范芳芳++張宗豪++徐成體

摘要：室內(nèi)測定了不同濃度S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜不同齡期幼蟲的侵染效果，結(jié)果表明，線蟲侵染劑量、侵染時(shí)間對致死小云斑鰓金龜幼蟲具有重要意義。該線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的感染活性較高，致死時(shí)間主要集中在48 h內(nèi)，當(dāng)線蟲濃度為3 000 IJs/mL時(shí)，線蟲對1齡小云斑鰓金龜幼蟲的致死率可達(dá)92.86%；該線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率較低，當(dāng)線蟲濃度為2 500 IJs/mL時(shí)，致死率僅為40%，當(dāng)線蟲劑量為3 000、3 500 IJs/mL時(shí)，該線蟲對1齡幼蟲的致死率均極顯著高于3齡幼蟲。通過提高線蟲用量、延長致死時(shí)間，在小云斑鰓金龜幼蟲1齡期可達(dá)到預(yù)期的防治效果。

關(guān)鍵詞：線蟲；小云斑鰓金龜；致死率

中圖分類號(hào)： S433.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2015）09-0162-02

蠐螬（Polyphylla gracilicornis）為危害青海省西寧地區(qū)草坪的主要地下害蟲，主要咬食草坪草根部，導(dǎo)致草坪草枯黃，且草坪地下害蟲蠐螬的隱蔽性很強(qiáng)，使用化學(xué)藥劑往往難以取得理想的防治效果，而且容易導(dǎo)致“3R”問題的產(chǎn)生，加上人們對草坪開發(fā)利用強(qiáng)度越來越大，極大地限制了化學(xué)藥劑的使用。西寧地區(qū)蠐螬危害極為嚴(yán)重，最高可達(dá)37頭/m2，主要以小云斑鰓金龜（Polyphylla gracilicornis）幼蟲為主，S. longicaudum X-7線蟲是安全、高效的生物制劑，能專性寄生并快速殺死昆蟲，目前在我國南方地區(qū)已將其成功應(yīng)用于草坪地下害蟲的防治[1-3]。本研究探討S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜幼蟲的致病力，旨在為開發(fā)利用草坪提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1供試線蟲

由廣東省昆蟲研究所提供。

1.2供試害蟲

小云斑鰓金龜幼蟲采集于西寧地區(qū)周邊草坪地，選用蟲齡大小一致的小云斑鰓金龜幼蟲。

1.3供試線蟲的制備與計(jì)量

將貯存S. longicaudum X-7線蟲的海綿塊取出后放入燒杯中，用滅菌水反復(fù)沖洗，得到線蟲稀釋液。用微量取樣器吸取線蟲液25 μL，滴于培養(yǎng)皿上，鏡檢解剖鏡視野內(nèi)的線蟲數(shù)，計(jì)算線蟲濃度。

1.4方法

1.4.1不同侵染劑量對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的毒力測定制備S. longicaudum X-7線蟲梯度濃度溶液，濃度分別設(shè)置為2 000、2 500、3 000、3 500 IJs/mL。

選取蟲齡一致的 1齡幼蟲，使用硬塑料杯，每杯底墊2層中速濾紙，滴加無菌水使濾紙保持濕潤，每孔放入1頭1齡幼蟲，并放入數(shù)塊馬鈴薯，每孔滴加1 mL相應(yīng)濃度S. longicaudum X-7線蟲至蟲體上，每處理 10頭 幼蟲，重復(fù)3次，設(shè)置清水對照。24 h觀察1次，統(tǒng)計(jì)死蟲數(shù)目，及時(shí)補(bǔ)充更換飼料。飼養(yǎng)條件：溫度為（25± 2） ℃，相對濕度為80%～85%，無光照。連續(xù)觀察144 h，記錄幼蟲的死亡數(shù)目。

1.4.2不同侵染劑量對3齡幼蟲的毒力測定制備線蟲梯度濃度液配，濃度設(shè)置為1 000、1 500、2 000、2 500、3 000 IJs/mL。選取蟲齡一致的 3齡幼蟲，使用硬塑料杯，每孔墊2層中速濾紙，滴加無菌水使濾紙保持濕潤，每孔放入1頭3齡幼蟲，并放入數(shù)塊馬鈴薯，每孔滴加1 mL相應(yīng)濃度S. longicaudum X-7 線蟲至蟲體上，每處理 5頭幼蟲，重復(fù)3次，設(shè)置清水對照，及時(shí)補(bǔ)充更換飼料。飼養(yǎng)條件：（25± 2） ℃，相對濕度為80%～85%，無光照。連續(xù)觀察10 d，觀察并記錄幼蟲的死亡數(shù)目。

2結(jié)果與分析

2.1S. longicaudum X-7線蟲不同侵染劑量對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死效果

由表1可知，144 h線蟲劑量為2 000、2 500、3 000、3 500 IJs/mL 時(shí)，S. longicaudum X-7對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的較正死亡率分別為50.00%、53.58%、82.14%、9286%。線蟲劑量為2 000、2 500 IJs/mL時(shí)，線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率差異不顯著；線蟲劑量為 3 000、3 500 IJs/mL時(shí)，S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率差異不顯著，但顯著高于線蟲劑量為2 000、2 500 IJs/mL 時(shí)的致死率。當(dāng)線蟲劑量大于 3 000 IJs/mL 時(shí)，線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲具有很高的致死率。

由圖1可知，24 h線蟲劑量為2 000、2 500、3 000、3 500 IJs/mL 時(shí)，S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率分別為20.69%、27.59%、55.18%、4828%，其中3 000 IJs/mL時(shí)，線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率極顯著高于線蟲劑量為2 000、2 500 IJs/mL時(shí)的致死率。48 h線蟲劑量為2 000、2 500、3 000、3 500 IJs/mL時(shí)，線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率分別為37.93%、41.38%、72.41%、82.76%，其中線蟲劑量為3 000、3 500 IJs/mL 時(shí)的致死率極顯著高于線蟲劑量為2 000、2 500 IJs/mL 時(shí)的致死率。144 h線蟲劑量為2 000、2 500、3 000、3 500 IJs/mL時(shí)，線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率分別為50.00%、53.58%、82.14%、92.59%，其中線蟲劑量為3 000、3 500 IJs/mL時(shí)小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率極顯著高于線蟲劑量為2 000、2 500 IJs/mL時(shí)的致死率?？梢娫诟鱾€(gè)時(shí)間段線蟲濃度大對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死率也較高，線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的致死時(shí)間主要集中在48 h之內(nèi)。

2.2S . longicaudum X-7線蟲不同侵染劑量對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死效果

由表2可知，第10天線蟲劑量為2 000、2 500、3 000、3 500、4 000 IJs/mL時(shí)，S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率分別為26.27%、26.67%、33.33%、40.00%、40.00%。線蟲劑量為3 000、3 500、4 000 IJs/mL時(shí)，線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率顯著高于線蟲劑量為 2 000、2 500 IJs/mL時(shí)線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率，且隨著線蟲濃度的增加，線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率有所提高，直至線蟲濃度為3 500 IJs/mL時(shí)，致死率最高達(dá)40%，線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率不再隨濃度的增加而提高。S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率比較低，即S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的侵染力較低。

由圖2可知，當(dāng)?shù)?天線蟲劑量為1 000、2 000、3 000 IJs/mL 時(shí)，S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率分別為13.33%、26.67%、26.67%，線蟲劑量為2 000、3 000 IJs/mL時(shí)線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率高于線蟲劑量為1 000 IJs/mL時(shí)的致死率，差異不顯著。第6天線蟲劑量為1 000、2 000、3 000 IJs/mL時(shí)，對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率分別為26.67%、33.33%、40.00%，線蟲劑量為3 000 IJs/mL時(shí)，線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率高于線蟲劑量為2 000 IJs/mL時(shí)的致死率，線蟲劑量為2 000 IJs/mL時(shí)線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率高于線蟲劑量為 1 000 IJs/mL 時(shí)的致死率，但差異不顯著。第10天當(dāng)線蟲劑量為1 000、2 000、3 000 IJs/mL時(shí)，線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率分別為26.70%、40.00%、4000%，線蟲劑量為3 000、2 000 IJs/mL 時(shí)線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率極顯著高于線蟲劑量為1 000 IJs/mL時(shí)的致死率。第2—6天，線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率呈緩慢提高趨勢，第6—10天，線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率幾乎不再提高。

2.3S. longicaudum X-7線蟲對不同齡期小云斑鰓金龜幼蟲的侵染效果

由圖3可知，線蟲劑量為2 000 IJs/mL時(shí)，線蟲對小云斑鰓1齡幼蟲、3齡幼蟲的致死率分別為53.33%、26.67%。當(dāng)

線蟲劑量為2 500 IJs/mL時(shí)，S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜1齡、3齡幼蟲的致死率分別為56.67%、26.67%，當(dāng)線蟲劑量為3 000 IJs/mL時(shí)，線蟲對1齡、3齡幼蟲的致死率分別為83.33%、40.00%，其中線蟲對小云斑鰓1齡幼蟲的致死率極顯著高于3齡幼蟲。當(dāng)線蟲劑量為3 500 IJs/mL時(shí)，線蟲對小云斑鰓1齡、3齡幼蟲的致死率分別為93.33%、40.00%，其中線蟲對小云斑鰓1齡幼蟲的致死率極顯著高于3齡幼蟲，可見隨著小云斑鰓金龜幼蟲蟲齡的增長，其抵抗線蟲的能力也在逐漸增強(qiáng)，說明齡期是影響線蟲侵染小云斑鰓金龜幼蟲的重要因素。

3結(jié)論與討論

本研究測定了不同濃度S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜1齡、3齡幼蟲的致死效果，結(jié)果表明，增大線蟲濃度或延長施用時(shí)間對小云斑鰓金龜1齡、3齡幼蟲都會(huì)產(chǎn)生更高的致死率。劉樹森研究表明，不同線蟲品系對不同齡期線蟲具有不同的侵染效果[4]。本研究結(jié)果表明，S. longicaudum X-7線蟲對小云斑鰓金龜1齡幼蟲的侵染率最高可達(dá)92.86%，極顯著高于對3齡幼蟲的侵染率，且線蟲對小云斑鰓1齡幼蟲的致死率主要在48 h內(nèi)，之后致死率變化緩慢。線蟲對小云斑鰓金龜3齡幼蟲的致死率較低，第10天濃度為 3 500 IJs/mL 時(shí)，致死率最高可達(dá)40%，當(dāng)線蟲濃度增大到 4 000 IJs/mL 時(shí)，致死率不再變化，致死效果不明顯，因此選用線蟲防治時(shí)應(yīng)根據(jù)小云斑鰓金龜幼蟲的生物學(xué)特性在1齡期進(jìn)行防治。

參考文獻(xiàn)：

[1]叢斌，劉維志，楊懷文. 昆蟲病原線蟲研究和利用的歷史、現(xiàn)狀與展望[J]. 沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，30（3）：343-353.

[2]Georgis R. Commercialization of Steinernematid and Heterorhabditid entomopathogenic nematodes[J]. Brighton Crop Prot Conf Insectic Fungic，1990，1：275-280.

[3]Zimmerman R J，Cranshaw W S. Compatibility of three entomogenous nematodes（Rhabditida） in aqueous solutions of pesticides used in turfgrass maintenance[J]. J Econ Entomol，1990，83：97-100.

[4]劉樹森. 昆蟲病原線蟲的篩選鑒定及其對蠐螬的致病性研究[D]. 北京：中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院，2009.歐克芳. 再力花葉枯病病原菌鑒定[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（9）：164-165.