尹柏雙　王秋竹　付連軍

摘要：選取18頭患不同程度隱性乳房炎奶牛和6頭健康奶牛為試驗(yàn)動(dòng)物，采集乳汁，分離乳清，利用比色法檢測(cè)乳清中LDH、NAG活性，研究奶牛隱性乳房炎發(fā)病與乳清中LDH、NAG活性的關(guān)系。結(jié)果表明，隨著隱性乳房炎病情加重，乳清中LDH、NAG活性呈升高的趨勢(shì)。乳清中LDH、NAG活性與奶牛隱性乳房炎發(fā)病嚴(yán)重程度呈正相關(guān)性，隨著體細(xì)胞數(shù)增加和乳腺炎癥的加劇，乳清中LDH、NAG活性隨之升高。

關(guān)鍵詞：奶牛；隱性乳房炎；乳清；乳酸脫氫酶

中圖分類(lèi)號(hào)： S858.23 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2016）07-0276-02

奶牛乳房炎是危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)最嚴(yán)重的疾病之一，其中隱性乳房炎發(fā)生率最高。隱性乳房炎可引起泌乳奶牛產(chǎn)奶量下降、牛奶品質(zhì)降低、養(yǎng)殖成本增加、產(chǎn)后發(fā)情延長(zhǎng)、妊娠時(shí)間推遲，給奶牛養(yǎng)殖業(yè)帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失[1]。乳酸脫氫酶（LDH）和N-乙酰基-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）廣泛存在于動(dòng)物組織及體液中，白細(xì)胞和乳腺上皮細(xì)胞損傷會(huì)引起乳中LDH活性改變[2]，炎癥時(shí)白細(xì)胞釋放NAG，病原菌破壞乳腺組織也可使NAG釋放[3]。研究表明，奶牛乳房炎發(fā)病時(shí)引起乳汁體細(xì)胞數(shù)（SCC）增加，SCC作為監(jiān)測(cè)奶牛乳房炎發(fā)病情況的可靠指標(biāo)[4]，奶牛隱性乳房炎發(fā)病與乳中LDH、NAG酶活性相關(guān)，乳中SCC變化與乳酶活性呈正相關(guān)[5-6]。本研究探討不同發(fā)病階段的奶牛隱性乳房炎與乳汁中LDH、NAG酶活性的關(guān)系，旨在為該病的臨床診斷提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

乳汁體細(xì)胞計(jì)數(shù)監(jiān)測(cè)后選擇年齡、胎次、產(chǎn)奶量、泌乳期等指標(biāo)相近的6頭健康奶牛和18頭患不同程度奶牛隱性乳房炎奶牛，由吉林市某奶牛場(chǎng)提供。

1.2 主要試劑與儀器

LDH檢測(cè)試劑盒、NAG檢測(cè)試劑盒（南京建成生物工程研究所）；Fossmatic 5000體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（丹麥FOSS 公司）；Varioskan 酶標(biāo)儀（美國(guó)Thermo 公司）；離心機(jī)（美國(guó)Sigma公司）。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物分組

乳汁體細(xì)胞計(jì)數(shù)監(jiān)測(cè)后將試驗(yàn)?zāi)膛７殖山】祵?duì)照組（6頭，SCC≤10×104個(gè)/mL）、輕度隱性乳房炎組（6頭，50×104個(gè)/mL500×104個(gè)/mL）。

1.4 乳樣采集

采集試驗(yàn)?zāi)膛５娜橹?，采樣前?duì)乳區(qū)進(jìn)行清洗，用75%乙醇消毒乳區(qū)，棄掉頭3 把乳汁，分別采乳10 mL裝入無(wú)菌試管中，將乳樣放入冰盒中，帶回實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。

1.5 乳清制備

將采集的乳樣3 000 r/min離心5 min，除去上層乳脂，于16 000 r/min高速離心機(jī)中離心10 min，去除沉淀，保留上清，4 ℃保存，待測(cè)。

1.6 檢測(cè)方法

采用體細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定乳汁體細(xì)胞數(shù)，采用LDH試劑盒測(cè)定LDH活性，采用NAG試劑盒測(cè)定NAG活性，在酶標(biāo)儀上440 nm處比色測(cè)定D值，根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)計(jì)算酶活性。

1.7 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素方差分析，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 奶牛乳清中LDH活性變化

如表1所示，患輕度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中LDH活性為（184.15±13.27）U/L，與對(duì)照組差異極顯著；患中度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中LDH活性為（359.79±19.49）U/L，與對(duì)照組差異極顯著；患重度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中LDH活性為（829.63±21.48）U/L，與對(duì)照組差異極顯著。隨著奶牛隱性乳房炎病情加重，乳清中LDH活性呈升高的趨勢(shì)。

2.2 奶牛乳清中NAG活性變化

如表2所示，患輕度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中NAG活性為（42.44±8.55）U/L，與對(duì)照組差異顯著；患中度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中NAG活性為（62.93±13.45）U/L，與對(duì)照組差異極顯著；患重度奶牛隱性乳房炎奶牛乳清中NAG活性為（91.61±15.96）U/L，與對(duì)照組差異極顯著。隨著奶牛隱性乳房炎病情加重，乳清中NAG活性呈升高的趨勢(shì)。

3 結(jié)論與討論

3.1 奶牛隱性乳房炎與乳清中LDH相關(guān)性

LDH是由H和M亞基聚合成5種不同形式的四聚體，廣泛存在于動(dòng)物組織和體液中。研究表明，LDH活性與奶牛隱性乳房炎發(fā)病存在一定的聯(lián)系[7]。Babaei等報(bào)道，患隱性乳房炎奶牛乳區(qū)乳汁中LDH活性顯著高于正常乳區(qū)[5]。Hortet等報(bào)道，疾病導(dǎo)致乳腺功能的改變引起乳汁中LDH活性發(fā)生相應(yīng)變化[8]。牛乳中LDH活性可作為監(jiān)測(cè)隱性乳房炎的指標(biāo)之一[9]。在隱性乳房炎發(fā)病過(guò)程中，LDH起著非常重要作用，可作為診斷隱性乳房炎和乳腺損害的重要指標(biāo)之一。研究表明，乳房炎發(fā)病引起乳汁中LDH變化的主要原因是由于乳腺上皮細(xì)胞的破壞、炎癥過(guò)程引起白細(xì)胞大量聚集，使損害的上皮細(xì)胞和大量的乳汁細(xì)胞釋放LDH增多[10]。乳汁中LDH活性的增加量可以反映乳腺組織的損害程度[11]。本研究結(jié)果表明，奶牛隱性乳房炎發(fā)病引起乳汁中LDH活性升高，隨著乳房炎病情的加重，乳汁中LDH活性呈逐漸升高趨勢(shì)，LDH活性與乳腺損傷程度呈正相關(guān)。

3.2 奶牛隱性乳房炎與乳清中NAG相關(guān)性

NAG是一種溶菌酶，可作為乳腺上皮細(xì)胞破壞的標(biāo)志[12]。乳房炎發(fā)病與NAG關(guān)系密切，乳房炎發(fā)生時(shí)血清中NAG活性明顯升高，該酶可用作奶牛隱性乳房炎的診斷指標(biāo)之一，對(duì)于隱性乳房炎的早期診斷具有重要意義[6]。研究發(fā)現(xiàn)，NAG在隱性乳房炎奶牛乳中NAG活性會(huì)增加，且與白細(xì)胞的增加有關(guān)[13-14]。NAG活性變化不僅與體細(xì)胞數(shù)量相關(guān)，且與不同細(xì)菌感染也有相關(guān)性[15]。葡萄球菌、鏈球菌、大腸桿菌感染時(shí)，NAG活性與體細(xì)胞數(shù)相關(guān)系數(shù)較高[16-17]。本研究結(jié)果表明，奶牛隱性乳房炎發(fā)病引起乳汁中NAG活性升高，隨著乳房炎病情的加重，乳汁中NAG活性呈逐漸升高的趨勢(shì)?；茧[性乳房炎奶牛乳清中LDH、NAG活性與奶牛隱性乳房炎發(fā)病程度呈正相關(guān)性，隨著體細(xì)胞數(shù)增加和乳腺炎癥的加劇，乳清中LDH、NAG活性隨之升高。

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