鄒連珍，甘愛萍，張漢祥，李高文，陳宏慈

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健心顆粒對早期心力衰竭大鼠心肌組織TNF-α、IL-6的影響

鄒連珍，甘愛萍，張漢祥，李高文，陳宏慈

目的探討健心顆粒治療早期充血性心力衰竭(CHF)的作用機(jī)制。方法采用腹主動脈縮窄術(shù)制作壓力超負(fù)荷慢性早期心力衰竭大鼠模型，實(shí)驗(yàn)分組為假手術(shù)組、模型組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組。以中藥健心顆粒高、低劑量和貝那普利(洛汀新)進(jìn)行干預(yù)，測定各組大鼠心肌組織腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)的含量。結(jié)果模型組心肌組織TNF-α、IL-6含量明顯高于假手術(shù)組(P<0.01)；西藥組、中藥低劑量組、中藥高劑量組TNF-α、IL-6含量均低于模型組(P<0.05或P<0.01)，中藥高劑量組TNF-α、IL-6含量低于西藥組、中藥低劑量組(P<0.05或P<0.01)。結(jié)論TNF-α、IL-6在CHF的病理過程中起著重要作用，健心顆?？赏ㄟ^抑制TNF-α、IL-6的分泌和表達(dá)，減輕心肌損傷程度，阻斷心室重構(gòu)過程，從而改善心功能，發(fā)揮抗CHF的作用。

充血性心力衰竭；健心顆粒；腫瘤壞死因子-α；白細(xì)胞介素-6；水腫

慢性心力衰竭(CHF)是一發(fā)病率高、預(yù)后差的臨床綜合征，是多種心臟病病人不可避免的最終結(jié)局。慢性心力衰竭病死率高，堪比惡性腫瘤，目前5年的病死率仍然高達(dá)60%～80%[1]。心力衰竭的發(fā)生發(fā)展涉及神經(jīng)內(nèi)分泌激活、生長因子的釋放、細(xì)胞因子、整合素和黏附分子引起心肌重塑和病情的進(jìn)展[2]。近年來越來越多的證據(jù)表明：腫瘤壞死因子-α(tumornecrosis factor-α，TNF-α)和白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)是CHF發(fā)病機(jī)制中的重要細(xì)胞因子[3]。中藥健心顆粒是我科經(jīng)多年的臨床應(yīng)用，證明其對早期心力衰竭有良效的協(xié)定方之一，但其治療作用機(jī)制尚不十分清楚。本研究觀察中藥健心顆粒對CHF大鼠心肌組織腫瘤壞死因子、白介素-6含量的影響，探討其防治早期CHF的作用機(jī)制。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物清潔級雄性SD大鼠80只，雌雄各半，體重180 g～200 g，由同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物學(xué)部提供。飼養(yǎng)20 d后，動物體重增至300 g～400 g，飲食，飲水，活動各項(xiàng)正常即開始實(shí)驗(yàn)。由湖北中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)部示范中心實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2藥物健心顆粒主要組成：西洋參、黃芪、麥冬、五味子、桂枝、丹參、益母草、香附、山楂等，由湖北省中醫(yī)院制劑室研制。實(shí)驗(yàn)時(shí)，用蒸餾水制成高、低兩種健心顆粒混懸液。高劑量組大鼠按100 g體重給予4 g生藥/1 mL混懸液，低劑量組大鼠按100 g體重給予1 g生藥/0.25 mL混懸液。貝那普利(洛汀新)由北京諾華公司提供(每片10 mg)。

1.3試劑及儀器TNF-α、IL-6試劑盒購自美國Bioscience公司。自制塑料導(dǎo)管經(jīng)加熱拉直制成內(nèi)徑0.5 mm的導(dǎo)管(外徑1 mm，長約30 cm)，插入端剪成平口并用熱水燙光滑，BL-420E+生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄儀裝備(成都泰盟科技有限公司)。

1.4方法

1.4.1動物模型制作及分組腹主動脈縮窄造模術(shù)按照相關(guān)文獻(xiàn)制作壓力超負(fù)荷大鼠模型[4]。SD大鼠80只，體重300 g～400 g，隨機(jī)取12只作假手術(shù)組，余68只為手術(shù)組。3%戊巴比妥30 mg/kg腹腔麻醉后，常規(guī)消毒，腹部正中切口，打開腹腔，逐層分離，在左腎動脈上方腸系膜動脈下方分離腹主動脈，將7號針頭與腹主動脈共同結(jié)扎，拔除針頭，造成腹主動脈官腔環(huán)形縮窄50%，關(guān)閉腹腔，消毒包扎。假手術(shù)組僅分離出腹主動脈，不行縮窄術(shù)。術(shù)后予青霉素40 000 U肌肉注射1周，預(yù)防感染。術(shù)后1周內(nèi)，假手術(shù)組飲水、飲食基本正常，無一例死亡。模型組表現(xiàn)為有時(shí)煩躁、撕咬、乏力、食欲不振、活動減少。6周內(nèi)死亡12只，存活56只，存活率82.3%。隨機(jī)分為模型組、中藥高劑量組、中藥低劑量組、西藥組，各14只，加上假手術(shù)組12只，共分為5組。6周后每組隨機(jī)取2只，共10只大鼠行血流動力學(xué)觀察，以左室舒張末壓(LVEDP)>15 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)判斷心力衰竭模型構(gòu)建成功。預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：假手術(shù)組LVEDP<15 mmHg，其余各組LVEDP>15 mmHg，提示造模成功。造模后6周開始給藥，時(shí)間共6周。

1.4.2給藥方法假手術(shù)組、模型組每日灌服蒸餾水1mL/100 g；西藥組每日灌服洛汀新混懸液0.36 mg/100 g；中藥高劑量組每日灌服健心顆?；鞈乙? g/100 g；中藥低劑量組每日灌服健心顆粒混懸液1 g/100 g。

1.4.3心肌組織TNF-α、IL-6的測量取左心室上1/3心肌組織，用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)測定細(xì)胞因子TNF-α、IL-6含量的變化。檢測方法：取0.05 g心肌組織，用磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)在4 ℃條件下勻漿，再1 200 r/min離心20 min，取上清液用于檢測，嚴(yán)格根據(jù)試劑盒說明書操作。

2　結(jié)　果

2.1一般情況腹主動脈縮窄術(shù)后1周，大鼠進(jìn)食減少，輕度脫水，體重下降，乏力，精神差，中藥喂藥后無特殊副反應(yīng)，體重逐漸上升，假手術(shù)組基本情況正常。

2.2各組大鼠左室局部TNF-α、IL-6含量的測定模型組心肌組織TNF-α、IL-6含量明顯高于假手術(shù)組(P<0.01)，說明心力衰竭時(shí)細(xì)胞因子被持續(xù)激活。西藥組、中藥低劑量組、中藥高劑量組TNF-α、IL-6含量均低于模型組(P<0.05或P<0.01)，中藥高劑量組TNF-α、IL-6含量低于西藥組、中藥低劑量組(P<0.05或P<0.01)，說明心力衰竭大鼠經(jīng)治療后，細(xì)胞因子有所下降，間接說明藥物對心室重構(gòu)有逆轉(zhuǎn)作用，其中健心顆粒高劑量組拮抗細(xì)胞因子的作用較低劑量組及西藥組更好。詳見表1。

表1　各組左室局部TNF-α、IL-6含量比較(±s) pg/g

3　討　論

健心顆粒是我院綜合科防治早期心力衰竭具有良效的協(xié)定方之一，由西洋參、黃芪、麥冬、五味子、桂枝、丹參、益母草、香附、山楂等組成，方中西洋參、麥冬、五味子益氣養(yǎng)陰，取生脈散之意，黃芪加強(qiáng)扶正益氣，香附、桂枝理氣通陽，丹參、益母草、山楂活血化瘀，其中山楂并兼有消滯除痰作用，益母草有活血利水效果。全方具有益氣養(yǎng)陰、理氣通陽、活血化痰的作用?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)已證明：組成健心顆粒的諸種藥物具有良好的心血管系統(tǒng)藥理作用，能增加心肌收縮力，擴(kuò)張冠脈，擴(kuò)張周圍血管，降壓，利尿，抗凝等多種作用，可以減少心肌張力，降低心臟前后負(fù)荷，減輕心室重構(gòu)，改善心功能，有利于防止左心室功能進(jìn)一步減退。 臨床觀察表明：在常規(guī)西藥的基礎(chǔ)上加用健心顆粒治療能改善慢性心力衰竭病人的心功能，顯著提高臨床療效，減輕西藥副反應(yīng)[4]。動物實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明：健心顆粒在改善心力衰竭大鼠血流動力學(xué)及左室肥大指標(biāo)方面與西藥洛汀新相似[4]。

無論心力衰竭的病因如何，心力衰竭的發(fā)生發(fā)展涉及神經(jīng)內(nèi)分泌激活、生長因子的釋放、細(xì)胞因子、整合素和黏附分子引起心肌重塑和病情的進(jìn)展[2]。細(xì)胞因子是由多種細(xì)胞分泌的高效、多能的內(nèi)源性肽類物質(zhì)，其中TNF-α、白細(xì)胞介素-1α(IL-1α)、白細(xì)胞介素1-β(IL-1β)、白細(xì)胞介素-6(IL-6)等稱為炎性細(xì)胞因子(proinflammatory cytokines，PIC)。TNF-α、IL-6等PIC可明顯抑制心肌收縮功能，參與了CHF的發(fā)生、發(fā)展[3]。TNF-α主要來源于激活的單核巨噬細(xì)胞。正常心肌細(xì)胞不能產(chǎn)生TNF-α，充血性心力衰竭時(shí)在多種因素刺激下，心肌細(xì)胞大量產(chǎn)生TNF-α mRNA及表達(dá)TNF-α[5]。IL-6可由單核巨噬細(xì)胞、活化的T細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等產(chǎn)生，也是一種多功能的細(xì)胞因子，可介導(dǎo)免疫和炎癥反應(yīng)，能獨(dú)立調(diào)節(jié)心血管功能[3]。

本實(shí)驗(yàn)采用ELISA法檢測細(xì)胞因子TNF-α、IL-6，測的是心肌局部組織的細(xì)胞因子，而不是血液循環(huán)中TNF-α、IL-6，細(xì)胞因子局部濃度較高，更能反映大鼠體內(nèi)TNF-α、IL-6含量的準(zhǔn)確變化。采用腹主動脈縮窄法制作早期慢性心力衰竭的動物模型，其模型組心肌組織TNF-α、IL-6含量明顯高于假手術(shù)組(P<0.01)，說明TNF-α、IL-6參與了CHF的發(fā)生和發(fā)展。經(jīng)藥物干預(yù)后，西藥組、中藥低劑量組、中藥高劑量組大鼠心肌組織TNF-α、IL-6含量均低于模型組(P<0.05或P<0.01)，其中健心顆粒高劑量組拮抗細(xì)胞因子的作用較低劑量組及西藥組更好，說明各治療組用藥能調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，可通過抑制巨噬細(xì)胞釋放TNF-α，IL-6等炎癥介質(zhì)，達(dá)到減輕心肌損傷的作用，且中藥高劑量組療效更好。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：TNF-α、IL-6在CHF的病理過程中起著重要作用，TNF-α、IL-6合成與釋放過多介導(dǎo)了CHF的發(fā)病過程。因此，檢測心肌組織TNF-α、IL-6含量可以作為CHF臨床診斷的重要參考指標(biāo)之一。健心顆?？赏ㄟ^抑制TNF-α、IL-6的分泌和表達(dá)，減輕心肌損傷程度，阻斷心室重構(gòu)過程，從而改善心功能，發(fā)揮抗CHF的作用。

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(本文編輯郭懷印)

湖北省保健專項(xiàng)資金科研課題(No.A2004A301C72)

湖北省中醫(yī)院(武漢 430061)，E-mail：582327804@qq.com

R541.6R289.5

A

10．3969/j．issn．1672-1349．2016．16．009

1672-1349(2016)16-1857-03

2015-12-21)