劉　亮　左　靜　武中林　王光大　倪曉辰　趙　麗　左連富

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院腫瘤研究所流式細(xì)胞室，河北　石家莊　050011)

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肺耐藥相關(guān)蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與多藥耐藥的相關(guān)性

劉亮左靜1武中林2王光大3倪曉辰4趙麗左連富

(河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院腫瘤研究所流式細(xì)胞室，河北石家莊050011)

目的檢測(cè)肺耐藥相關(guān)蛋白(LRP)在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與食管癌多藥耐藥的相關(guān)性。方法通過免疫組化S-P法檢測(cè)LRP在食管鱗狀細(xì)胞癌及正常食管黏膜組織中的表達(dá)，并檢測(cè)LRP與食管鱗狀細(xì)胞癌不同臨床病理特征的相關(guān)性。結(jié)果LRP在食管鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)水平顯著高于正常食管組織(P<0.01)，食管鱗狀細(xì)胞癌組織中LRP陽性表達(dá)水平與各臨床病理特征無相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論LRP在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的高表達(dá)可能參與了食管鱗狀細(xì)胞癌多藥耐藥的形成。

食管鱗癌；免疫組化；多藥耐藥；肺耐藥相關(guān)蛋白

大多食管癌患者發(fā)現(xiàn)疾病時(shí)已是癌癥晚期，喪失了手術(shù)治療的機(jī)會(huì)，只能進(jìn)行化療或放療，且化療是控制食管癌術(shù)后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的重要手段，但目前藥物治療效果不理想。且腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性，嚴(yán)重影響了療效。肺耐藥相關(guān)蛋白(LRP)與腫瘤的多藥耐藥密切相關(guān)，廣泛分布在多種腫瘤組織中〔1～3〕。本文探討LRP在不同食管組織中的表達(dá)及其與食管鱗狀細(xì)胞癌耐藥的相關(guān)性。

1　材料與方法

1.1食管組織收集河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院2008年1月至2009年12月經(jīng)病理診斷證實(shí)的食管癌病例150例，從中選出80例食管鱗狀細(xì)胞癌和正常食管黏膜組織用于LRP蛋白的免疫組化檢測(cè)，男55例，女25例；年齡38～83〔平均(58.38±6.70)〕歲。

1.2主要試劑LRP抗體、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)試劑盒、免疫組化二抗試劑盒均由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3免疫組化方法檢測(cè)LRP蛋白按常規(guī)免疫組化S-P法操作，結(jié)果判定：細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。根據(jù)腫瘤細(xì)胞染色程度及陽性細(xì)胞所占百分比進(jìn)行綜合評(píng)分，①陽性(+)，陽性細(xì)胞數(shù)>10%；②陰性(-)，無陽性細(xì)胞或陽性細(xì)胞數(shù)≤10%。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2　結(jié)　果

圖1　不同食管黏膜組織中LRP蛋白表達(dá)(DAB，×200)

2.1LRP蛋白在不同食管黏膜組織中的表達(dá)圖1可見，LRP陽性產(chǎn)物定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒狀，彌散或散在分布。食管正常黏膜中LRP蛋白表達(dá)陽性率35.00%(28/80)，明顯低于食管鱗狀細(xì)胞癌組織LRP蛋白陽性表達(dá)率55.00%(44/80)(P=0.005)。

2.2食管鱗狀細(xì)胞癌中LRP蛋白陽性表達(dá)與不同臨床病理特征的關(guān)系食管鱗狀細(xì)胞癌中LRP蛋白的陽性表達(dá)與癌組織分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無相關(guān)性(P>0.05)，見表1。

表1　食管鱗癌中LRP蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系(n)

3　討　論

腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥一直是臨床最為重視的問題，它影響到治療效果和愈后情況，有觀點(diǎn)認(rèn)為腫瘤細(xì)胞的耐藥性是腫瘤細(xì)胞在化療藥物的作用下所發(fā)生的生物學(xué)改變，如藥物外流的增多〔4〕，藥物吸收的減少〔5〕，藥物代謝酶的功能恢復(fù)，結(jié)合酶的活動(dòng)〔6～8〕，DNA的修復(fù)使細(xì)胞對(duì)凋亡的敏感性降低〔9,10〕及藥物靶點(diǎn)的突變〔11～13〕等。近年研究的熱點(diǎn)集中在藥物外流增多，目前的研究機(jī)制認(rèn)為化療藥物可通過細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞核上的蛋白和(或)通道將藥物輸送到細(xì)胞外，從而使得腫瘤細(xì)胞內(nèi)化療藥物的濃度降低，導(dǎo)致化療藥物不能殺傷腫瘤細(xì)胞，表現(xiàn)為腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥。在過去的研究中本研究小組發(fā)現(xiàn)具有藥物外排泵作用的三磷酸腺苷結(jié)合盒(ABC)B1及G2與食管鱗狀細(xì)胞癌的多藥耐藥有關(guān)〔14～16〕。

LRP是1993年Scheper等〔17〕在人非小細(xì)胞肺癌的P-gp陰性的多藥耐藥(MDR)細(xì)胞系SW-1573/2R120中首次發(fā)現(xiàn)，因此被命名為LRP。LRP基因定位于染色體16p13.1-16p11.2，編碼分子量110 000的蛋白。LRP蛋白含有896個(gè)氨基酸殘基，95%的LRP位于細(xì)胞質(zhì)中，5%位于核膜的胞質(zhì)和核膜孔附近。LRP廣泛分布在腫瘤組織中，且在腫瘤組織中表達(dá)率及表達(dá)強(qiáng)度明顯高于正常組織，但不同腫瘤其表達(dá)率不同。LRP可能通過兩種機(jī)制引起MDR，它可使以細(xì)胞核為靶點(diǎn)的藥物不能通過核孔進(jìn)入細(xì)胞核，即使進(jìn)入也在發(fā)生藥效前被泵出核外；或可使胞質(zhì)中藥物進(jìn)入囊泡，并通過胞吐作用排出細(xì)胞外，從而使細(xì)胞內(nèi)抗癌藥的濃度降低，表現(xiàn)出抗癌藥對(duì)腫瘤細(xì)胞的作用降低，即腫瘤細(xì)胞對(duì)抗癌藥的耐藥。LRP雖然也具有將藥物排出的作用，但它沒有消耗ATP，而是主要通過“胞吐作用”將藥物排出細(xì)胞外，異于ABCB1及ABCG2引起耐藥的作用機(jī)制。本研究發(fā)現(xiàn)LRP可能與食管鱗狀細(xì)胞癌耐藥有關(guān)，但與食管癌的疾病程度無關(guān)。

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〔2015-05-30修回〕

(編輯苑云杰/曹夢(mèng)園)

河北省自然科學(xué)基金(H2012206107)；河北省醫(yī)學(xué)科學(xué)研究重點(diǎn)課題(20160167)；河北省普通高等學(xué)校強(qiáng)勢(shì)特色學(xué)科腫瘤學(xué)建設(shè)經(jīng)費(fèi)〔冀教高(2005)52號(hào)〕

劉亮(1981-)，男，醫(yī)學(xué)博士，副教授，主要從事食管癌早期診斷及治療研究。

R735.1

A

1005-9202(2016)17-4141-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.002

1腫瘤內(nèi)科2放射科3CT室4泌尿外科