劉賢英　程杰平　祁盛昆　陳　晗　向　梅　侯麗娜　于龍光

(吉林大學(xué)第二醫(yī)院，吉林　長春　130041)

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卵巢癌個(gè)體化治療的可行性

劉賢英程杰平祁盛昆1陳晗向梅侯麗娜2于龍光

(吉林大學(xué)第二醫(yī)院，吉林長春130041)

目的探討原代人卵巢癌細(xì)胞對4種化療藥物的敏感性。方法應(yīng)用原代人卵巢癌細(xì)胞為靶點(diǎn)，觀察其對4種化療藥物的敏感性。MTT法檢測原代卵巢癌細(xì)胞的增殖抑制率，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期進(jìn)程的變化，透射電子顯微鏡觀察其亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果MTT結(jié)果顯示，斑蝥酸鈉維生素B6、順鉑對培養(yǎng)的卵巢癌細(xì)胞敏感性較強(qiáng)，而紫杉醇、環(huán)磷酰胺敏感性次之，組間比較差異顯著(P<0.05)。流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示不同的化療藥物誘導(dǎo)原代卵巢癌細(xì)胞周期分布表現(xiàn)為G0/G1期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少，G2/M期細(xì)胞相對增多，細(xì)胞凋亡率升高，組間比較差異顯著(P<0.05)。透射電子顯微鏡下可見細(xì)胞核染色質(zhì)趨邊凝集、線粒體腫脹，可見凋亡小體改變。結(jié)論原代人卵巢癌細(xì)胞培養(yǎng)及藥物敏感性實(shí)驗(yàn)為卵巢癌術(shù)后個(gè)體治療提供重要參考依據(jù)。此對降低化療藥物的毒副作用，避免多藥耐藥的產(chǎn)生，尤其對遠(yuǎn)端微小轉(zhuǎn)移灶的治療有重要意義。

卵巢癌；個(gè)體化治療；細(xì)胞周期；凋亡

1吉林大學(xué)臨床學(xué)院2012級

2空軍航空大學(xué)教官訓(xùn)練基地一團(tuán)衛(wèi)生隊(duì)

卵巢癌為三大婦科惡性腫瘤之一，發(fā)病隱匿，早期診斷率低，大部分患者確診時(shí)已是晚期，其死亡率居?jì)D科腫瘤首位，隨著腫瘤細(xì)胞學(xué)的發(fā)展和大量靶向藥物的臨床應(yīng)用及臨床試驗(yàn)，使得腫瘤治療的個(gè)體化領(lǐng)域得到了迅速發(fā)展，從細(xì)胞水平預(yù)測治療方式的有效性和藥物敏感性不僅成為可能，而且也成為必然趨勢〔1〕。因此，對卵巢癌發(fā)病機(jī)制和診斷及靶向治療策略，具有一定的研究和應(yīng)用價(jià)值。

1　材料與方法

1.1材料8例人卵巢癌組織由我科住院病人提供，均有病理診斷。RPMI1640培養(yǎng)基，噻唑藍(lán)(MTT)試劑購于美國sigma公司。4種抗腫瘤藥物：斑蝥酸鈉維生素B6、順鉑、環(huán)磷酰胺、紫杉醇由我院藥劑科提供，

1.2方法(1)原代卵巢癌細(xì)胞制備方法參考文獻(xiàn)〔2〕進(jìn)行，略加改進(jìn)。(2)MTT比色法：取制備好的人卵巢癌細(xì)胞懸液，調(diào)細(xì)胞數(shù)為2×105/ml，加入96孔塑料培養(yǎng)板內(nèi)，每孔100 μl。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分別加入斑蝥酸鈉維生素B6終濃度為5 μg/ml，順鉑5 μg/ml,紫杉醇5 μg/ml及環(huán)磷酰胺20 μg/ml，置37℃5%二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)靜止培養(yǎng)24 h。(3)流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞培養(yǎng)及分組同(2)，不同之處是將96孔塑料培養(yǎng)板改為25 ml培養(yǎng)瓶進(jìn)行。(4)透射電子顯微鏡技術(shù)，細(xì)胞培養(yǎng)及分組同(3)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0軟件行t檢驗(yàn)。

2　結(jié)　果

2.1MTT結(jié)果對照組、斑蝥酸鈉組、順鉑組、紫杉醇組、環(huán)磷酰胺組A值分別為1.36±0.12，0.78±0.19，0.89±0.17，0.95±0.23，1.04±0.17。斑蝥酸鈉維生素B6、順鉑對原代人卵巢癌細(xì)胞敏感性好，抑制率41.8%和34.6%，而紫杉醇，環(huán)磷酰胺抑制率為30.2%和23.6%，組間比較差異顯著(P<0.01,P<0.05)。

2.2流式細(xì)胞儀結(jié)果4種抗腫瘤藥物對原代人卵巢癌細(xì)胞周期進(jìn)程均有影響，G0/G1期細(xì)胞增多，S期細(xì)胞減少，G2/M期細(xì)胞相對增多。但是，斑蝥酸鈉維生素B6、順鉑敏感性較好，優(yōu)于紫杉醇、環(huán)磷酰胺組。見表1。

表1　4種抗癌藥物對人卵巢癌細(xì)胞周期進(jìn)程的影響±s，%)

與對照組比較：1)P<0.05;2)P<0.01

2.3透射電子顯微鏡結(jié)果四種抗腫瘤藥物均致卵巢癌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變，可見細(xì)胞空化，膜系統(tǒng)破壞，染色質(zhì)凝集深染，可見凋亡小體。見圖1。

A：斑蝥酸鈉組原代卵巢癌細(xì)胞染色質(zhì)趨邊、凝集，可見凋亡小體；B：順鉑組原代卵巢癌細(xì)胞染色質(zhì)呈條索狀，膜系統(tǒng)破壞；C：紫杉醇組原代卵巢癌細(xì)胞線粒體腫脹、胞器腫脹,大量空泡出現(xiàn)；D：環(huán)磷酰胺組原代卵巢癌細(xì)胞可見空泡形成圖1　四組細(xì)胞透射電子顯微鏡下改變(×5 000)

3　討　論

卵巢癌的常規(guī)治療是手術(shù)為主，并輔以術(shù)后化療的聯(lián)合治療。然而由于中晚期卵巢癌腫瘤體積大，腫瘤細(xì)胞在腹腔內(nèi)形成多種組織器官的種植轉(zhuǎn)移，臨床治療時(shí)相對比較辣手〔3〕。因此，如何正確對卵巢癌術(shù)后復(fù)發(fā)實(shí)施恰當(dāng)合理的治療是一個(gè)值得研究和探討的臨床問題〔4〕。本研究結(jié)果顯示斑蝥酸鈉維生素B6、順鉑對原代人卵巢癌細(xì)胞有明顯的增殖抑制作用，而紫衫醇、環(huán)磷酰胺次之，抑制細(xì)胞增殖是細(xì)胞凋亡的一種有效方式，這一點(diǎn)從細(xì)胞凋亡率上得到體現(xiàn)。研究證實(shí)MTT實(shí)驗(yàn)可準(zhǔn)確反映活細(xì)胞數(shù)量及細(xì)胞活化狀態(tài)，被廣泛于抗腫瘤藥物篩選和細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)研究，具有一定的客觀性。

流式細(xì)胞儀結(jié)果顯示，4種化療藥物對原代卵巢癌細(xì)胞周期進(jìn)程均有影響，使細(xì)胞周期發(fā)生明顯改變，G0/G1期細(xì)胞比例升高，S期細(xì)胞比例減少，從而使G2/M期細(xì)胞相對增多，與正常對照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。細(xì)胞周期是細(xì)胞生命活動中一個(gè)重要過程。在細(xì)胞周期4個(gè)時(shí)相中，G0/G1期是啟動細(xì)胞周期循環(huán)的關(guān)鍵，細(xì)胞增殖是一個(gè)高度保守且備受多種細(xì)胞因子的嚴(yán)格控制〔5〕，任何一個(gè)環(huán)節(jié)失控即可發(fā)生功能和形態(tài)學(xué)改變。通過流式細(xì)胞儀分析，斑蝥酸鈉維生素B6組的細(xì)胞周期被阻滯在G0/G1期，增殖能力減弱，效果最好。斑蝥酸鈉是斑蝥素的半合成衍生物，保留了斑蝥素的抗腫瘤作用〔6〕，其機(jī)制為：①抑制腫瘤細(xì)胞蛋白質(zhì)和核酸的合成，繼而影響RNA、DNA的生物合成；②降低腫瘤細(xì)胞CAMP磷酸二酯酶活性；③改變線粒體膜的通透性，尤其是斑蝥酸鈉與維生素B6合劑應(yīng)用可進(jìn)一步減輕化療的不良反應(yīng)，效果明顯優(yōu)于其他抗腫瘤藥物。文獻(xiàn)報(bào)道，人卵巢癌細(xì)胞對鉑類藥物敏感〔7〕。本文結(jié)果顯示5 μg/ml順鉑對人卵巢癌細(xì)胞抑制率為34.6%，較斑蝥酸鈉維生素B6次之。但是鉑類藥物毒副作用較強(qiáng)，且易產(chǎn)生耐藥，不宜長期使用；而紫杉醇雖然也是從植物中提取的抗腫瘤藥物，對人卵巢癌細(xì)胞抑制率為30.2%，但是由于昂貴的價(jià)格限制了臨床應(yīng)用；而環(huán)磷酰胺屬于化學(xué)合成藥，具有一定的副作用，且療效一般。

此外，筆者還應(yīng)用透射電子顯微鏡觀察不同抗腫瘤藥物對原代卵巢癌細(xì)胞的亞細(xì)胞水平改變?？梢娂?xì)胞器腫脹，線粒體膜破裂，有大量空泡呈現(xiàn)，細(xì)胞核染色質(zhì)凝集，可見凋亡小體。

綜上所述，取手術(shù)切除的卵巢癌組織，制備單細(xì)胞培養(yǎng)，進(jìn)行藥物敏感性實(shí)驗(yàn)，用于卵巢癌術(shù)后的個(gè)體化治療，將為預(yù)防卵巢癌的復(fù)發(fā)提供最佳治療途徑。

1蘇丹，馬勝林，祁鳴.基因?qū)蛐阅[瘤治療個(gè)體化研究進(jìn)展〔J〕.國際腫瘤學(xué)雜志,2010;37(3)：176-8.

2程海光，李超.原代骨肉瘤細(xì)胞培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn)〔J〕.中國老年學(xué)雜志,2012;32(24):6223-5.

3Ahmed N,Abubakert K,Findlay J,etal.Epithelial mesenchymal transition and cancer stem cell-like phenotypes facilitate chemoresistance in recurrent ovarian cancer〔J〕.Curr Cancer Drug Targets,2010;10(3);268-78.

3Hope JM,Blank SV.Current status of maintenance therapy for advanced ovarian cancer〔J〕.Int J Women Health,2010;1:173-80.

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5Pratheeshkumar P,Kuttan G.Oieanolie acid induces apoptosis by modulating P53,Bax,Bcl-2 and caspase-3 gene expression and regu-lates the activstion of transcription factors and cytokine profile in B16F〔J〕.J Environ pathil Toxico J Oncol,2011;30(1):21-31.

6劉忠虎,陳艾江,馬新剛,等.斑蝥酸鈉維生素B6注射液輔以胸腔鏡內(nèi)臟神經(jīng)切斷術(shù)治療癌腹痛〔J〕.國際腫瘤學(xué)雜志,2013;40(5)：398-9.

7趙曉艷.晚期上皮性卵巢癌新輔助化療的療效分析〔J〕.國際腫瘤學(xué)雜志,2014;41(10):792-4.

〔2015-12-31修回〕

(編輯曲莉)

于龍光(1960-)，男，副教授，主要從事四肢關(guān)節(jié)研究。

劉賢英(1966-)，女，醫(yī)學(xué)博士，主要從事婦科腫瘤研究。

R735.3

A

1005-9202(2016)17-4167-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.014