史兆忠

[摘 要] 本文主要介紹了酶聯(lián)吸附法（ELISA）的原理，并闡述如何將該原理通過(guò)相應(yīng)的技術(shù)運(yùn)用到水產(chǎn)養(yǎng)殖的實(shí)際操作中去，其實(shí)際操作主要有將ELISA用于水產(chǎn)品安全監(jiān)測(cè)、可致病的水產(chǎn)動(dòng)物病原菌檢測(cè)等。

[關(guān)鍵詞] 酶聯(lián)免疫吸附法 水產(chǎn)養(yǎng)殖 實(shí)際應(yīng)用辦法 生物科技

[中圖分類號(hào)] S942 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1003-1650 （2016）04-0290-01

作為現(xiàn)代化的檢測(cè)技術(shù)，酶聯(lián)免疫吸附法即將酶復(fù)合物與抗原（或抗體）有效結(jié)合，通過(guò)顯色變化測(cè)定病原菌。由于抗原（抗體）在結(jié)合到固相載體表面后仍具免疫活性，抗體（抗原）與酶的結(jié)合物仍能保持二者的活性，結(jié)合物與相應(yīng)抗原（抗體）反應(yīng)后所結(jié)合的酶仍能催化底物生成有色物質(zhì)其含量根據(jù)結(jié)合物顏色深淺易于測(cè)定，故而使得ELISA具有選擇性優(yōu)良、高靈敏、數(shù)據(jù)客觀可靠、結(jié)果準(zhǔn)確、實(shí)用性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。

1 酶聯(lián)免疫吸附法

1.1 酶聯(lián)免疫吸附法的測(cè)定原理

酶聯(lián)免疫吸附法基本原理：根據(jù)抗原或抗體具有特異性功能，通常選取可溶性抗原或抗體結(jié)合到固相載體上，一般采用固苯乙烯作為固相載體，此過(guò)程保持抗原抗體具有免疫活性。在固相載體上使抗原或抗體與另外一種酶結(jié)合，成功結(jié)合的產(chǎn)物即具有酶的活性又具有抗原抗體的免疫性。測(cè)定時(shí)，將待測(cè)物于已經(jīng)用酶標(biāo)記好的抗原抗體反應(yīng)，時(shí)間不需要很長(zhǎng)，然后將固相載體上的結(jié)合物洗滌，主要是將待測(cè)物于酶抗原抗體結(jié)合的產(chǎn)物分離出來(lái)。然后加入酶催化，被酶催化生成有色產(chǎn)物，故而可根據(jù)顏色變化情況進(jìn)行分析，由于酶的催化效率很高，因此酶聯(lián)免疫吸附法能夠達(dá)到很高的準(zhǔn)確率。

1.2 酶聯(lián)免疫吸附法的方法及其操作

盡管至今酶聯(lián)免疫吸附法的檢測(cè)方法的分類仍沒(méi)有一個(gè)準(zhǔn)確權(quán)威的定論，但是無(wú)論采用怎樣的形式進(jìn)行檢測(cè)，均需要在試劑的幫助下完成，具體為酶反應(yīng)的底物、免疫吸附劑、被酶標(biāo)記過(guò)的抗體或抗原，其中免疫吸附劑主要是將抗原或抗體與固相載體結(jié)合的產(chǎn)物。在確定檢測(cè)試劑后，依據(jù)檢測(cè)樣本性狀差異，選擇不同的檢測(cè)方式進(jìn)行，目前該種檢測(cè)技術(shù)現(xiàn)存方式較多，其中以下幾點(diǎn)最為常見(jiàn)：其一，雙抗體夾心法。結(jié)合特異性抗體與固相載體，形成固相抗體：洗滌未結(jié)合抗體及雜質(zhì)，用BSA進(jìn)行封閉。洗滌除去多余的BSA，加受檢標(biāo)本，與固相抗體接觸反應(yīng)，形成固相抗原復(fù)合物，而后洗滌除多余雜質(zhì)。最后加酶標(biāo)抗體，使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合并徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體并根據(jù)顏色深淺進(jìn)行定量測(cè)量；其二，雙位點(diǎn)一步法。該種檢測(cè)方法針對(duì)抗原檢測(cè)，依據(jù)抗原分子的決定簇不同，分別對(duì)其單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記，形成霉變抗體與固相抗體，將兩種抗體同步檢測(cè)，通過(guò)將其并作一步完成檢測(cè)操作；其三，間接法測(cè)抗體。該種檢測(cè)方式，主要借助抗原的特異性，通過(guò)固相抗原的形成，去除檢測(cè)物質(zhì)中的雜物，以及沒(méi)有完成結(jié)合的抗原。（4）其余的檢測(cè)方法還有競(jìng)爭(zhēng)法、捕獲法測(cè)IgM抗體。

1.3 酶聯(lián)免疫吸附法的特點(diǎn)

與過(guò)去經(jīng)典的生物化學(xué)檢測(cè)方法相比較，酶聯(lián)免疫吸附法由于其檢測(cè)限可達(dá)ng甚至pg，故而具有靈敏度高的特點(diǎn)；而且，它還具有特異性很強(qiáng)的抗原抗體免疫反應(yīng)，這就使得那些結(jié)構(gòu)類似物、有色或熒光物質(zhì)對(duì)檢測(cè)的干擾會(huì)變得很小，大大提高了結(jié)果的準(zhǔn)確性；最后，本著綠色實(shí)驗(yàn)思想，這種靈敏度高，可以利用低濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和少量的有機(jī)溶劑就能得到精準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的方法，無(wú)疑能夠大大減小試劑對(duì)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)人員的污染和危害。

2 水產(chǎn)養(yǎng)殖中的的酶聯(lián)養(yǎng)殖吸附法應(yīng)用

2.1 致病病原菌的檢測(cè)

近年來(lái)，致病微生物嚴(yán)重影響著水產(chǎn)品養(yǎng)殖行業(yè)的發(fā)展，下面我們就來(lái)說(shuō)一下水產(chǎn)品中致病微生物。水產(chǎn)品的致病微生物無(wú)非分為兩種，一種是自身攜帶細(xì)菌：溶血性弧菌和甲肝等都是水產(chǎn)品中致病微生物導(dǎo)致的。一種是人為污染導(dǎo)致細(xì)菌滋生：通過(guò)人體或動(dòng)物腸道消化產(chǎn)生的糞便排放到水中導(dǎo)致細(xì)菌污染。伴隨生物技術(shù)的不斷完善，水產(chǎn)品致病微生物的檢測(cè)面臨新的發(fā)展機(jī)遇，生物檢測(cè)技術(shù)日益準(zhǔn)確、快捷、操作簡(jiǎn)單，現(xiàn)對(duì)當(dāng)前應(yīng)用較為廣泛的PCR技術(shù)加以分析。

PCR技術(shù)：該技術(shù)三大核心要素是DNA、四種脫氧核糖核苷酸和引物，在DNA聚合酶的作用下，快速?gòu)?fù)制翻譯目標(biāo)DNA，此方法可以在試管中操作，因此操作方便，由于反應(yīng)速度非常快，短時(shí)間內(nèi)就能復(fù)制數(shù)十萬(wàn)想要的目的基因或DNA片段，無(wú)需進(jìn)行DNA克隆就能達(dá)到目的。此項(xiàng)技能已經(jīng)應(yīng)用于生物各個(gè)領(lǐng)域，比如DNA檢測(cè)，基因分離，DNA分析，同樣也應(yīng)用于水產(chǎn)品中致病微生物的檢查

2.2 水產(chǎn)品安全檢測(cè)

我國(guó)采用的ELISA氯霉素試劑盒線形范圍在50ng/kg～1350ng/kg，定量檢測(cè)下限為100ng/kg，而水產(chǎn)品組胺的FDC和EEC最大允許量為100mg/kg～200mg/kg。ELISA法測(cè)定組胺始于1983年，之后方法不斷完善，如Neogen組胺試劑盒，運(yùn)用該試劑盒檢出速度非?？?，35min快速檢測(cè)，且限達(dá)2.5mg/kg，檢測(cè)結(jié)果不受樣品鹽分干擾，且直接用水相進(jìn)行樣品的前處理，避免有機(jī)試劑的污染。

結(jié)語(yǔ)

可見(jiàn)ELIS的應(yīng)用范圍十分廣闊，而其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用的效果尤為突出，它不僅是革新了傳統(tǒng)的方法，也修正了原有檢測(cè)方法耗時(shí)長(zhǎng)、成本高、環(huán)境負(fù)擔(dān)大的問(wèn)題。ELISA操作簡(jiǎn)捷、快速，低污染、高效率，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中大有可施為的地方。

參考文獻(xiàn)

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