張倩

（國(guó)家酒類及飲料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，貴州貴陽(yáng)550016）

氣相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定白酒中揮發(fā)性酚類物質(zhì)

張倩

（國(guó)家酒類及飲料產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心，貴州貴陽(yáng)550016）

用液液萃取作為前處理方法，建立氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定白酒中10種揮發(fā)性酚類物質(zhì)含量的方法。該方法檢測(cè)得出的質(zhì)譜圖在譜庫(kù)進(jìn)行檢索，準(zhǔn)確地對(duì)10種揮發(fā)性酚類物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析。加標(biāo)回收率為83.9%～101.2%，RSD值為1.1%～2.9%。定性、定量準(zhǔn)確度較高，重復(fù)性好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法適用于白酒中揮發(fā)性酚類化合物的研究。

白酒；揮發(fā)性酚；GC-MS

揮發(fā)性酚類物質(zhì)是白酒中的重要香味物質(zhì)，這一類物質(zhì)對(duì)于酒的聞香、口味以及穩(wěn)定性等方面均具有重要的作用。揮發(fā)性酚類物質(zhì)在白酒中的形成途徑可能是發(fā)酵原料中的木質(zhì)素降解或一些氨基酸在微生物作用下產(chǎn)生［1-2］。這類化合物在閾值范圍內(nèi)都具有特殊的香氣，如甲基苯酚（4-MP）具有類似動(dòng)物臭或酚類的香氣特征，4-乙基苯酚（4-EP）和4-乙基愈創(chuàng)木酚（4-EG）風(fēng)味特征分別為煙熏和丁香氣味［3］。因此，對(duì)白酒中揮發(fā)性酚類物質(zhì)的準(zhǔn)確定性與定量就顯得特別重要。

目前，測(cè)定飲料酒中揮發(fā)性酚類物質(zhì)的方法主要是由各種樣品前處理過(guò)程結(jié)合氣相色譜［4-8］或液相色譜［9-11］的分析測(cè)定方法。關(guān)于我國(guó)飲料酒中揮發(fā)性酚類物質(zhì)的分析方法較少。1980年，中國(guó)輕工業(yè)部食品發(fā)酵研究所，采用化學(xué)衍生法結(jié)合氣相色譜-火焰離子化檢測(cè)器/氣相色譜-質(zhì)譜法對(duì)白酒中揮發(fā)性酚類化合物進(jìn)行分析，但該法需要硅烷化衍生，操作繁瑣，樣品前處理時(shí)間長(zhǎng)，重復(fù)性差，回收率不高。朱燕等［15］應(yīng)用浸入固相微萃取與GC-MS技術(shù)，對(duì)白酒中7種揮發(fā)性酚類化合物進(jìn)行了分析，該方法的回收率達(dá)到了85%～115%。但是采用浸入式固相微萃?。―I-SPME）前處理技術(shù)，需要特殊的進(jìn)樣設(shè)備，推廣普及和應(yīng)用會(huì)受到限制。

本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用較為簡(jiǎn)單且常用的液液萃取方法作為前處理，建立同時(shí)測(cè)定白酒中10種揮發(fā)性酚類物質(zhì)的方法，并對(duì)兩個(gè)典型白酒樣品進(jìn)行含量分析檢測(cè)。

1　材料與方法

1.1材料與儀器

酒樣：2個(gè)典型白酒樣品。

標(biāo)準(zhǔn)品及試劑：愈創(chuàng)木酚、4-乙烯基愈創(chuàng)木酚、4-乙烯基苯酚、4-甲基愈創(chuàng)木酚、4-乙基愈創(chuàng)木酚、4-乙基苯酚、鄰甲酚、對(duì)甲酚、間甲酚、苯酚、二氯甲烷、無(wú)水乙醇（色譜純）。

檢測(cè)儀器及器皿：Agilent 5957 B氣質(zhì)聯(lián)用儀；Mttler AE200電子分析天平（感量：0.1 mg）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器）；250 mL分液漏斗。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1前處理方法

取100 mL酒樣于250 mL分液漏斗中，用二氯甲烷（20 mL/次×3次）萃取，收集合并有機(jī)相。將有機(jī)相用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀以35℃減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至近40 mL，轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，冷卻后用二氯甲烷定容至刻度。取少量該溶液用無(wú)水硫酸鈉干燥后裝入進(jìn)樣小瓶，待測(cè)。1.2.2儀器條件

色譜柱：HP-INNOWAX石英毛細(xì)管柱（60m×0.25mm× 0.25 μm）。

氣相條件：起始柱溫40℃保持2 min，以4℃/min升至230℃，保持10 min；載氣為高純氦氣（純度為99.999%），恒定流量1.0 mL/min；汽化室溫度250℃；輔助通道溫度280℃；進(jìn)樣量1 μL；不分流。

質(zhì)譜條件：電離方式EI；電子能量70 eV；離子源溫度230℃；四級(jí)桿溫度150℃；溶劑延遲15 min；全掃描模式掃描質(zhì)量范圍為30～450 aum；選擇離子檢測(cè)模式參數(shù)見(jiàn)表1。

表1　選擇離子檢測(cè)模式條件

2　結(jié)果與分析

2.1全掃描模式定性分析

配制混合標(biāo)液：分別稱取0.10 g愈創(chuàng)木酚、4-乙烯基愈創(chuàng)木酚、4-乙烯基苯酚、4-甲基愈創(chuàng)木酚、4-乙基愈創(chuàng)木酚、4-乙基苯酚、鄰甲酚、對(duì)甲酚、間甲酚、苯酚，用色譜純的無(wú)水乙醇定容至100 mL，即得1 mg/mL的單一標(biāo)液。分別取上述各標(biāo)液1 mL于100 mL容量瓶中，用色譜純的無(wú)水乙醇定容至刻度，即得10 μg/mL的混合標(biāo)液。

用上述10 μg/mL的混合標(biāo)液在1.2.2的儀器條件下采用全掃描模式，所得總離子流圖見(jiàn)圖1。所得質(zhì)譜圖用NIST譜庫(kù)進(jìn)行檢索，與譜庫(kù)提供的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖進(jìn)行對(duì)照，根據(jù)匹配度進(jìn)行定性分析，檢索結(jié)果匹配度見(jiàn)表2。

2.2選擇離子檢測(cè)模式定量分析

取2.1中10 μg/mL的混合標(biāo)液稀釋至1 μg/mL，用1.2.2儀器條件和表2的選擇離子檢測(cè)模式進(jìn)樣，所得圖譜見(jiàn)圖2，建立定量校正表。

選取2個(gè)典型酒樣，用1.2.1前處理方法進(jìn)行前處理后用1.2.2儀器條件和表2的選擇離子檢測(cè)模式進(jìn)樣，所得圖譜見(jiàn)圖3，分別計(jì)算得10種揮發(fā)性酚類含量見(jiàn)表3。

圖1　10 μg/mL的混合標(biāo)液全掃描總離子流圖

表2　質(zhì)譜圖檢索結(jié)果

圖2　1 μg/mL混合標(biāo)液選擇離子檢測(cè)模式總離子流圖

2.3加標(biāo)回收及重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

配制加標(biāo)酒樣，使其含10種揮發(fā)性酚的質(zhì)量濃度均為0.15 μg/mL。按1.2.1前處理方法進(jìn)行樣品前處理，用1.2.2儀器條件和2.2建立的定量方法進(jìn)行檢測(cè)?？疾旆椒ɑ厥章室?jiàn)表4。結(jié)果表明，進(jìn)行5次平行樣品分析，10種揮發(fā)性酚的回收率在83.9%～101.2%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.1%～2.9%，表明該方法的準(zhǔn)確度及精密度較高。

圖3　酒樣選擇離子檢測(cè)模式總離子流圖

表3　典型酒樣中10種揮發(fā)性酚類含量

表4　回收率和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)（n=5）?。?）

3　結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)建立了液液萃取-GC/MS測(cè)定白酒中揮發(fā)性酚類物質(zhì)的方法。對(duì)10種揮發(fā)性酚類物質(zhì)分析得出的質(zhì)譜圖在譜庫(kù)進(jìn)行檢索，準(zhǔn)確地對(duì)10種揮發(fā)性酚類物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析。所建立的方法可以同時(shí)測(cè)定10種揮發(fā)性酚類化合物，其加標(biāo)回收率在83.9%～101.2%， RSD值為1.1%～2.9%（表4）。該方法不需要衍生化，且定性、定量準(zhǔn)確度較高，重復(fù)性好。該方法的建立有利于白酒中揮發(fā)性酚類物質(zhì)的準(zhǔn)確定性、定量分析，為白酒香味成分分析提供理論依據(jù)。

［1］Cerdán T G，Rodríguez Mozaz S，AncínAzpilicueta C.Volatile composition of aged wine in used barrels of French oak and ofAmerican oak［J］.Food Research International，2002，35（7）：603-610.

［2］Shahidi F，Naczk M.Food phenolics:sources，chemistry，effects，applications［M］.Florida：CRC Press，2003.

［3］Fan W，Qian M C.Characterization of aroma compounds of Chinese“Wuliangye”and“Jiannanchun”liquors by aroma extract dilution analysis［J］.Journal ofAgricultural and Food Chemistry，2006，54（7）：2695-2704.

［4］Tressl R，Renne R，Apetz M.Volatile phenolic components in beer，smoked beer，and sherry［J］.Z Lebensm Unters Forsch，1976，162（2）：115-122.

［5］Patrick X E.Volatile phenol determination in wine［J］.JAgric Food Chem，1981，29（1）：65-167.

［6］輕工業(yè)部食品發(fā)酵研究所發(fā)酵室酒分析小組.氣相色譜法分析白酒的揮發(fā)性酚元化合物［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，1980（6）：10-15.

［7］Lehtonen M.Phenols in Whisky［J］.Chromatographia，1982，16 （1）：201-203.

［8］朱燕，范來(lái)文，徐巖.應(yīng)用DI-SPME和GC-MS分析白酒中游離酚類化合物［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，2010，36（10）：138-143.

［9］Mcmurrough I，Madigan D，Donnelly D，et al.Control of ferulic acid and 4-vinyl guaiacol in brewing［J］.J Inst Brew，1996，102（5）：327-332.

［10］Vanbeneden N，Delvaux F，Delvaux F R.Determination of hydroxycinnamic acids and volatile phenols in wort and beer by isocratic high-performance liquid chromatography using electrochemical detection［J］.J ChromatogrA，2006，1136（2）：237-242.

［11］Larcher R，Nicolini G，Puecher C，et al.Determination of volatile phenols in wine using high-performance liquid chromatography with a coulometric array detector［J］.Anal ChimActa，2007，582（1）：55-60.

Determination of Volatile Phenolic Compounds in Baijiu by GC-MS

ZHANG Qian
（National Quality Inspection&Supervision Center forAlcoholic Drinks and Beverages，Guiyang，Guizhou 550016，China）

GC-MS was used to detect the content of 10 kinds of volatile phenolic compounds in Baijiu pretreated by liquid-liquid extraction. Library searching of the obtained mass spectra was performed to achieve more accurate quantitative and qualitative analysis of the 10 volatile phenolic compounds.The recovery rate was 83.9%～101.2%，and RSD was 1.1%～2.9%.Qualitative and quantitative accuracy was high with satisfactory repeatability.The experimental results proved that the method was suitable for the study of volatile phenol compounds in Baijiu.

Baijiu；volatile phenolic compounds；GC-MS

TS262.3；TS261.7

A

1001-9286（2016）09-0128-03

10.13746/j.njkj.2016253

2016-08-12

張倩（1982-），女，四川西昌人，工程師，本科，主要從事食品檢測(cè)分析研究。

優(yōu)先數(shù)字出版時(shí)間：2016-08-18；地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1051.TS.20160818.0917.001.html。