相雷雷 宋洋 卞永榮 生弘杰 柳廣霞 蔣新 李國(guó)華 王芳

摘要：建立了土壤中10種多溴聯(lián)苯醚（PBDEs）的加速溶劑萃取固相萃取凈化氣相色譜分析測(cè)定方法。采用加速溶劑萃?。ˋSE）技術(shù)對(duì)土壤中10種PBDEs進(jìn)行提取， 并對(duì)4種萃取體系（正己烷、正己烷丙酮（4∶1， V/V）、正己烷丙酮（1∶1， V/V）、正己烷二氯甲烷（1∶1， V/V））進(jìn)行優(yōu)化；采用固相萃?。⊿PE）技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行凈化， 制備了10種不同填料的SPE柱， 通過(guò)洗脫實(shí)驗(yàn)和加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)對(duì)各SPE柱的凈化性能進(jìn)行對(duì)比篩選。最終優(yōu)化條件為正己烷丙酮（4∶1， V/V）體系提取， 酸性硅膠柱凈化。在優(yōu)化條件下， 10種PBDEs 的回收率為74.4%～125.2%， 相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.4%～14.4%， 方法檢出限為0.04～0.22 ng/mL。本方法簡(jiǎn)單、快速、凈化效果較好、重現(xiàn)性和回收率良好， 可用于土壤樣品中PBDEs的分析。

關(guān)鍵詞 ：土壤；多溴聯(lián)苯醚；加速溶劑萃??；固相萃取凈化；氣相色譜

1 引 言

多溴聯(lián)苯醚（Polybrominated diphenyl ethers， PBDEs）作為一類溴代阻燃劑（BFRs）， 廣泛應(yīng)用于電子、紡織、建材和家具等工業(yè)產(chǎn)品。PBDEs屬于持久性有機(jī)污染物（POPs）， 具有疏水性， 易于在顆粒物和沉積物中吸附[1]。PBDEs在環(huán)境中難降解， 滯留時(shí)間長(zhǎng)。大氣、水體、土壤中的PBDEs可通過(guò)“蚱蜢跳效應(yīng)”廣域遷移， 導(dǎo)致全球污染[2]。毒理學(xué)研究表明， PBDEs在動(dòng)物和人體中會(huì)長(zhǎng)期累積， 并通過(guò)食物鏈和生物放大作用向人體轉(zhuǎn)移， 影響甲狀腺[3～7]、內(nèi)分泌及神經(jīng)[7～9]等系統(tǒng)的正常功能， 同時(shí)可能存在潛在的致癌性[10]。

目前，對(duì)土壤樣品中PBDEs的提取方法有索氏萃取[11～13]、超聲波輔助萃取[14]、微波輔助萃取[13]、加速溶劑萃取等[13～19]。索氏萃取法費(fèi)時(shí)， 且有機(jī)溶劑消耗量大；超聲波和微波萃取法可節(jié)省提取時(shí)間和溶劑， 但提取不完全[11，14]。加速溶劑萃取技術(shù)（Accelerated solvent extraction， ASE）具有操作簡(jiǎn)便、萃取效率高、速度快、有機(jī)溶劑用量少等特點(diǎn)， 是一種省時(shí)、安全、自動(dòng)化的萃取技術(shù)， 廣泛應(yīng)用于土壤中農(nóng)藥殘留[15]、多氯聯(lián)苯[13，16]、多環(huán)芳烴以及多溴聯(lián)苯[12，14，16，19，20]等污染物的分析檢測(cè)。

ASE土壤提取液成分復(fù)雜， 雜質(zhì)較多， 須進(jìn)行凈化處理。本研究將固相萃取技術(shù)（Solid phase extraction， SPE）應(yīng)用于土壤樣品的凈化。SPE樣品前處理技術(shù)具有高效、快速、方便和高選擇性等優(yōu)點(diǎn)， 被廣泛應(yīng)用于環(huán)境樣品分析的前處理過(guò)程中[21～27]。目前， 土壤介質(zhì)中PBDEs的凈化存在過(guò)程復(fù)雜、有機(jī)溶劑用量大、靈敏度低、重現(xiàn)性差等問(wèn)題[14，28，29]。選擇合適的填料是提高除雜效率、獲得良好的回收率及重現(xiàn)性的關(guān)鍵， 因此， 本研究重點(diǎn)優(yōu)化了ASE提取和SPE純化條件， 并結(jié)合氣相色譜電子捕獲法（Gas chromatography with electron capture detector， GCECD）， 建立一種高效、快捷、高靈敏度且具有低檢出限的土壤中PBDEs分析方法。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 實(shí)驗(yàn)試劑

正己烷、二氯甲烷（DCM）、丙酮（色譜純，美國(guó)Merck公司）；硅藻土（100～200目， 德國(guó)Fluka公司）；弗羅里硅土（60～100目， 美國(guó)TEDIA公司）；無(wú)水Na2SO4、Al2O3（100～200目）、硅膠（100～200目）、石英砂、H2SO4（分析純）購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑公司；實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。

PBDEs標(biāo)準(zhǔn)樣品：BDE15， BDE28， BDE47， BDE66， BDE77， BDE99， BDE100， BDE153， BDE154， BDE183， 濃度為1000 ng/mL， 購(gòu)自美國(guó)AccuStandard公司。

2.2 供試土壤

2.3 PBDEs標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及檢出限的確定

采用Agilent 7890A GCECD（美國(guó)Agilent公司）， 對(duì)PBDEs進(jìn)行定性與定量分析。色譜條件：DB5色譜柱（30 m × 0.32 mm × 0.25 μm）， 進(jìn)樣口溫度為265℃， 載氣為高純氮?dú)猓?流量為2 mL/min， 檢測(cè)器溫度為298℃， 進(jìn)樣量為1 μL， 不分流進(jìn)樣。升溫程序：初始溫度140℃， 保持2 min， 5℃/min升至180℃， 保持5 min；5℃/min 升至265℃， 保持5 min；15℃/min升至315℃， 保持10 min。

配制濃度為10， 25， 50， 100， 250和500 ng/mL的PBDEs混標(biāo)溶液， GC測(cè)定。以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)， 峰面積為縱坐標(biāo)， 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。同時(shí)， 以信噪比S/N=3時(shí)對(duì)應(yīng)的濃度作為儀器的方法檢出限。

2.4 固相萃取柱制備及洗脫實(shí)驗(yàn)

選取實(shí)驗(yàn)室常用的硅膠、弗羅里硅土、硅藻土、氧化鋁4種填料， 并通過(guò)濃H2SO4改性制備了酸性硅膠、酸性弗羅里硅土、酸性硅藻土3種改性填料。SPE柱裝填順序（自下而上）為墊片、0.5 g無(wú)水Na2SO4、填料層、1 g無(wú)水Na2SO4及墊片。根據(jù)不同填料的單一及復(fù)配組合， 共制備了10種SPE柱（表2）。

洗脫實(shí)驗(yàn)：用5 mL正己烷活化SPE柱后向柱中加入40 μL 1000 ng/mL PBDEs混合標(biāo)準(zhǔn)溶液， 移取1 mL正己烷進(jìn)行洗脫， 以進(jìn)樣瓶接收洗脫液， 待洗脫液完全過(guò)柱后更換進(jìn)樣瓶。重復(fù)以上操作， 直至洗脫液總體積達(dá)18 mL。洗脫液氮吹定容至0.5 mL， GC測(cè)定。以洗脫體積為橫坐標(biāo)， 總回收率（累積求和）為縱坐標(biāo)， 繪制洗脫曲線。

2.5 PBDEs土壤提取液凈化實(shí)驗(yàn)

土壤中PBDEs提?。簻?zhǔn)確稱取1.00 g供試空白土壤于燒杯中， 加入40 μL 1000 ng/mL PBDEs混標(biāo)溶液， 待溶劑揮發(fā)后加入2 g硅藻土， 攪拌均勻后裝入不銹鋼萃取池， 采用ASE200型加速溶劑萃取儀（美國(guó)DIONEX公司）進(jìn)行提取。萃取儀爐溫為100℃， 壓力為1500 psi， 提取劑為正己烷丙酮（4∶1， V/V）。萃取過(guò)程：加熱5 min， 靜態(tài)萃取5 min， 沖洗體積60%， 氮?dú)獯祾?0 s， 循環(huán)2次。提取液用R210/R215型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（瑞士Buchi公司）濃縮至約1 mL。

PBDEs土壤提取液凈化：選取2.4節(jié)制備的10種SPE柱進(jìn)行實(shí)驗(yàn)， 實(shí)驗(yàn)均設(shè)置6個(gè)平行， 并設(shè)置3個(gè)空白對(duì)照。凈化過(guò)程：5 mL正己烷活化SPE柱后， 將濃縮后的土壤提取液加入柱中， 用正己烷洗脫， 洗脫體積由洗脫曲線確定， 收集全部洗脫液， 濃縮定容至1 mL， GC測(cè)定。

2.6 ASE萃取溶劑優(yōu)化

ASE萃取溶劑直接影響PBDEs的萃取效率及基質(zhì)效應(yīng)。為確定最佳萃取溶劑， 本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)了以下4種萃取體系：正己烷、正己烷DCM（1∶1， V/V）、正己烷丙酮（4∶1， V/V）、正己烷丙酮（4∶1， V/V）進(jìn)行萃取劑優(yōu)化實(shí)驗(yàn)， 采用酸性硅膠柱進(jìn)行凈化， GC測(cè)定（具體步驟參照2.5節(jié)）。

3 結(jié)果與討論

3.1 方法線性關(guān)系和檢出限

由表1可知， 各目標(biāo)化合物在各自濃度范圍內(nèi)（10～500 ng/mL）均呈現(xiàn)出良好的線性關(guān)系， 相關(guān)系數(shù)均大于0.999， 檢出限為0.042～0.22 ng/mL。

3.2 SPE填料選擇和洗脫優(yōu)化

由圖1可知， 硅藻土柱、酸性硅藻土柱、弗羅里硅土柱、硅膠柱和酸性硅膠柱的洗脫趨勢(shì)大體一致， 對(duì)PBDEs的最大洗脫量出現(xiàn)在1～3 mL之間， PBDEs完全洗脫所需體積為5 mL（即洗脫體積， Vmax）；酸性弗羅里硅土柱和氧化鋁硅膠復(fù)合柱洗脫趨勢(shì)大體一致， 最大洗脫量在2～5 mL之間， Vmax為8 mL； 氧化鋁柱、氧化鋁弗羅里硅土復(fù)合柱和氧化鋁酸性硅膠復(fù)合柱的最大洗脫量在5～10 mL之間， Vmax為15 mL；氧化鋁柱和氧化鋁酸性硅膠復(fù)合柱對(duì)PBDEs拖尾現(xiàn)象較明顯。

硅藻土具有良好的微孔結(jié)構(gòu)， 比表面積較大， 吸附能力較強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)表明， 土壤提取液過(guò)硅藻土柱和酸性硅藻土柱后， 溶液顏色仍然較深， 說(shuō)明兩種SPE柱除雜效果較差。由表 2可知， 雜質(zhì)的存在影響了PBDEs的定量分析， 使PBDEs回收率偏高。

弗羅里硅土是一種極性較強(qiáng)的硅鎂型吸附劑， 對(duì)脂肪及類脂類雜質(zhì)有較理想的去除效果， 常用于凈化土壤、植物和動(dòng)物組織樣品的萃取液[20，29，30]。酸性弗羅里硅土極性更強(qiáng)， 同時(shí)， 濃H2SO4的存在可有效去除有色有機(jī)雜質(zhì)。由表2可知， 兩種SPE柱的回收率相對(duì)偏低。

氧化鋁對(duì)目標(biāo)物保留的主要機(jī)理是偶極偶極作用， 可用于除去土壤提取液中極性較強(qiáng)的有機(jī)酸類及其它極性雜質(zhì)。氧化鋁對(duì)PBDEs有一定的保留能力， 這使得PBDEs在氧化鋁柱中出現(xiàn)不同程度的拖尾現(xiàn)象， Vmax為15 mL。隨著洗脫量增加， 雜質(zhì)會(huì)隨洗脫液共流出， 凈化效果變差。為減少氧化鋁的拖尾現(xiàn)象， 本研究制備了氧化鋁硅膠柱、氧化鋁弗羅里硅土柱和氧化鋁酸性硅膠柱。實(shí)驗(yàn)表明， 硅膠、酸性硅膠及弗羅里硅土中加入氧化鋁后， 洗脫速度明顯變慢， 洗脫時(shí)間明顯增加， 有機(jī)溶劑用量增多， 增加了環(huán)境污染。由表2可知， 氧化鋁柱和其它3種氧化鋁復(fù)合柱對(duì)PBDEs回收率在75.3%～110.9%之間。

硅膠表面由于吸水作用形成硅醇基， 合理數(shù)量的硅醇基可以增加硅膠與極性物質(zhì)之間除疏水作用以外的氫鍵作用、離子相互作用和偶極偶極相互作用， 故硅膠表面硅醇基的數(shù)量決定了硅膠的吸附性能[31]。本研究對(duì)所用硅膠先進(jìn)行去活化處理后， 再進(jìn)行定量活化， 這樣制備出的硅膠的表面硅醇基含量均一， 性質(zhì)穩(wěn)定， 保證了實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性。酸改性使得硅膠表面引入了磺酸基， 增加了酸性硅膠對(duì)極性雜質(zhì)吸附作用；同時(shí)濃H2SO4能較好地去除有色有機(jī)雜質(zhì)[32，33]。由表2可知， 酸性硅膠柱與硅膠柱相比回收率更高， 除雜效果更好。由圖1還可知， 濃H2SO4改性的硅膠對(duì)PBDEs的作用機(jī)制及強(qiáng)度并無(wú)明顯變化， 而良好的回收率說(shuō)明濃H2SO4的存在并沒(méi)有使PBDEs發(fā)生氧化降解等現(xiàn)象。

綜上， 對(duì)于土壤提取溶液的凈化， 當(dāng)以正己烷作為洗脫液時(shí)， 酸性硅膠具有洗脫溶劑用量少、價(jià)格低廉、凈化效果好、回收率及重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)， 是一種理想的PBDEs土壤提取溶液SPE凈化的柱填料。

3.3 ASE萃取條件優(yōu)化

由表 3可知， 對(duì)于土壤中PBDEs的提取， 正己烷回收率為87.6%～113.4%， 但提取穩(wěn)定性（RSD=4.1%～9.1%）較正己烷丙酮（4∶1， V/V）體系差一些（RSD=1.7%～4.6%）， 故極性和非極性溶劑的組合提取效果更好。在正己烷中加入極性溶劑（丙酮或二氯甲烷）后， PBDEs的提取效率增加， 而隨著提取體系極性增加， 所得提取溶液顏色越深， 提取出的雜質(zhì)越多， 這增加了凈化過(guò)程的復(fù)雜性， 而未凈化除掉的雜質(zhì)的存在會(huì)影響儀器的定性及定量準(zhǔn)確性。

最終實(shí)驗(yàn)選取正己烷丙酮（4∶1， V/V）作為ASE提取劑， 該提取體系對(duì)PBDEs的平均加標(biāo)回收率為85.4%～103.1%；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.7%～4.6%， 實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性較好；提取液經(jīng)凈化后雜質(zhì)較少， 且不影響定量分析， 可用作加速溶劑萃取土壤中PBDEs的提取劑。

3.4 方法準(zhǔn)確度和精密度

以1.00 g海南磚紅壤作為基質(zhì)， 分別加入濃度相當(dāng)于10、40和100 ng/mL PBDEs進(jìn)行加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)（參照2.5節(jié)）， 每個(gè)濃度重復(fù)6次， 并設(shè)置3個(gè)空白對(duì)照。方法的準(zhǔn)確度和精密度分別通過(guò)加標(biāo)回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表征。由表4可知， 低、中、高 3組（濃度分別為10， 40和100 ng/mL ）的平均加標(biāo)回收率分別為74.4%～115.2%， 87.5%～125.2%， 87.3%～115.9%；相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.4%～14.4%， 5.0%～13.8%， 4.8%～7.1%。

3.5 實(shí)際樣品分析

采用上述優(yōu)化后的方法， 對(duì)采集自某地的土樣進(jìn)行分析。由表5可知， 該地區(qū)存在不同程度的PBDEs污染， ΣPBDEs為5.91～17.69 ng/g， 污染物以中、高溴代PBDEs為主。同時(shí)， 實(shí)際樣品分析結(jié)果說(shuō)明， 優(yōu)化的方法可用于測(cè)定土壤中的PBDEs。

4 結(jié) 論

采用ASE法提取土壤中的PBDEs， 正己烷丙酮（4∶1， V/V）的提取效果最佳；采用酸性硅膠SPE柱對(duì)樣品凈化， PBDEs完全流出僅需5 mL正己烷， 溶劑用量少， 環(huán)境污染小， 洗脫速度快， 雜質(zhì)干擾少。本方法簡(jiǎn)單、快捷， 具有良好的凈化效果、準(zhǔn)確度和精密度（回收率74.4%～125.2%， RSD<15%）， 良好的線性關(guān)系（r>0.999）及較低的檢出限（≤0.22 ng/mL）， 可作為土壤介質(zhì)中PBDEs的有效凈化和檢測(cè)方法。

References

1 Wenlu S， Ford J C， An L， Mills W J， Buckley D R， Rockne K J. Environ. Sci. Technol.， 2004， 38（12）： 3286-3293

2 Gouin T， Harner T. Environ. Int.， 2003， 29（6）： 717-724

3 Brouwer A， Morse D C， Lans M C， Schuur A G， Murk A J， KlassonWehler E， Bergman A， Visser T J. Toxicol. Ind. Health， 1998， 14（12）： 59-84

4 Glinoer D. Endocr. Rev.， 1997， 18（3）： 404-433

5 Eriksson P. Neurotoxicology， 1997， 18（3）： 719-26

6 Costa L G， Giordano G. Neurotoxicology， 2007， 28（6）： 1047-1067

7 Skarman E， Darnerud P O， hrvik H， Oskarsson A. Environ. Toxicol. Pharmacol.， 2005， 19（2）： 273-281

8 Branchi I， Bichler Z， BergerSweeney J， Ricceri L. Neurosci. Biobehav. Rev.， 2003， 27（12）： 141-153

9 Per Ola D， Sofia R. Chemosphere， 2006， 62（3）： 485-493

10 Elliott J E， Wilson L K， Wakeford B. Environ. Sci. Technol.， 2005， 39（15）： 5584-91

11 Pu W， Zhang Q， Wang Y， Wang T， Li X， Lei D. Jiang G. Anal. Chim. Acta， 2010， 663（1）： 43-48

12 LU Min， HAN ShuYuan， YU YingXin， ZHANG DongPing， WU MingHong， SHENG GuoYing， FU JiaMo. Journal of Instrumental Analysis， 2009， 28（1）： 1-6

陸 敏， 韓姝媛， 余應(yīng)新， 張東平， 吳明紅， 盛國(guó)英， 傅家謨. 分析測(cè)試學(xué)報(bào)， 2009， 28（1）： 1-6

13 Abrha Y， Raghavan D. J. Hazard. Mater.， 2000， 80（13）： 147-157

14 JIANG JinHua， CHEN Tao. Chinese J. Anal. Chem.， 2009， 37（11）： 1627-1632

江錦花， 陳 濤. 分析化學(xué)， 2009， 37（11）： 1627-1632

15 Tao S， Guo L Q， Wang X J， Liu W X， Ju T Z， Dawson R， Cao J， Xu F L， Li B G. Sci. Total Environ.， 2004， 320（1）： 1-9

16 Tapie N， Le Menach K， Pasquaud S， Elie P， Devier M H， Budzinski H. Chemosphere， 2011， 83（2）： 175-185

17 Liaud C， Millet M， Le Calvé S. Talanta， 2015， 131： 386-394

18 Yus V， Quintas G， Pardo O， Pastor A， Guardia M D L. Talanta， 2006， 69（4）： 807-815

19 XU NengBin， QIAN FeiZhong， FENG JiaYong， WANG ShengLe， HONG ZhengFang， XU LiHong， CHEN ZhongQuan. Chinese J. Anal. Chem.， 2015， 43（2）： 251-256

徐能斌， 錢(qián)飛中， 馮加永， 汪晟樂(lè)， 洪正昉， 徐立紅， 陳鐘佺. 分析化學(xué)， 2015， 43（2）： 251-256

20 Król S， Zabiegaa B， Namies'nik J. Talanta， 2012， 93： 1-17

21 FernándezPeralbo M， Vera C F， PriegoCapote F， de Castro M L. Talanta， 2014， 126： 170-176

22 Willenberg I， Von Elsner L， Steinberg P， Schebb N H. Food Chem.， 2015， 166： 537-543

23 Liu Y， Nielsen M， Staerk D， Jger A K. J. Ethnopharmacol.， 2014， 155（2）： 1276-1283

24 Rossmann J， Schubert S， Gurke R， Oertel R， Kirch W. J. Chromatogr. B， 2014， 969： 162-170

25 Wang X， Li P. Food Chem.， 2015， 173： 897-904

26 Wiese S， Wubshet S G， Nielsen J， Staerk D. Food Chem.， 2013， 141（4）： 4010-4018

27 Heuett N V， Ramirez C E， Fernandez A， Gardinali P R. Sci. Total Environ.， 2015， 511： 319-330

28 Roszko M， Szymczy K， Jedrzejczak R. Anal. Chim. Acta， 2013， 799（17）： 88-98

29 Sun J， Liu J， Liu Q， Qu G， Ruan T，Jiang G. Talanta， 2012， 88，（1）： 669-676

30 Liu H， Zhang Q， Cai Z， Li A， Wang Y， Jiang G. Anal. Chim. Acta， 2006， 557： 314-320

31 YANG XinLi， WANG JunDe， XIONG BoHui. Chinese Journal of Chromatography， 2000， 4（18）： 308-312

楊新立， 王俊德， 熊博暉. 色譜， 2000， 4（18）： 308-312

32 Manirakiza P， Covaci A， Nizigiymana L， Ntakimazi G， Schepens P. Environ. Pollut.， 2002， 117（3）： 447-455

33 Lino C M， Silveira M I N D. J. Chromatogr. A， 1997， 769（97）： 275-283

Abstract A method was established for the determination of 10 polybrominated diphenyl ethers （PBDEs） in soil using accelerated solvent extraction （ASE）， solid phase extraction （SPE） and gas chromatography with electron capture detector （GCECD）. ASE was used to obtain 10 PBDEs in soil and a good extraction system was investigated by comparison of kinds of extraction systems （nhexane， nhexane∶acetone （4∶1， V/V）， nhexane∶acetone （1∶1， V/V）， and nhexane∶dichloromethane （1∶1， V/V））. Besides， 10 kinds of SPE columns with different filters were applied to the purification of 10 PBDEs in soil solution. The optimized conditions were acquired by using the mixture of nhexane and acetone （4∶1， V/V） as extract and acidic silica gel column for the purification. Under the optimized conditions， the average recoveries of 10 PBDEs in soil ranged from 74.4% to 125.2% with the RSDs of 4.4%-14.4%. Method detection limits （MDLs） were 0.04-0.22 ng/mL. The method is simple， rapid and efficient， which has been successfully applied to determine 10 PBDEs in contaminated soil.

Keywords Soil； Polybrominated diphenyl ethers； Accelerated solvent extraction； Solid phase extraction； Gas chromatography