魏香蘭

埃博拉病毒與抗病毒新藥的研究進(jìn)展

魏香蘭

本文查詢與分析近年來(lái)有關(guān)埃博拉病毒與抗埃博拉病毒新藥方面所對(duì)應(yīng)的學(xué)術(shù)研究成果以及期刊文獻(xiàn)資料，對(duì)埃博拉病毒以及抗病毒新藥方面的研究進(jìn)展進(jìn)行全面歸納與總結(jié)。埃博拉病毒屬于一類會(huì)導(dǎo)致靈長(zhǎng)類動(dòng)物以及人類產(chǎn)生埃博拉出血熱的烈性傳染性病毒，死亡率非常高。該病毒對(duì)高溫有一定耐受性，對(duì)化學(xué)藥品、X射線以及鈷60照射敏感性高。目前熒光定量PCR作為檢測(cè)埃博拉病毒的金標(biāo)準(zhǔn)。抗埃博拉病毒新藥的研發(fā)與應(yīng)用為對(duì)抗與預(yù)防埃博拉病毒感染提供了可靠思路，MWA-BN Filo/AdVac、cAd3-EBOV以及ZMapp等新藥產(chǎn)品的臨床研發(fā)與應(yīng)用均具有一定性能優(yōu)勢(shì)，在降低埃博拉病毒感染率以及致死率方面有重要價(jià)值，值得臨床重視并深入研究。

抗病毒；埃博拉病毒；新藥

【Abstract】

Article query and analysis in recent years about the Ebola virus Ebola anti-viral drugs with regard to academic research and the corresponding literature and journals， research progress Ebola virus and anti-viral drugs aspect of a comprehensive induction and summary. The Ebola virus belongs to a class will result in primates and humans Ebola haemorrhagic fever potent infectious virus， the mortality rate is very high. The virus has a certain tolerance to heat， to chemical， X-ray irradiation and cobalt-60 high sensitivity. Currently， Real-time PCR is the gold standard for detection of Ebola virus in clinical. Development and application of anti-viral drugs for Ebola prevention against Ebola virus infection provide a reliable idea， Clinical research and application of new drug， MWA-BN Filo/AdVac、cAd3-EBOV and ZMapp， products have certain performance advantages. There is significant value in reducing the Ebola virus infection and death rates， is worthy of attention and study them in depth.

【Key words】Anti-virus， Ebola virus， Drug

據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，自2014年3月首次爆發(fā)埃博拉病毒疫情以來(lái)，全球范圍內(nèi)已確診或高度疑似埃博拉病毒感染的患者已達(dá)到數(shù)萬(wàn)人，其中30%以上患者死亡［1］。2014年所爆發(fā)的埃博拉病毒疫情無(wú)論從規(guī)模還是波及范圍上看均超過(guò)以往任何一次，且已經(jīng)突破大量國(guó)家的醫(yī)療防御底線［2］。疫情的持續(xù)擴(kuò)大勢(shì)必會(huì)造成全球范圍內(nèi)的恐慌，因此深入對(duì)埃博拉病毒的認(rèn)知，加強(qiáng)抗埃博拉病毒新藥的研發(fā)與應(yīng)用工作已經(jīng)勢(shì)在必行。為總結(jié)埃博拉病毒與抗埃博拉病毒新藥方面的研究進(jìn)展，本文查詢與分析近年來(lái)相關(guān)期刊文獻(xiàn)資料，對(duì)有關(guān)問(wèn)題進(jìn)行歸納與總結(jié)。具體歸納如下。

1　埃博拉病毒簡(jiǎn)介

埃博拉病毒（Ebola virus，EBOV）屬于一類會(huì)導(dǎo)致靈長(zhǎng)類動(dòng)物以及人類產(chǎn)生埃博拉出血熱的烈性傳染性病毒，死亡率非常高。21世紀(jì)初，非洲剛果和安哥拉也曾爆發(fā)一次出血熱疫情，但病原體為馬爾堡病毒。馬爾堡病毒與埃博拉病毒同屬于絲狀病毒科，感染埃博拉病毒患者臨床癥狀與馬爾堡病毒高度相似，包括發(fā)熱、嘔吐、頭痛、內(nèi)臟出血等。雖然兩種病毒的外形和致病性基本相同，但抗原性不同，可以通過(guò)血清學(xué)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行鑒別［3］。EBOV在人體內(nèi)潛伏期較短，多為2～21 d，通常病毒感染后5～10 d內(nèi)可有臨床癥狀表現(xiàn)。

圖1　埃博拉病毒透射電子顯微檢測(cè)圖

EBOV為單股負(fù)鏈的具有囊膜的RNA病毒。其基因組不分節(jié)斷，長(zhǎng)度約為19 kb，包含7個(gè)基因，分別編碼NP、VP35、GP、VP30、VP24、L［4］。在經(jīng)色彩增強(qiáng)后的透射電子顯微檢測(cè)該病毒如下圖所示（見圖1）。根據(jù)發(fā)現(xiàn)地和抗原特性將EBOV分為5個(gè)亞型：（1）扎伊爾型EBOV（ZEBOV）：目前發(fā)現(xiàn)的對(duì)人類感染率和致死率最強(qiáng)的亞型，對(duì)靈長(zhǎng)類動(dòng)物亦有較高的致病性［5］；（2）蘇丹型EBOV（SEBOV）：該型病毒對(duì)靈長(zhǎng)類動(dòng)物以及人類均有較高的感染率以及致死率；（3）科特迪瓦型EBOV（REBOV）：該型病毒對(duì)人類有較高感染性，但致死率較低，對(duì)黑猩猩有極高致死率；（4）萊斯頓型EBOV（REBOV）：該型病毒對(duì)人類具有感染性，但目前尚無(wú)對(duì)人類致病或致死的相關(guān)報(bào)道［6］，其對(duì)靈長(zhǎng)類動(dòng)物感染率、致死率非常高；（5）本迪布焦型EBOV（BEBOV，又稱烏干達(dá)型），該型病毒對(duì)人類有一定感染性，致死率在25%～90%之間［7］。

2　埃博拉病毒特性

已有研究中表明［8］：在常溫環(huán)境下EBOV呈穩(wěn)定狀態(tài)且對(duì)高溫有一定的耐受性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在環(huán)境溫度56.0 ℃條件下無(wú)法完全滅活；在環(huán)境溫度60.0 ℃條件下，EBOV的威脅性會(huì)被破壞，此條件下紫外線照射處理持續(xù)2 min則可使病毒完全滅活。同時(shí)EBOV表現(xiàn)出了對(duì)次氯酸鈉、乙醚、β-丙內(nèi)脂、去氧膽酸鈉以及福爾馬林等化學(xué)藥品的敏感性；在X射線以及鈷60照射條件下也能夠使EBOV完全滅活。在相關(guān)動(dòng)物以及人體試驗(yàn)中表明：在血液樣本或病尸樣本中，該病毒可維持?jǐn)?shù)周存活，其感染性在5周內(nèi)無(wú)明顯改變，在8周以上時(shí)滴度會(huì)下降1/2以上。

EBOV的傳播途徑包括血液傳播、汗水傳播、唾液傳播以及分泌物傳播。由于EBOV具有極高的傳染性，被WHO列為生物安全4級(jí)病原。目前常用的確診方法包括病毒的分離培養(yǎng)，IgM和IgG抗體的檢測(cè)、常規(guī)PCR、恒溫核酸檢測(cè)技術(shù)、免疫熒光和ELISA等。但這些方法的操作復(fù)雜或是靈敏度不高，臨床上多采用熒光定量PCR法。熒光定量PCR是在常規(guī)PCR的基礎(chǔ)上，通過(guò)熒光染料或熒光標(biāo)記的特異性探針，對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記跟蹤，從而被熒光檢測(cè)系統(tǒng)識(shí)別，無(wú)需PCR后處理，比普通PCR更為迅速、簡(jiǎn)便、靈敏，定量范圍也更寬［9］。其中TaqMan探針法的應(yīng)用最為廣泛，TaqMan探針可以直接與擴(kuò)增靶序列特異性結(jié)合，發(fā)出熒光從而實(shí)現(xiàn)EBOV的快速準(zhǔn)確鑒別。目前此方法已成為臨床檢測(cè)EBOV的金標(biāo)準(zhǔn)［10］。

3　抗埃博拉病毒新藥研究進(jìn)展

目前醫(yī)療業(yè)界所達(dá)成的共識(shí)是［11］：疫苗是抗擊埃博拉病毒效果最為確切的手段之一?，F(xiàn)階段處于開發(fā)研究階段中的抗埃博拉病毒產(chǎn)品，過(guò)半均屬于疫苗，如MVA-BN Filo/AdVac、cAd3-EBOV，也有針對(duì)暴露后治療的生物治療藥物，如ZMapp，相應(yīng)的新藥及其作用機(jī)制總結(jié)如下。

3.1 MWA-BN Filo/AdVac

MWA-BN Filo由丹麥生物制藥公司Bavarian Nordic負(fù)責(zé)開發(fā)，AdVac由荷蘭生物技術(shù)公司Crucell公司提出（后被強(qiáng)生公司收購(gòu)并繼續(xù)研究）。該疫苗主要針對(duì)ZEBOV，由Crucell公司的腺病毒載體疫苗技術(shù)和Bavarian Nordic公司的痘苗病毒安卡拉株技術(shù)生產(chǎn)［12］，已經(jīng)進(jìn)入臨床前研究階段中。MWA-BN Filo/AdVac由MVA-BN安卡拉牛痘病毒經(jīng)修飾處理的減毒病毒研制而成，可通過(guò)對(duì)腺病毒抗原進(jìn)行編碼處理的方式發(fā)揮對(duì)EBOV的對(duì)抗效果。在臨床試驗(yàn)中，該疫苗需進(jìn)行兩次注射，第一次注射后能夠引導(dǎo)機(jī)體免疫系統(tǒng)進(jìn)入“備戰(zhàn)”狀態(tài)，第二次注射后則能夠強(qiáng)化機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)于EBOV的特異性響應(yīng)能力。在獼猴身上進(jìn)行的動(dòng)物試驗(yàn)中，MVA-BN Filo/AdVac組合疫苗顯示出對(duì)ZEBOV的侵襲具有良好的防護(hù)作用。I期臨床試驗(yàn)已在英國(guó)、美國(guó)及非洲展開，該組合疫苗的具體療效情況還有待進(jìn)一步的臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果公示。

3.2 chAd3-EBOV

chAd3-EBOV由英國(guó)葛蘭素史克公司與美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院（NIH）過(guò)敏及傳染病研究所研發(fā)，目前已通過(guò)I期臨床試驗(yàn)。chAd3-EBOV主要由可表達(dá)ZEBOV和SEBOV的GP蛋白下重組的黑猩猩腺病毒血清型3（ChAd3）構(gòu)成，屬于抗埃博拉病毒的治療性疫苗。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示，該疫苗在獼猴中可迅速產(chǎn)生針對(duì)EBOV的急性免疫保護(hù)作用。2014年9月，在歐洲、美國(guó)和馬里展開的I期臨床試驗(yàn)顯示該疫苗有良好的保護(hù)性和安全性，隨后將進(jìn)行Ⅱ期、Ⅲ期臨床試驗(yàn)以驗(yàn)證該疫苗對(duì)EBOV的對(duì)抗效果。但從應(yīng)對(duì)現(xiàn)階段埃博拉病毒疫情的角度上來(lái)說(shuō)，生產(chǎn)足量chAd3-EBOV疫苗產(chǎn)品的耗時(shí)長(zhǎng)，如何縮短該疫苗產(chǎn)品的研發(fā)周期，并推動(dòng)其臨床應(yīng)用的進(jìn)展已成為相關(guān)人員關(guān)注的課題。

3.3 ZMapp

ZMapp是由美國(guó)Mapp生物制藥公司和加拿大Defyus公司合作研發(fā)的單克隆抗體藥物，用于埃博拉病毒感染者出現(xiàn)臨床癥狀后的治療［13］，目前已經(jīng)進(jìn)入臨床研究階段中。ZMapp由3種人鼠嵌合抗體優(yōu)化組合，其中包含有MB-003抗體以及ZMAb抗體的最佳成分，在煙草細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。目前ZMapp是臨床中被證實(shí)對(duì)抗埃博拉病毒效果最佳的新藥之一。外媒有報(bào)道ZMapp在治療兩名感染EBOV的美國(guó)醫(yī)護(hù)人員中發(fā)揮了重要的作用。但由于條件有限，未設(shè)置相關(guān)的對(duì)照試驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證其安全性和有效性。另外由于ZMapp產(chǎn)品采取植物制備法，制備周期長(zhǎng)（多需要4～6個(gè)月），且每批次產(chǎn)品數(shù)量非常有限，而且一旦病毒變異，該藥也面臨著失效的風(fēng)險(xiǎn)。

歷史上，非洲大陸曾多次爆發(fā)出血熱疫情，其病原體——埃博拉病毒，傳播快，致死率高，具有制備成為生物制劑的可能，因此廣受各國(guó)政府和軍事機(jī)構(gòu)關(guān)注。本文綜合多篇相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道認(rèn)為，埃博拉出血熱是至今人類發(fā)現(xiàn)的傳染性和病死率最高的烈性傳染病之一，由于缺乏有效的治療手段，該病毒對(duì)人類社會(huì)具有極高的潛在危險(xiǎn)性。目前抗埃博拉病毒疫苗與生物治療藥物的研發(fā)與應(yīng)用為對(duì)抗與預(yù)防埃博拉病毒感染提供了可靠思路，MWABN Filo/AdVac、cAd3-ZEBOV、以及ZMapp等新藥產(chǎn)品的臨床研發(fā)與應(yīng)用均具有一定性能優(yōu)勢(shì)，在降低埃博拉病毒感染率以及致死率方面有重要價(jià)值，值得臨床重視并加以深入研究。

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Progress in Ebola Virus and Anti-viral Drugs

WEI Xianglan Department of Pharmacy，the First Affiliated Hospital of Xiamen University， Xiamen Fujian 361022，China

R978.7

A

1674-9316（2016）16-0093-03

10.3969/j.issn.1674-9316.2016.16.058

廈門大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部，福建 廈門 361022