non-small cell lung cancer patients before and after surgery〔J〕.Lung Cancer,2013;81(2):273-9.

〔2015-12-11修回〕

(編輯袁左鳴/滕欣航)

郝興亮(1980-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事肺部腫瘤研究。

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A

1005-9202(2016)15-3729-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.15.055