李兆欣，　劉江月，　王其新△

(1青島大學附屬醫(yī)院, 山東 青島 266000； 2濰坊醫(yī)學院病理生理教研室， 山東 濰坊 261053)

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Aliskiren抑制LPS誘導HUVECs新生血管的形成及可能機制*

李兆欣1，劉江月2，王其新1△

(1青島大學附屬醫(yī)院, 山東 青島 266000；2濰坊醫(yī)學院病理生理教研室， 山東 濰坊 261053)

目的： 研究阿利吉侖(aliskiren)對脂多糖(LPS)誘導人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)新生血管形成能力的影響及可能的機制。方法: 常規(guī)培養(yǎng)的HUVECs隨機分為空白組和腎素組，ELISA法測定炎性細胞因子腫瘤壞死因子-α(TNF-α)和細胞間黏附分子-1(ICAM-1)水平， Western blot法檢測Toll樣受體4(TLR4)和ICAM-1的蛋白水平。將常規(guī)培養(yǎng)的HUVECs隨機分為空白對照組、LPS模型組以及aliskiren低劑量(1 μmol/L)、中劑量(10 μmol/L)和高劑量(100 μmol/L)組。MTT法和BrdU法檢測HUVECs的增殖能力，Transwell法測定HUVECs的遷移率，以HUVECs在Matrigel膠上形成管腔結構情況來判斷其血管形成能力。ELISA測定炎性細胞因子TNF-α、ICAM-1和單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)的水平，RT-PCR和Western blot 法檢測腎素、TLR4、基質金屬蛋白酶-2(MMP-2)和基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)的mRNA和蛋白水平。結果: 腎素能夠刺激HUVECs炎癥因子的分泌及TLR4的表達；aliskiren呈濃度依賴性抑制HUVECs增殖、遷移及新生血管形成，降低MCP-1、TNF-α、IL-6水平及腎素、MMP-2、MMP-9的表達，抑制TLR4表達(P<0.05)。結論: Aliskiren能夠有效抑制LPS誘導HUVECs新生血管形成能力，可能與其下調腎素表達抑制TLR4途徑介導的炎癥反應及MMP-2、MMP-9生成有關。

阿利吉倫； 新生血管形成； 炎癥反應； Toll樣受體 4； 腎素

動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是心腦血管疾病的病理生理基礎，斑塊不穩(wěn)定與急性心腦血管事件發(fā)生密切相關。近年研究證明，斑塊內血管新生是衡量斑塊穩(wěn)定性的一項新指標[1]。新生血管可促進炎癥細胞聚集，誘發(fā)斑塊出血和破裂，因此，減少斑塊內血管新生、穩(wěn)定斑塊成為防治冠狀動脈粥樣硬化的治療靶點。研究發(fā)現(xiàn)腎素基因高表達能夠使血管炎癥因子、黏附分子的基因和蛋白表達增加，加重內皮細胞損傷，使AS斑塊不穩(wěn)定性增加[2-3]。Toll樣受體4(Toll-like receptor 4，TLR4)介導的細胞因子和趨化因子產生增加能刺激細胞的遷移和細胞增殖[4]。TLR4激動還能導致基質金屬蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMP)-2、-9和組織蛋白酶表達增加，這些蛋白酶參與細胞外基質的降解[5]。MMP-2 通過重塑細胞外基質和降解基底膜使內皮細胞從原有血管遷移到外周形成新生血管，最終導致動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展[6]。Celletti等[7]發(fā)現(xiàn)，在AS 斑塊內MMP-9 的水平與血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的表達呈正相關，提示MMP-9 的水平可能影響斑塊內血管生成。阿利吉侖(aliskiren)是近年新發(fā)現(xiàn)的腎素抑制劑，具有抗氧化應激和炎癥[8]的作用。炎癥激活的內皮細胞發(fā)生增殖和遷移，能夠促進斑塊內血管和血管網的形成。本研究以人臍靜脈內皮細胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)為對象，觀察aliskiren是否通過下調腎素表達抑制TLR4途徑介導的炎癥反應及MMP的生成，抑制動脈粥樣硬化斑塊內新生血管的形成，增強斑塊的穩(wěn)定性，延緩AS的發(fā)生發(fā)展。

材　料　和　方　法

1材料

1.1細胞株HUVECs購于Thermo Fisher Scienti-fic。

1.2藥物與主要試劑Aliskiren(瑞士諾華制藥有限公司)；人重組腎素(Cayman)；細菌脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)和胰蛋白酶(Sigma)；DMEM 低糖培養(yǎng)基(Gibco)；胎牛血清(HyClone)；Western blot相關試劑以及檢測TLR4、MMP-2和MMP-9的RT-PCR試劑盒(碧云天生物技術研究所)；腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、單核細胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1，MCP-1)和細胞間黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)ELISA試劑盒，腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9抗體(武漢博士德生物工程有限公司)。

1.3主要儀器752型紫外分光光度計(上海精密儀器有限公司)；DYCZ-25D型電泳儀(北京市六一儀器廠)；Bio-Rad 型濕轉儀(Bio-Rad)。

2方法

2.1ELISA測定腎素對HUVECs分泌TNF-α和ICAM-1的影響將生長良好的HUVECs接種于6孔板，分為空白組、腎素組，腎素組加入10-9mol/L 腎素孵育20 min后，收集上清，采用ELISA試劑盒分別檢測TNF-α和ICAM-1的水平。

2.2Western blot 法檢測腎素對HUVECs TLR4和ICAM-1蛋白表達的影響細胞處理同ELISA實驗，收集細胞后加入細胞裂解液提取蛋白，SDS-PAGE分離蛋白后轉膜，5%脫脂奶粉封閉1 h，加入 I 抗(1∶500)后4 ℃過夜，TBST漂洗后加入 II 抗孵育1 h，化學發(fā)光反應，顯影定影，圖像分析。

2.3MTT法檢測Aliskiren對LPS誘導HUVECs活力的影響取對數生長期的HUVECs處理后接種于96孔板，分為空白對照(control)組、LPS(10 mg/L)組以及aliskiren低劑量(low-dose,LD)、中劑量(middle-dose,MD)和高劑量組(high-dose,HD)。LD、MD和HD組分別加入1、10和100 μmol/L aliskiren孵育24 h后，除control組外，其余各組加入終濃度10 mg/L的LPS繼續(xù)培養(yǎng)24 h。換新的培養(yǎng)基，加入MTT(0.5%)，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，加入150 μL DMSO，用酶標儀490 nm測定吸光度(A)值。

2.4BrdU法檢測aliskiren對LPS誘導HUVECs增殖的影響取對數生長期的HUVECs處理后接種于96孔板，低、中和高劑量組分別加入1、10和100 μmol/L aliskiren孵育24 h后，除control組外，其余各組加入終濃度10 mg/L的LPS繼續(xù)培養(yǎng)24 h。換新的培養(yǎng)基，每孔加入BrdU 10 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，去除BrdU加入FixDenat 200 μL固定細胞30 min。去除FixDenat，每孔加入BrdU-Pod抗體100 μL，常溫孵育90 min，洗板3次后每孔加入100 μL底物顯色液，孵育20 min后觀察顏色變化，用酶標儀490 nm測定吸光度(A)值。

2.5Transwell法測定aliskiren對LPS誘導HUVECs的遷移率將生長良好的HUVECs調整密度為2×109/L。取100 μL 細胞懸液加入Transwell小室上室中，同時低、中和高劑量組分別加入1、10和100 μmol/L aliskiren。下室除control組外，其余各組加入LPS作為刺激劑。培養(yǎng)6 h后，拿出小室，4%多聚甲醛固定10 min，結晶紫染色30 min，PBS 漂洗3次，去除濾膜上層細胞后，鏡下觀察細胞遷移情況并拍照。

2.6HUVECs管腔形成實驗在24孔板中加入預冷融化的Matrigel膠，37 ℃凝固 1 h，預處理的HUVECs(處理方法同前)以每孔1×104的密度鋪于Matrigel膠上，37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)12 h，光鏡下觀察拍照。

2.7ELISA測定aliskiren對LPS誘導HUVECs的TNF-α、ICAM-1和MCP-1水平將生長良好的HUVECs接種于6孔板，低、中和高劑量組分別加入1、10和100 μmol/L aliskiren孵育24 h后，除control組外，其余各組加入終濃度10 mg/L的LPS繼續(xù)培養(yǎng)24 h，收集上清，采用ELISA試劑盒分別檢測TNF-α、ICAM-1、MCP-1水平。

2.8RT-PCR法檢測aliskiren對LPS誘導HUVECs腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9的mRNA表達細胞處理同ELISA實驗，收集細胞，提取總RNA后合成cDNA，GAPDH為內參照，進行PCR擴增，引物序列見表1。PCR反應條件為：94 ℃ 30 s, 55 ℃ 45 s，72 ℃ 1 min,共30個循環(huán)。

表1　引物序列

2.9Western blot 法檢測aliskiren對LPS誘導HUVECs腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9蛋白的表達細胞處理同ELISA實驗，收集細胞后加入細胞裂解液提取蛋白，SDS-PAGE分離蛋白后轉膜，5%脫脂奶粉封閉1 h，加入 I 抗(1∶500)后4 ℃過夜，TBST漂洗后加入 II 抗孵育1 h，化學發(fā)光反應，顯影、定影，圖像分析。

3統(tǒng)計學處理

實驗數據以均數±標準差(mean±SD)表示，應用SPSS 18.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計學分析。組間比較采用t檢驗或單因素方差分析，兩兩比較采用SNK-q檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結　　果

1腎素對HUVECs分泌TNF-α和ICAM-1的影響

與空白組比較，腎素組的TNF-α和ICAM-1水平明顯升高(P<0.05)，說明腎素可以刺激HUVECs分泌炎癥因子，見圖1。

Figure 1.The effect of renin on the secretion of TNF-α and ICAM-1 in HUVECs.Mean±SD.n=10.*P<0.05vsblank group.

圖1腎素對HUVECs分泌TNF-α和ICAM-1的影響

2腎素對HUVECs TLR4和ICAM-1蛋白表達的影響

與空白組比較，腎素組TLR4和ICAM-1蛋白表達均顯著升高(P<0.05)，說明腎素可以激活TLR4炎癥通路，促進HUVECs炎癥因子的表達，見圖2。

Figure 2.The effect of renin on the expression of TLR4 and ICAM-1 proteins in HUVECs. Mean±SD.n=10.*P<0.05vsblank group.

圖2腎素對HUVECs分泌TLR4、ICAM-1蛋白表達的影響

3Aliskiren對LPS誘導HUVECs增殖的影響

MTT和BrdU結果顯示，與空白對照組比較，LPS模型組細胞的增殖明顯增強(P<0.05)；與LPS模型組比較，aliskiren低、中、高劑量各組細胞的增殖明顯受抑制(P<0.05)；與aliskiren中劑量組比較，低劑量組的細胞增殖抑制作用明顯減弱(P<0.05)，高劑量組的細胞增殖抑制作用明顯增強(P<0.05)，說明aliskiren對LPS誘導HUVECs增殖呈明顯劑量依賴性抑制作用，見圖3、4。

Figure 3.The effect of aliskiren on the viability of LPS-induced HUVECs. Mean±SD.n=10.*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsLPS group;△P<0.05vsMD group.

圖3Aliskiren對LPS誘導HUVECs活力的影響

4Aliskiren對LPS誘導HUVECs遷移的影響

與空白對照組比較，LPS模型組HUVECs的遷移能力明顯增強，細胞遷移數量明顯增多，而aliskiren低、中、高劑量組加入不同濃度aliskiren干預后細胞

Figure 4.The effect of aliskiren on the proliferation of LPS-induced HUVECs. Mean±SD.n=10.*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsLPS group;△P<0.05vsMD group.

圖4Aliskiren對LPS誘導HUVECs增殖的影響

遷移的數量明顯減少(P<0.05)；且與aliskiren中劑量組比較，低劑量組細胞遷移的數量明顯增多(P<0.05)，高劑量組細胞遷移的數量明顯減少(P<0.05)，表明 LPS 對 HUVECs 有很強的誘導遷移作用，而aliskiren呈濃度依賴性抑制了其誘導遷移的能力，見圖5。

5Aliskiren對LPS誘導HUVECs管腔形成的影響

空白對照組HUVECs多形成條索狀或不連續(xù)小管樣結構，完整小管形成數量少；與空白對照組比較，LPS模型組小管形成數量明顯增加；與LPS模型組比較，不同濃度的aliskiren干預對HUVECs小管形成有明顯濃度依賴性抑制作用(P<0.05),見圖6。

Figure 5.The effect of aliskiren on the migration of LPS-induced HUVECs. Mean±SD.n=10.*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsLPS group;△P<0.05vsMD group.

圖5Aliskiren對LPS誘導HUVECs遷移的影響

6Aliskiren對LPS誘導HUVECs分泌TNF-α、ICAM-1和MCP-1的影響

與空白對照組比較，LPS模型組的TNF-α、ICAM-1和MCP-1水平明顯升高(P<0.05)；與LPS模型組比較，aliskiren低、中、高劑量各組的TNF-α、ICAM-1和MCP-1水平均明顯減少(P<0.05)；與

Figure 6.The effect of aliskiren on the capillary-like tube formation of LPS-induced HUVECs. Mean±SD.n=10.*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsLPS group;△P<0.05vsMD group.

圖6Aliskiren對LPS誘導HUVECs管腔形成的影響

aliskiren中劑量組比較，低劑量組的TNF-α、ICAM-1和MCP-1水平明顯升高(P<0.05)，而高劑量組的TNF-α、ICAM-1和MCP-1水平明顯降低(P<0.05)，說明aliskiren呈明顯濃度依賴性抑制LPS誘導HUVECs的TNF-α、ICAM-1和MCP-1分泌，見圖7。

Figure 7.The effect of aliskiren on the secretion of TNF-α, ICAM-1 and MCP-1 in LPS-induced HUVECs. Mean±SD.n=10.*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsLPS group;△P<0.05vsMD group.

圖7Aliskiren對LPS誘導HUVECs分泌TNF-α、ICAM-1和MCP-1的影響

7Aliskiren對LPS誘導HUVECs腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9 mRNA表達的影響

與空白對照組比較，LPS模型組腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9的mRNA表達均顯著升高；與LPS模型組比較，aliskiren低、中和高劑量各組腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9的mRNA表達均明顯減少(P<0.05)；與aliskiren中劑量組比較，低劑量組腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9的mRNA表達明顯升高(P<0.05)，而高劑量組腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9的mRNA表達明顯降低(P<0.05)，說明aliskiren呈明顯濃度依賴性抑制LPS誘導HUVECs腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9的mRNA表達，見圖8。

8Aliskiren對LPS誘導HUVECs腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9蛋白表達的影響

與空白對照組比較，LPS模型組腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9的蛋白表達均顯著升高；與LPS模型組比較，aliskiren低、中和高劑量各組腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9的蛋白表達均明顯減少(P<0.05)；與aliskiren中劑量組比較，低劑量組腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9的蛋白表達明顯升高(P<0.05)，而高劑量組腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9的蛋白表達明顯降低(P<0.05)，說明aliskiren呈明顯濃度依賴性抑制LPS誘導HUVECs腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9的蛋白表達，見圖9。

討　　論

AS是一種嚴重威脅人類健康的常見病、多發(fā)病。研究認為AS是由多種致病因素引起的以內皮細胞損傷為基礎、以血管的慢性炎癥為特征的病理過程。腎素-血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system，RAS)由一系列酶、肽類、激素及其受體所組成，在AS發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。腎素是腎素原在激活酶催化作用下生成的一種蛋白酶，是血管緊張素(angiotensin，Ang)II上游的RAS成員。研究發(fā)現(xiàn)腎素基因高表達能夠促進動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。腎素高表達，通過激活RAS使Ang I和Ang II生成增多，而Ang原生成減少，進而使血管炎癥因子、黏附分子的基因和蛋白表達增加；增多的Ang II進一步加重內皮細胞損傷、平滑肌細胞增殖等的炎癥反應。本研究發(fā)現(xiàn)腎素能夠通過TLR4途徑促進HUVECs炎癥因子的分泌與表達，LPS誘導的HUVECs腎素表達明顯增高，TLR4及炎癥因子表達明顯增高，提示LPS誘導的HUVECs炎癥反應可能是上調腎素高表達后，通過TLR4途徑促進HUVECs炎癥因子的分泌與表達。

Figure 8.The effect of aliskiren on the mRNA expression of renin, TLR4, MMP-2 and MMP-9 in LPS-induced HUVECs. Mean±SD.n=10.*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsLPS group;△P<0.05vsMD group.

圖8Aliskiren對LPS誘導HUVECs腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9 mRNA表達的影響

AS不穩(wěn)定斑塊形成，甚至斑塊破裂，是引發(fā)急性冠狀動脈綜合癥等臨床嚴重并發(fā)癥的主要病理學基礎[9]。而不穩(wěn)定斑塊的重要特征之一就是斑塊內血管新生。血管新生是通過血管內皮細胞的增殖和遷移，從先前存在的血管處以芽生或者非芽生的形式形成新的血管的過程，主要分為內皮細胞增殖、遷移、管腔形成3個階段。斑塊內的新生血管無平滑肌支持，管壁薄弱，易于引起斑塊不穩(wěn)定、斑塊內出血,甚至斑塊破裂。Moulton 等[10]的研究證實，血管生成抑制藥物可以抑制動脈粥樣硬化病灶內新生血管的形成，穩(wěn)定斑塊、減緩斑塊的發(fā)展。Aliskiren是新發(fā)現(xiàn)的腎素抑制劑，在動脈粥樣硬化和冠心病的治療中具有重要意義[11-12]。HUVECs 是研究血管新生的主要細胞，故本研究通過觀察aliskiren對HUVECs的增殖、遷移及管腔形成能力來評價aliskiren對新生血管形成的抑制作用。研究結果表明，aliskiren呈濃度依賴性抑制HUVECs增殖、遷移及新生血管形成。

Ross[13]認為，炎癥反應存在于動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的每一個環(huán)節(jié)。研究表明，炎癥反應也是引起動脈粥樣硬化斑塊內血管新生的主要原因之一。

Figure 9.The effect of aliskiren on the protein expression of renin, TLR4, MMP-2 and MMP-9 in LPS-induced HUVECs. Mean±SD.n=10.*P<0.05vscontrol group;#P<0.05vsLPS group;△P<0.05vsMD group.

圖9Aliskiren對LPS誘導HUVECs腎素、TLR4、MMP-2和MMP-9蛋白表達的影響

LPS是實驗中最常用的經典炎癥刺激因子，可通過激活TLR4傳導途徑激活內皮細胞，介導趨化因子、炎癥因子等的表達。本研究以LPS作為炎癥刺激物，觀察TLR4傳導途徑激活對新生血管形成的影響，探討aliskiren抑制新生血管形成的機制。研究結果表明，aliskiren呈濃度依賴性抑制TLR4表達及TNF-α、ICAM-1和MCP-1等炎癥因子的分泌，說明aliskiren可能通過抑制TLR4傳導途徑激活減輕炎癥反應，從而抑制新生血管的形成，穩(wěn)定斑塊。

斑塊內細胞外基質的代謝情況是影響動脈粥樣斑塊穩(wěn)定性的又一個重要因素。基質金屬蛋白酶家族是影響基質分解的關鍵因子。AS病變時，被激活的內皮細胞以及單核-巨噬細胞均可分泌MMP-2、MMP-9及VEGF等，刺激新生血管內皮細胞增殖、遷移而加快血管新生，另一方面，基質金屬蛋白酶通過降解基底膜和重塑細胞外基質使內皮細胞從原有血管遷移到外周形成新生血管[14]。有研究將HUVECs培養(yǎng)于基膜樣物質上時，內皮細胞很快排成直線，圍成管狀，用明膠酶譜分析，上清液中檢測出大量活化的MMP-2 和MMP-9，說明MMP-2、MMP-9與新生血管的形成有密切的關系[15]。本研究結果表明，aliskiren呈濃度依賴性抑制MMP-2、MMP-9的mRNA及蛋白的表達，說明aliskiren可能通過抑制MMP-2、MMP-9的表達，抑制新生血管的形成，穩(wěn)定斑塊。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)腎素在動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過程中的可能作用，aliskiren通過下調腎素表達抑制TLR4途徑介導的炎癥反應及MMP的生成，抑制動脈粥樣硬化斑塊內新生血管的形成，增強斑塊的穩(wěn)定性，為動脈粥樣硬化的防治提供新的治療靶點和理論依據。

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(責任編輯： 林白霜， 羅森)

Inhibitory effect of aliskiren on LPS-induced angiogenesis of HUVECs

LI Zhao-xin1, LIU Jiang-yue2, WANG Qi-xin1

(1TheAffiliatedHospitalofQingdaoUniversity,Qingdao266000,China;2DepartmentofPathophysiology,WeifangMedicalCollege,Weifang261053,China.E-mail:lilyzx@163.com)

AIM: To investigate the inhibitory effect of aliskiren on the angiogenesis of human umbilical vein endothelial cells (HUVECs) induced by lipopolysaccharide (LPS) and to explore its possible mechanism. METHODS: HUVECs were cultured and randomly divided into blank group and renin group. The levels of tumor necrosis factor-α (TNF-α) and intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) in the culture supernatant were detected by ELISA. The protein levels of Toll-like receptor 4 (TLR4) and ICAM-1 in the HUVECs were determined by Western blot. HUVECs were cultured and randomly divided into control group, LPS group, low-dose (1 μmol/L) aliskiren group, middle-dose (10 μmol/L) aliskiren group and high-dose (100 μmol/L) aliskiren group. The proliferation of HUVECs was detected by MTT and BrdU assays. The mobility of HUVECs was measured by Transwell assay. The formation of the vessels was judged by observing the formation of the luminal structure by HUVECs in Matrigel. The levels of TNF-α, ICAM-1 and monocyte chemotactic protein 1 (MCP-1) in the culture supernatant were measured by ELISA. The expression of renin, TLR4, matrix me-talloproteinases-2 (MMP-2) and matrix metalloproteinases-9 (MMP-9) at mRNA and protein levels in the HUVECs was determined by RT-PCR and Western blot. RESULTS: Renin stimulated the expression of inflammatory factors and TLR4 in the HUVECs. Aliskiren inhibited the growth, migration and angiogenesis of HUVECs in a dose-dependent manner, decreased the levels of TNF-α, ICAM-1 and MCP-1 and the expression of renin, MMP-2 and MMP-9, and inhibited TLR4 expression (P<0.05).CONCLUSION: Aliskiren inhibits LPS-induced angiogenesis of HUVECs, which may be related to the down-regulation of renin expression, the inhibition of TLR4-mediated inflammatory reaction, and the formation of MMP-9 and MMP-2.

Aliskiren; Angiogenesis; Inflammation; Toll-like receptor 4; Renin

1000- 4718(2016)04- 0602- 08

2015- 07- 27

2016- 03- 14

山東省中醫(yī)藥管理局資助項目(No.2013-237)； 青島市民生計劃項目(No.13-1-4-139-jch)

Tel: 0532-82911619； E-mail: lilyzx@163.com

R972.6; R363.2

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2016.04.005

雜志網址： http://www.cjpp.net