王偉 陳旭

【摘要】目的：研究探討HPV16/18型病毒感染與宮頸癌的相互關(guān)系，分析其臨床應(yīng)用價(jià)值。方法：抽取我院2014年9月至2015年9月間收治的經(jīng)病理診斷確診為宮頸癌患者81例作為研究對(duì)象，并選擇同期收治的198例宮頸炎癥患者作為對(duì)照，分別提取兩組患者宮頸分泌物中的DNA樣品，實(shí)施PCR擴(kuò)增，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析對(duì)HPV16/18 DNA載量進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算并比較兩組患者的檢測(cè)陽(yáng)性率。結(jié)果：宮頸癌患者和宮頸炎癥患者的HPV16/18 DNA 載量對(duì)數(shù)值分別為（7.34±4.62）和（4.51±3.03），陽(yáng)性率分別為79.01%和27.27%，均有宮頸癌患者顯著高于宮頸炎癥患者的情況，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。結(jié)論：宮頸癌與HPV感染之間存在顯著相關(guān)性，且高危型HPV16＼＼18感染是病變發(fā)生的必要條件，高病毒載量在宮頸癌的發(fā)展中有重要作用，通過(guò)早期發(fā)現(xiàn)、早期治療，做好對(duì)高危人群的篩查，是宮頸癌的預(yù)防治療的重要途徑。

【關(guān)鍵詞】HPV16/18型病毒感染；宮頸癌；相關(guān)性

宮頸癌是婦科臨床上最為常見(jiàn)、發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，而人乳頭瘤病毒感染與宮頸病變之間息息相關(guān)，作為一種雙鏈DNA病毒，人乳頭瘤病毒能夠?qū)ζつw、粘膜上皮細(xì)胞進(jìn)行感染并誘發(fā)細(xì)胞增生，使其出現(xiàn)乳頭樣病變[1]，人乳頭瘤病毒有不同亞型，有研究認(rèn)為，感染高危型人乳頭瘤病毒容易導(dǎo)致宮頸癌的發(fā)生，HPV16/18 亞型是最常見(jiàn)的高危型人乳頭瘤病毒[2]。本文就我院2014年9月到2015年9月間收治的宮頸癌患者81例作為研究對(duì)象，通過(guò)對(duì)其宮頸分泌物中的HPV16/18 DNA進(jìn)行檢測(cè)，分析其與宮頸癌的相互關(guān)系。具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

抽取我院2014年9月至2015年9月間收治的宮頸癌患者81例作為研究對(duì)象，所有患者均經(jīng)病理診斷確診為宮頸鱗癌?；颊叩哪挲g在22歲～66歲之間，平均年齡為（36.1±3.1）歲。另取同期收治的宮頸炎癥患者198例作為對(duì)照組，患者的年齡在21歲到65歲之間，平均年齡為（37.2±3.5）歲。兩組患者在年齡比較上無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P>0.05，具有可比性。

1.2 方法

分別采集兩組患者的宮頸口分泌物，將其置無(wú)菌試管內(nèi)，并向其中生理鹽水1ml進(jìn)行充分震蕩混合，然后后將液體移至離心管內(nèi)，在12000r/min的速度下進(jìn)行離心分離，10min后獲取底層沉淀物。然后，在沉淀物中加入50μL DNA提取液，充分混勻后，實(shí)施保溫處理，溫度為100℃，10min后再次對(duì)其實(shí)施離心分離，離心時(shí)間為5min，取5μL上清液，即為DNA樣品，用于實(shí)施PCR 反應(yīng)。

將提取到的5μl DNA樣品加入到標(biāo)記好的PCR反應(yīng)管中，加入空白對(duì)照品及陽(yáng)性對(duì)照品各5μl，礦物油1滴，在500r/min的速度下進(jìn)行低速離心，然后再50℃、15min，95℃、10min，94℃、30s、42℃、90s，72℃、30s的條件下充分進(jìn)行反應(yīng)擴(kuò)增，完成40個(gè)循環(huán)。然后給予雜交、孵育等一系列處理后，通過(guò)電腦自動(dòng)計(jì)算對(duì)患者的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，每次實(shí)驗(yàn)均要按照試劑盒提供的定量標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以基因拷貝數(shù)/mL（copies/mL）表示。

其中，HPV檢測(cè)試劑盒由中國(guó)凱普生物科技有限公司提供，檢測(cè)儀器采用ABI7300 型實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析儀。

將實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè)獲得的 HPV16/18 DNA檢測(cè)結(jié)果用對(duì)數(shù)法進(jìn)行表示，分別比較宮頸癌患者和宮頸炎癥患者病毒載量的差異，并計(jì)算其陽(yáng)性率。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 12.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以“n，%”表示，對(duì)比采用卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

分別對(duì)宮頸癌患者和宮頸炎癥患者的HPV16/18 DNA載量與陽(yáng)性率進(jìn)行比較，均有宮頸癌患者顯著高于宮頸炎癥患者的情況，比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。見(jiàn)表1。

3 討論

調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，宮頸癌是發(fā)病率僅次于乳腺癌的第二大的女性惡性腫瘤，是全球性的女性健康問(wèn)題，尤其是在發(fā)展中國(guó)家，宮頸癌的發(fā)病率占到世界患者的75%～80%[3]，不僅以較高速度增長(zhǎng)，而且有發(fā)病年齡年輕化的趨勢(shì)。我國(guó)人口基數(shù)大，每年新發(fā)宮頸癌患者的數(shù)量占世界新發(fā)患者總數(shù)的28%，已經(jīng)對(duì)女性的健康、生命安全產(chǎn)生嚴(yán)重的威脅。同時(shí)，醫(yī)學(xué)研究結(jié)果也證實(shí)，宮頸癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)緩慢的過(guò)程，在宮頸癌患病早期對(duì)其進(jìn)行正確診斷和有效治療，絕大多數(shù)患者可以痊愈，五年生存可以達(dá)到90%[4]。而人乳頭瘤病毒作為已被肯定的腫瘤病毒，在宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展中都發(fā)揮重要作用，樓微華等[5]的研究中對(duì)不同人乳頭瘤病毒高危亞型與宮頸病變發(fā)生的關(guān)系進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)宮頸病變的發(fā)生由高危HPV亞型和低危HPV亞型共同參與，且隨著病情加重，高危HPV亞型所占比例不斷升高[6]，尤其是HPV 16亞型和HPV18亞型，在宮頸癌患者中的檢出率分別達(dá)到68.8%和6.2%，高危型HPV持續(xù)感染也被認(rèn)為是發(fā)生癌變的必要條件。

由于HPV的致癌作用與HPV DNA的整合密切相關(guān)，HPV16、18兩種高危亞型的DNA均表現(xiàn)為整合形式，E2、E6、E7分別是發(fā)揮致癌作用的主要基因，其中，E2蛋白通過(guò)對(duì)病毒mRNA的轉(zhuǎn)錄、DNA的復(fù)制進(jìn)行調(diào)節(jié)發(fā)揮致癌作用，同時(shí)對(duì)E6、E7的轉(zhuǎn)化作用進(jìn)行調(diào)節(jié)[7]，而致癌基因E6、E7則可以同時(shí)發(fā)揮細(xì)胞直接轉(zhuǎn)化作用、宿主細(xì)胞DNA感染作用以及降低p53抑癌基因的作用，其在與細(xì)胞周期調(diào)控蛋白進(jìn)行相互作用的過(guò)程中，對(duì)正常細(xì)胞周期調(diào)控造成干擾，引起癌細(xì)胞無(wú)限制生長(zhǎng)引起癌變。

本文分別對(duì)病理診斷確診為宮頸癌和宮頸炎癥患者的HPV16/18型病毒感染的情況進(jìn)行了分析，通過(guò)對(duì)兩組患者宮頸分泌物中的DNA的提取、擴(kuò)增和檢測(cè)，獲得了其HPV16/18 DNA載量，發(fā)現(xiàn)宮頸癌患者的HPV16/18 DNA載量（7.34±4.62）顯著高于宮頸炎癥患者（4.51±3.03），而對(duì)其檢測(cè)陽(yáng)性率進(jìn)行比較，也有相同的規(guī)律，無(wú)論是HPV16型、HPV18型還是總的檢測(cè)陽(yáng)性率都是如此（以HPV16型為主），這與于宗霞[8]的研究結(jié)果一致，提示持續(xù)的HPV16、HPV18型病毒感染是CIN轉(zhuǎn)變?yōu)閷m頸癌的誘因，且高病毒載量在宮頸癌的發(fā)展中有重要作用，通過(guò)早期發(fā)現(xiàn)、早期治療，做好對(duì)高危人群的篩查，對(duì)于宮頸癌的預(yù)防治療都有重要意義。

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