陳忠偉　趙和丹　王金龍　黃通　田華偉　王長義　劉盛元

[摘要]目的本研究旨在探討胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因AKTl多態(tài)性與阿爾茨海默病的關(guān)系，以期深入了解AKTl基因多態(tài)對阿爾茨海默病易感性的影響。方法以阿爾茨海默病患者為病例組研究對象，同時(shí)選取年齡及性別匹配的健康體檢者為對照組研究對象。提取基因組DNA，應(yīng)用PCR方法對AKTl基因6個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行基因測序。結(jié)果在AKTl基因位點(diǎn)rs2498786上，阿爾茨海默病組與對照組之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。結(jié)論AKT基因位點(diǎn)rs2498786的突變型等位基因C可能增加阿爾茨海默病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。AKT基因可能是阿爾茨海默病的易感基因，AKT基因位點(diǎn)rs2498786突變可能增加阿爾茨海默病的發(fā)病率，其他所研究的AKT基因位點(diǎn)雖與阿爾茨海默病無明顯相關(guān)性，但是不排除是其微效基因，值得我們進(jìn)一步研究。

[關(guān)鍵詞]阿爾茨海默病；AKTl；基因多態(tài)性

[中圖分類號(hào)]R749.16

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]2095-0616（2016）03-37-04

阿爾茨海默?。ˋlzheimers disease，AD）又稱老年癡呆癥，是一種以進(jìn)行性認(rèn)知障礙和記憶力損害為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病…。研究發(fā)現(xiàn)，載脂蛋白E（ApoE）基因、血管轉(zhuǎn)換酶基因（ace）、載脂蛋白c1基因（apocl）、雌激素受體基因等都與阿爾茨海默病發(fā)病有一定關(guān)系，但并不能完全解釋阿爾茨海默病的發(fā)病原因。因此，尋找新的阿爾茨海默病風(fēng)險(xiǎn)因子至關(guān)重要。研究發(fā)現(xiàn)，2型糖尿病患者中，阿爾茨海默病的發(fā)病率高于正常人群，與2型糖尿病發(fā)病有關(guān)的胰島素P13K-AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在阿爾茨海默病的病變過程中的作用值得我們進(jìn)一步的研究。本研究目的探討胰島素P13K-AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因AKT多態(tài)性與阿爾茨海默病的關(guān)系，以期深入了解AKT基因多態(tài)對阿爾茨海默病易感性的影響。

1.資料與方法

1.1一般資料

將2002年1月～2013年12月我院納入管理的阿爾茨海默病患者為病例組研究對象，病例組入選標(biāo)準(zhǔn)：所有患者符合美國神經(jīng)病學(xué)、語言障礙及卒中一阿爾茨海默病和相關(guān)疾病學(xué)會(huì)（NINCDS-ADRDA）的診斷標(biāo)準(zhǔn)，所有患者均由兩位神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)師做出診斷。同時(shí)選取年齡及性別匹配的健康體檢者為對照組研究對象，對對照組研究對象進(jìn)行MMSE（簡易精神狀態(tài)量表）、ADL（日常活動(dòng)量表）、CDR（臨床癡呆評定量表）的評定，其結(jié)果必須均為正常，同時(shí)采用漢密爾頓抑郁量表排除抑郁癥。兩組研究對象均要排除高血壓、糖尿病、精神病史、酒精或藥物濫用、腫瘤及自身免疫性疾病。兩組研究對象均為漢族人群，阿爾茨海默病患者本人或家屬對本研究簽署書面知情同意書，對照組本人簽署書面知情同意書。

本研究中，阿爾茨海默病組患者共231例，男113例，女118例，平均年齡（79.6±9.9）歲，Apoε4（+）者67例，平均MMSE評分（18.6±3.9），健康對照組患者共231例，男113例，女118例，平均年齡（78.5±8.4）歲，Apoε4（+）者39例，平均MMSE評分（28.3±2.7），兩組患者平均年齡、性別構(gòu)成、文化程度差別均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），其結(jié)果具有可比性。阿爾茨海默病組Apoε4（+）者比例高于對照組，平均MMSE評分低于對照組。

1.2研究方法

1.2.1DNA提取抽取所有研究對象靜脈血并提取基因組DNA，血液標(biāo)本儲(chǔ)存于-70℃待用，并進(jìn)行DNA含量及純度檢測。

1.2.2基因分型通過NCBI-SNP和HapMap數(shù)據(jù)庫檢索，分析AKT基因上的tagSNPs數(shù)據(jù)，應(yīng)用PCR測序的方法檢測上述入選對象胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因AKT多態(tài)性基因型。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理，運(yùn)用Hardy-Weinberg平衡法則進(jìn)行遺傳平衡吻合度檢驗(yàn)；x²檢驗(yàn)分析各組間基因型及等位基因的頻數(shù)分布差異；計(jì)量資料（x±s）的形式表示，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行計(jì)量資料的比較，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 rs2498786基因位點(diǎn)與阿爾茲海默病的相關(guān)性分析

rs2498786為G/C多態(tài)性，包括G/G、G/C、C/C三種基因型。本研究中，AD組與對照組三種基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），等位基因G、c頻數(shù)分布在兩組之間分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2rs74090038基因位點(diǎn)與阿爾茲海默病的相關(guān)性分析

rs74090038為C/F多態(tài)性，包括C/C、C/T、T/T三種基因型。本研究中，AD組與對照組三種基因型分布差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），等位基因C、T頻數(shù)分布在兩組之間分布差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表2。

2.3rs2494750基因位點(diǎn)與阿爾茲海默病的相關(guān)性分析

rs2494750為C/G多態(tài)性，包括C/C、C/G、G/G三種基因型。本研究中，AD組與對照組三種基因型分布差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），等位基因c、G頻數(shù)分布在兩組之間分布差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表3。

2.4 rs2494751基因位點(diǎn)與阿爾茲海默病的相關(guān)性分析

rs2494751為A/G多態(tài)性，包括A/A、A/G、G/G三種基因型。本研究中，AD組與對照組三種基因型分布差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），等位基因A、G頻數(shù)分布在兩組之間分布差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表4。

2.5 rs5811155基因位點(diǎn)與阿爾茲海默病的相關(guān)性分析

rs5811155為T/-多態(tài)性，包括T/T、T/-、-/-三種基因型。本研究中，AD組與對照組三種基因型分布差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），等位基因T頻數(shù)分布在兩組之間分布差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表5。

2.6 rs2494752基因位點(diǎn)與阿爾茲海默病的相關(guān)性分析

rs2494752為G/A多態(tài)性，包括G/G、G/A、A/A三種基因型。本研究中，AD組與對照組三種基因型分布差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），等位基因G、A頻數(shù)分布在兩組之間分布差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），因此，rs2494752的基因多態(tài)性可能與阿爾茲海默病的發(fā)病無關(guān)聯(lián)。見表6。

3.討論

研究表明，2型糖尿病患者中阿爾茨海默病的發(fā)病率高于正常人群，并且有研究表明與2型糖尿病發(fā)病密切相關(guān)的胰島素P13K-AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)控功能在阿爾茨海默病的病理生理過程中發(fā)揮重要作用。研究稱，阿爾茨海默病患者體內(nèi)胰島素P13K-AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路功能失調(diào)，導(dǎo)致底物糖原合成酶激酶一3（GSK-3）無法降解及mTORCl無法激活，而GSK3的增多及mTORCl失活則可引起β一淀粉樣蛋白過多積聚及tau蛋白異常磷酸化，后二者與阿爾茨海默病最主要的兩個(gè)病理表現(xiàn)老年斑及神經(jīng)纖維纏結(jié)的發(fā)生密切相關(guān)。雖然有證據(jù)表明胰島素P13K-AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與AD發(fā)生有重要的關(guān)系，但是未見從分子流行病學(xué)角度探討胰島素P13K-AKT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路相關(guān)基因多態(tài)性與阿爾茨海默病關(guān)系的相關(guān)報(bào)道。

本研究選擇阿爾茨海默病患者181例，同時(shí)選取健康對照組217例，篩選AKT基因上6個(gè)位點(diǎn)，分別為：rs2498786、rs74090038、rs2494750、rs2494751、rs5811155、rs2494752，研究結(jié)果顯示，在AKT基因位點(diǎn)rs2498786上，阿爾茨海默病組與對照組存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析之后，rs2498786的突變型等位基因c可能增加阿爾茨海默病的風(fēng)險(xiǎn)。而rs74090038、rs2494750、rs2494751、rs5811155、rs2494752這些AKT基因位點(diǎn)雖不是阿爾茨海默病的易感基因位點(diǎn)，但不能排除其是眾多易感基因位點(diǎn)中一個(gè)微效基因位點(diǎn)，各種微效基因疊加后最終導(dǎo)致阿爾茨海默病的發(fā)生，而作為一個(gè)單獨(dú)微效基因，其不足以單獨(dú)通過自身的影響導(dǎo)致阿爾茨海默病發(fā)病，因而很難存在顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。