宋莉，倪世峰，李亞君，王春俠

（1.江蘇省徐州醫(yī)藥高等職業(yè)學(xué)校，江蘇徐州221116；2.徐州市工會(huì)干部學(xué)校，江蘇徐州221000）

夏枯草不同溶劑提取物抗氧化活性研究

宋莉1，倪世峰2，*，李亞君1，王春俠1

（1.江蘇省徐州醫(yī)藥高等職業(yè)學(xué)校，江蘇徐州221116；2.徐州市工會(huì)干部學(xué)校，江蘇徐州221000）

比較夏枯草不同溶劑提取物的抗氧化活性。分別以蒸餾水、70%乙醇、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯、正丁醇為溶劑制備夏枯草提取物，以VC為陽(yáng)性對(duì)照考察各溶劑提取物的抗氧化活性；結(jié)果表明夏枯草不同溶劑提取物均具有抗氧化活性，70%乙醇提取物具有較高的DPPH·、·OH清除活性和脂質(zhì)體過(guò)氧化抑制活性，蒸餾水提取物O2-·清除活性最高?？偡雍颗c提取物DPPH·清除活性、·OH清除活性、O2-·清除活性、脂質(zhì)體過(guò)氧化抑制活性相關(guān)性較高，黃酮含量與DPPH·清除活性相關(guān)性較高。夏枯草70%乙醇提取物和蒸餾水提取物抗氧化活性相對(duì)較高。

夏枯草；抗氧化活性；多糖；總酚；黃酮

夏枯草有降血壓、增強(qiáng)免疫力等多種功效［1］，在我國(guó)有悠久的藥用和食用歷史。自由基是一類具有氧化活性的分子或原子，與機(jī)體許多疾病的發(fā)生密切相關(guān)［2］。由于一些合成抗氧化劑存在不同程度的毒副作用，從植物中提取的天然抗氧化劑以其安全、無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn)正成為研究熱點(diǎn)，越來(lái)越受到歡迎。目前夏枯草抗氧化活性的研究主要集中在單一成分，整體活性研究相對(duì)缺乏，因此本研究考察夏枯草不同溶劑提取物的體外抗氧化能力，旨在為夏枯草在食品領(lǐng)域的應(yīng)用提供試驗(yàn)支持。

1　材料與方法

1.1材料、試劑與儀器

夏枯草：購(gòu)于安國(guó)中藥材市場(chǎng)。

沒食子酸（批號(hào)為110831-201403）：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)為100080-201408）：中國(guó)藥品生物制品檢定所；Folin-Ciocalteu試劑（分析純）：Sigma公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH，分析純）：Sigma公司；其余試劑均為市售分析純。

DGX-92438-2型干燥箱：上海?，攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；分析天平：METTLER TOLEDO；RE52CS-1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海亞榮生化儀器廠；FD-1B-50冷凍干燥機(jī)：北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；752PC型紫外可見分光光度計(jì)：上海光譜儀器有限公司。

1.2方法

1.2.1夏枯草不同溶劑提取物制備

將夏枯草55℃干燥，粉碎過(guò)20目篩，按料液比1∶30（g/mL）分別加入不同提取溶劑（蒸餾水、70%乙醇、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯、正丁醇），回流提取1 h，提取2次，抽濾，合并濾液并濃縮，冷凍干燥得提取物。

1.2.2多糖含量測(cè)定

參考《中國(guó)藥典2015版》測(cè)定提取物中多糖含量。葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=6.5x+0.03，R2=0.996 1。

圖1　葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1The standard curve of glucose

1.2.3總酚含量測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密稱取12.5 mg沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品于5 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并定容，吸取0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于EP管中，用50%甲醇補(bǔ)至1.0 mL。分別吸取上述溶液各0.2 mL，加入2.0 mL 50%Folin-Ciocalteu試劑、4.0 mL 0.2 g/L NaCO3溶液，用蒸餾水定容至10.0mL，混勻，40℃水浴2h，于760nm處測(cè)定吸光值。以吸光值為橫坐標(biāo)，沒食子酸濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線［3］。沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y= 0.169 2x+0.004 6，R2=0.993 9。

圖2　沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.2The standard curve of gallic acid

樣品測(cè)定：以0.2 mL樣品溶液代替沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定樣品中總酚含量。

1.2.4黃酮含量測(cè)定

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：精密稱取5mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，吸取0.0、0.5、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL于10 mL容量瓶中，加入10%AlCl30.4 mL，搖勻，加入4%NaOH溶液4.0 mL，蒸餾水定容，搖勻放置15 min，以蒸餾水為空白對(duì)照，于510 nm處測(cè)定吸光值。以吸光值為橫坐標(biāo)，蘆丁濃度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線［4-5］。蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=10.571x-0.004 3，R2=0.998。

圖3　蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.3The standard curve of rutin

樣品測(cè)定：以1.0 mL樣品溶液代替蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)定樣品中黃酮含量。

1.2.5抗氧化活性測(cè)定

1.2.5.1DPPH·清除能力測(cè)定

將提取物配制成濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mg/mL的溶液，作為待測(cè)樣品備用，按文獻(xiàn)［6］方法測(cè)定DPPH·清除能力。

1.2.5.2·OH清除能力的測(cè)定

將夏枯草提取物配制成濃度分別為0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3、1.5 mg/mL的溶液，作為待測(cè)樣品備用，按文獻(xiàn)［7］方法測(cè)定·OH清除能力。

1.2.5.3O2-·清除能力的測(cè)定

將夏枯草提取物配制成濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mg/mL的溶液，作為待測(cè)樣品備用，按文獻(xiàn)［8］方法測(cè)定O2-·清除能力。

1.2.5.4抑制脂質(zhì)體過(guò)氧化能力的測(cè)定

將夏枯草提取物配制成濃度分別為5、10、15、20、25、30、35、40 mg/L的溶液，作為待測(cè)樣品備用，按文獻(xiàn)［9］方法測(cè)定脂質(zhì)體過(guò)氧化抑制能力。

2　結(jié)果與分析

2.1夏枯草固形物得率以及提取物中多糖、總酚和黃酮含量

不同溶劑提取物得率以及提取物中多糖、總酚和黃酮含量測(cè)定結(jié)果見表1。

表1　夏枯草固形物得率以及提取物中多糖、總酚和黃酮含量（±sD）Table 1The solid recovery，polysaccharide，total phenols and flavonoids contents of different extracts from Prunella vulgaris Linn.

表1　夏枯草固形物得率以及提取物中多糖、總酚和黃酮含量（±sD）Table 1The solid recovery，polysaccharide，total phenols and flavonoids contents of different extracts from Prunella vulgaris Linn.

注：同一列字母不同表示差異顯著（P＜0.05）；“-”表示未檢測(cè)到該成分。

溶劑固形物/%多糖/（mg/g）總酚/（mg/g）黃酮/（mg/g）蒸餾水17.52±1.43a42.37±2.36a121.36±2.14b10.31±0.07b70%乙醇14.54±0.98b5.473±0.33b134.29±3.14a14.46±0.16a無(wú)水乙醇13.23±1.13bc-88.14±1.39d4.73±0.10e乙酸乙酯15.33±0.68ab-102.34±2.17c9.13±0.07c正丁醇11.14±0.83c-72.38±2.30e7.39±0.09d

結(jié)果表明，夏枯草提取物中固形物、多糖、總酚和黃酮含量隨提取溶劑不同而不同。以水為提取溶劑時(shí)固形物得率最高、提取物中多糖含量最高，以70%乙醇為提取溶劑時(shí)提取物中總酚和黃酮含量最高。

2.2夏枯草不同溶劑提取物DPPH·清除活性

夏枯草不同溶劑提取物DPPH·清除活性見圖4。

圖4　夏枯草不同溶劑提取物的DPPH·清除活性Fig.4Comparison of the DPPH·scavenging activities of Prunella vulgaris Linn.extracts with different solvents

由圖4可知，夏枯草不同溶劑提取物均具有DPPH·清除活性，在0.1 mg/mL～0.8 mg/mL濃度范圍內(nèi)，DPPH·清除率隨提取物濃度的增加先逐漸升高后變化不再明顯，且70%乙醇提取物活性最高，當(dāng)濃度為0.8 mg/mL時(shí)，清除率為69.94%。蒸餾水提取物與VC效果相當(dāng)，其次是乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、無(wú)水乙醇提取物。

2.3夏枯草不同溶劑提取物·OH清除活性

夏枯草不同溶劑提取物·OH清除活性見圖5。

圖5　夏枯草不同溶劑提取物的·OH清除活性Fig.5Comparison of the·OH scavenging activities of Prunella vulgaris Linn.extracts with different solvents

由圖5可知，夏枯草不同溶劑提取物均具有·OH清除活性，在0.2 mg/mL～1.6 mg/mL濃度范圍內(nèi)，清除率隨提取物濃度的增加先逐漸升高后變化不再明顯，當(dāng)濃度達(dá)到1.1 mg/mL時(shí)，5種不同溶劑提取物中70%乙醇提取物活性最高，當(dāng)濃度為1.5 mg/mL時(shí)，·OH清除率為78.64%。蒸餾水提取物與70%乙醇提取物效果相當(dāng)，其次是乙酸乙酯提取物、無(wú)水乙醇提取物、正丁醇提取物。

2.4夏枯草不同溶劑提取物O2-·清除活性

夏枯草不同溶劑提取物O2-·清除活性見圖6。

由圖6可知，不同溶劑提取物均具有O2-·清除活性，在0.2 mg/mL～0.8 mg/mL濃度范圍內(nèi)，O2-·清除率隨提取物濃度的增加而升高后變化不再明顯，當(dāng)濃度達(dá)到0.6 mg/mL時(shí)，蒸餾水提取物活性最高，濃度為0.8 mg/mL時(shí)O2-·清除率為75.22%，高于相同濃度的VC，70%乙醇提取物活性與VC相當(dāng)，其次是乙酸乙酯提取物、無(wú)水乙醇提取物，正丁醇提取物清除率最低。

圖6　夏枯草不同溶劑提取物的O2-·清除活性Fig.6Comparison of the O2-·scavenging activities of Prunella vulgaris Linn.extracts with different solvents

2.5夏枯草不同溶劑提取物脂質(zhì)體過(guò)氧化抑制率

夏枯草不同溶劑提取物脂質(zhì)體過(guò)氧化抑制率見圖7。

圖7　夏枯草不同溶劑提取物的脂質(zhì)體過(guò)氧化抑制活性Fig.7Comparison of the the ability of restraining liposome oxidation of Prunella vulgaris Linn.extracts with different solvents

由圖7可知，不同溶劑提取物均對(duì)脂質(zhì)體過(guò)氧化有一定的抑制作用，在5mg/L～40 mg/L濃度范圍內(nèi)，抑制率隨濃度的增大而升高后變化不再明顯。當(dāng)濃度達(dá)到20 mg/L時(shí)，5種不同溶劑提取物中70%乙醇提取物活性最高，濃度為40 mg/L時(shí)，抑制率為71.27%，與VC效果接近。其次是蒸餾水提取物活性較高，乙酸乙酯提取物與無(wú)水乙醇提取物效果相當(dāng)，正丁醇提取物活性較差。

2.6夏枯草不同溶劑提取物中總酚、黃酮含量與抗氧化活性的相關(guān)性

夏枯草不同溶劑提取物中總酚、黃酮含量與抗氧化活性的相關(guān)性如表2所示。

由表2可知，提取物中總酚含量與提取物DPPH·、·OH、O2-·清除活性、脂質(zhì)體過(guò)氧化抑制活性相關(guān)性較高，黃酮含量與DPPH·清除活性相關(guān)性較高。

表2　提取物中總酚、黃酮含量與抗氧化活性的相關(guān)性Table 2The correlation between content of the polysaccharide，total phenols and flavonoids and the activity of different extracts from Prunella vulgaris Linn.

3　結(jié)論

夏枯草具有重要的藥用價(jià)值和廣泛的藥理作用，其蒸餾水、70%乙醇、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯、正丁醇提取物均具有一定的抗氧化活性。70%乙醇提取物具有相對(duì)較高的DPPH·、·OH清除活性和脂質(zhì)體過(guò)氧化抑制活性，蒸餾水提取物O2-·清除活性最高。

不同溶劑提取物的抗氧化活性在一定范圍內(nèi)都呈現(xiàn)出一定量效關(guān)系，即提取物濃度越大，抗氧化活性越高。總酚含量與提取物DPPH·、OH·、O2-清除活性、脂質(zhì)體過(guò)氧化抑制活性相關(guān)性較高，黃酮含量與DPPH·清除活性相關(guān)性較高，本研究為夏枯草資源的開發(fā)利用提供了一定試驗(yàn)支持。

［1］張霞，聶少平，李景恩.夏枯草中多糖的提取與含量的測(cè)定［J］.食品研究與開發(fā)，2012，33（12）：81-84

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［3］孫海燕.紫薯多酚類物質(zhì)的提取及抗氧化研究［J］.食品研究與開發(fā)，2015，36（23）：21-24

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Study on Antioxidant Activity of Different Solvents Extracts of Prunella vulgaris Linn.

SONG Li1，NI Shi-feng2，*，LI Ya-jun1，WANG Chun-xia1
（1.Jiangsu Provincal Xuzhou Pharmaceutical Vocational College，Xuzhou 221116，Jiangsu，China；2.Xuzhou Trade Union Cadre School，Xuzhou 221000，Jiangsu，China）

The objective of this study was to explore the antioxidant activities of different solvent extracts of Prunella vulgaris Linn..The Prunella vulgaris Linn.were extracted with distilled water，70%ethanol，ethanol，ethyl acetate and n-butanol，the antioxidant activity was investigated with VCas positive control.All the five extracts exhibited antioxidant capacities.The extracts that extracted by 70%ethanol showed strong DPPH·，·OH clearing capacity and lipid peroxidation inhibiting，The extracts that extracted by distilled water showed higher O2-·clearing capacity.The content of total phenolics had a highly significant correlation with the DPPH·，·OH，O2-·clearance rate and lipid peroxidation inhibiting activity，the content of flavonoids had a highly significant correlation with the O2-·clearance rate.The extracts that extracted by 70%ethanol and distilled water had realitively higher antioxidant activity.

PrunellavulgarisLinn.；antioxidantactivity；polysaccharide；totalphenolics；flavonoids

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.17.008

2016-03-09

宋莉（1982—），女（漢），講師，學(xué)士，研究方向：天然藥物、生物藥物。