張芷寧

（遼寧省錦州市農(nóng)業(yè)信息中心，遼寧 錦州 121000）

干粉培養(yǎng)基在禽多殺性巴氏桿菌病活疫苗培養(yǎng)中的應(yīng)用

張芷寧

（遼寧省錦州市農(nóng)業(yè)信息中心，遼寧 錦州 121000）

商品化干粉培養(yǎng)基在培養(yǎng)中應(yīng)用越來越廣泛，給細(xì)菌培養(yǎng)提供充分營(yíng)養(yǎng)需求，簡(jiǎn)化培養(yǎng)基制備過程，并可使批間次差異減少。

1　菌種及原材料

1.1菌種禽多殺性巴氏桿菌G190E40弱毒株，效檢用禽多殺性巴氏桿菌C48-1強(qiáng)毒株。

1.2培養(yǎng)基青島海博公司，巴氏桿菌干粉培養(yǎng)基，批號(hào)：201512

1.3試驗(yàn)動(dòng)物3～4月齡的健康易感雞

2　菌種制備

2.1基礎(chǔ)種子G190E40株凍干菌種用滅菌2～5mL pH7.4馬丁湯進(jìn)行溶解，接入血液馬丁瓊脂斜面1～2支，置37℃培養(yǎng)18～22h。培養(yǎng)完成后血液馬丁瓊脂斜面放2～8℃普通冰箱保純，繼代時(shí)間不超過14d，在培養(yǎng)基上傳代連續(xù)不能超過5代。

2.2一級(jí)菌種制備及純粹檢驗(yàn)用火焰消毒過的鉑金耳將菌落混勻后接種于pH7.4加血液馬丁肉湯中，置37℃培養(yǎng)18～22h，經(jīng)純粹檢驗(yàn)合格后作為一級(jí)種子，保存在2～8℃普通冰箱備用。

2.3二級(jí)種子制備及純粹檢驗(yàn)取檢驗(yàn)合格一級(jí)種子瓶，采用無菌方法接種到pH7.4含0.5%裂解全血的馬丁湯中，然后放37℃溫室培養(yǎng)24h，在此期間振蕩2～3次，經(jīng)純粹檢驗(yàn)合格為二級(jí)種子，種子瓶放置2～8℃冰箱保存，限時(shí)48h用完。

3　菌液培養(yǎng)

3.1制苗用培養(yǎng)基將巴氏桿菌干粉培養(yǎng)基用注射用水溶解后調(diào)節(jié)pH值，導(dǎo)入發(fā)酵罐進(jìn)行121℃，30min滅菌。

3.2發(fā)酵培養(yǎng)將檢驗(yàn)合格的二級(jí)菌種接入到滅菌后冷卻的培養(yǎng)內(nèi)，發(fā)酵罐設(shè)置成培養(yǎng)狀態(tài)，溫度，轉(zhuǎn)數(shù)，pH值設(shè)置成自動(dòng)狀態(tài)（溫度：37℃、轉(zhuǎn)數(shù)：100轉(zhuǎn)、pH值：7.5）。

3.3半成品檢驗(yàn)純粹檢驗(yàn)培養(yǎng)結(jié)束后，取樣涂片鏡檢，應(yīng)無雜菌，用馬丁瓊脂作純粹檢查，應(yīng)純粹生長(zhǎng)。

4　配苗分裝

培養(yǎng)菌液及滅菌后的明膠蔗糖保護(hù)劑按7：1進(jìn)行混合，使其明膠含量為2%、蔗糖含量4%，配苗結(jié)束后，立即進(jìn)行分裝。

5　凍干

分裝后迅速進(jìn)行冷凍真空干燥，禽多殺性巴氏桿菌病活疫苗凍干曲線：

5.1預(yù)凍接段-45℃ 3h；

5.2升華階段（一期干燥）-45℃～20℃ 13h（板層溫度，溫度均勻分布）；

5.3解析干燥（二期干燥）20℃～32℃ 6h（板層溫度）。

6　菌數(shù)測(cè)定（見表1、表2　）

表1　使用巴氏桿菌干粉培養(yǎng)基培養(yǎng)批次菌數(shù)情況（每羽份含活菌數(shù)用應(yīng)為2000萬個(gè)）

表2　使用常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)批次菌數(shù)情況（每羽份含活菌數(shù)用應(yīng)為2000萬個(gè)）

7　安全檢驗(yàn)（見表3、表4?。?/h2>

用20%鋁膠生理鹽水稀釋為1mL含100羽份，用3～4月齡的健康易感雞4只，各肌肉注射1mL，觀察10～14d，應(yīng)全部健活。

表3　使用巴氏桿菌干粉培養(yǎng)基培養(yǎng)批次安檢情況

表4　使用常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)批次安檢情況

8　免疫原性（見表5、表6?。?/h2>

用3～4月齡的健康易感雞4只，各肌肉注射用20%鋁膠生理鹽水稀釋的2000萬個(gè)活菌，14d后，連同條件相同的對(duì)照雞2只，各肌肉注射致死量的C48-1強(qiáng)毒菌液，觀察10～14d，對(duì)照雞全部死亡，免疫雞至少保護(hù)3只為合格。

表5　使用巴氏桿菌干粉培養(yǎng)基培養(yǎng)批次效檢情況

表6　使用常規(guī)培養(yǎng)基培養(yǎng)批次效檢情況

9　結(jié)論

通過對(duì)比試驗(yàn)，不管是在活菌培養(yǎng)，還是在安檢、效檢方面，商品化干粉培養(yǎng)基對(duì)于禽多殺性巴氏桿菌活疫苗的培養(yǎng)均與常規(guī)培養(yǎng)基無明顯差異，可以推廣使用。

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.09.011