文/丁進(jìn)國(guó)　丁小祥　李榮杰

（上海光明荷斯坦牧業(yè)有限公司）

奶牛性控凍精在實(shí)際生產(chǎn)中的運(yùn)用

文/丁進(jìn)國(guó)丁小祥李榮杰

（上海光明荷斯坦牧業(yè)有限公司）

隨著奶牛養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，性控凍精使用數(shù)量不斷攀升，筆者從性控凍精的概念、制作方法、性控凍精與常規(guī)凍精的比較、性控凍精的特點(diǎn)、性控凍精使用的注意事項(xiàng)和使用規(guī)范等方面進(jìn)行介紹，使大家對(duì)性控凍精有一個(gè)全面的了解，從而使性控凍精在生產(chǎn)實(shí)際運(yùn)用中發(fā)揮更好、更理想的效果。

奶牛；性控凍精；特點(diǎn)；實(shí)際生產(chǎn)

近年來，隨著奶牛養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，擴(kuò)群擴(kuò)繁需求越來越迫切，性控凍精使用數(shù)量不斷攀升，目前在牧場(chǎng)和養(yǎng)殖戶中的覆蓋率達(dá)到90%左右。但在實(shí)際使用過程中，使用效果差距很大。好的情期受胎率可以達(dá)到50%～60%；差的情期受胎率只有20%～30%。因此，應(yīng)對(duì)性控凍精做一個(gè)全面的了解，更好地使用奶牛性控凍精，掌握性控凍精的使用規(guī)律，以使性控凍精在生產(chǎn)實(shí)際運(yùn)用中的效果發(fā)揮的更好、更理想。

1　性控凍精概念

特殊處理奶牛精液，使含X、Y染色體的精子得到有效分離，將分離后得到的X精子進(jìn)行分裝冷凍，制成凍精細(xì)管，進(jìn)行奶牛的人工授精，從而使母牛產(chǎn)母犢率達(dá)到90%以上。

2　性控凍精制作方法

性控凍精在20世紀(jì)80～90年代已經(jīng)開始生產(chǎn)，制作方法主要采用物理分離法，如沉降法、離心法、電泳法、過濾法。主要利用X、Y精子不同物理性差異，如密度、大小、活力、形態(tài)、表面電荷的特點(diǎn)來進(jìn)行分離。但制作后的效果與效率都較差，缺乏可靠性和重復(fù)性。因此，這些方法現(xiàn)已很少使用。

目前市場(chǎng)上廣泛運(yùn)用的性控凍精，都是采用美國(guó)的技術(shù)和設(shè)備——流式細(xì)胞儀分離制作而成。制作原理：根據(jù)X、Y精子的DNA含量不同，X染色體的DNA要比Y染色體DNA多3.8%。在分離精子時(shí)，先將精子染色，當(dāng)精子通過流式細(xì)胞儀時(shí)，即可根據(jù)熒光強(qiáng)度的差別，將X、Y精子分離成功。

3　性控凍精與常規(guī)凍精各項(xiàng)指標(biāo)比較

從凍精容量、精子密度、解凍活力、畸形精子率、非病原細(xì)菌數(shù)、產(chǎn)母犢率等幾個(gè)方面比較性控凍精和常規(guī)凍精的各項(xiàng)指標(biāo)，結(jié)果如表1所示。

表1　性控凍精與常規(guī)凍精各項(xiàng)指標(biāo)比較

4　性控凍精特點(diǎn)

4.1活力高

性控凍精解凍后活力要比常規(guī)凍精活力高，主要原因是：在制作分離過程中，除了保留X精子、篩除Y精子外，還將原精液中質(zhì)量差的死精和畸形精子篩除掉。

4.2密度低

制作分離后的性控凍精精子的密度遠(yuǎn)低于常規(guī)凍精，約為常規(guī)凍精的1/5左右。

4.3存活時(shí)間短

性控凍精在制作過程中會(huì)損傷到精子的細(xì)胞膜，導(dǎo)致精子活力下降較快，降低了精子的穩(wěn)定性，縮短了精子的壽命。性控凍精的存活時(shí)間相對(duì)于常規(guī)冷凍精液要短。因此，在使用性控冷凍精液進(jìn)行人工授精時(shí)，對(duì)技術(shù)的要求會(huì)更高。

4.4價(jià)格貴

采用了高科技的精液分離技術(shù)，生產(chǎn)成本費(fèi)用增加，同樣的凍精，性控凍精一般比常規(guī)凍精貴5～10 倍。

5　性控凍精使用的注意事項(xiàng)

使用性控凍精時(shí)，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：（1）性控凍精不建議與常規(guī)凍精同時(shí)解凍；（2）南方夏季熱應(yīng)激時(shí)不宜使用；（3）配種2 次以上，不宜使用；（4）注射疫苗前后15 天左右不宜使用；（5）因繁殖障礙使用激素的牛只不宜使用；（6）如果不急于擴(kuò)群，經(jīng)產(chǎn)牛不建議使用。

6　性控凍精使用規(guī)范

6.1性控凍精的貯存

6.1.1液氮罐應(yīng)避免碰撞而使保溫效果下降，應(yīng)放置在人工授精專用操作室，保持清潔、干燥、通風(fēng)。應(yīng)防控非繁殖人員接觸，周圍不能有揮發(fā)性的化學(xué)品。

6.1.2罐內(nèi)應(yīng)保持有足夠量的液氮存量，液氮水平面保持在18 cm以上，16 cm時(shí)即應(yīng)添加液氮。

6.1.3取凍精時(shí)，提筒不得提出罐口，最少保持在罐口下5～6 cm處，每次取用不超過10 s。否則，應(yīng)將提桶放回液氮罐15 s后再提起。

6.1.4有條件的牧場(chǎng)，每同一批號(hào)精液在使用前，均應(yīng)抽樣鏡檢活力，并做好記錄。

6.2性控凍精的解凍

6.2.1水浴鍋，溫度計(jì)應(yīng)經(jīng)常校正，應(yīng)定期更換水、保持水浴鍋內(nèi)清潔。

6.2.2凍精解凍溫度為35 ℃，解凍時(shí)間40 s。有條件的情況下，可現(xiàn)場(chǎng)解凍。解凍后，用干凈毛巾或紙巾擦干凍精細(xì)管上的水珠。

6.2.3解凍后，凍精必須在最快時(shí)間內(nèi)輸精完畢，時(shí)間不超過15 min。若輸精頭次較多，應(yīng)分批解凍。

6.2.4剪細(xì)管封口的剪刀刃口應(yīng)保持潔凈和鋒利，并定期消毒。

6.2.5凍精解凍后應(yīng)裝入輸精套管，套管應(yīng)放置在無菌衛(wèi)生器具內(nèi)。

6.2.6凍精解凍時(shí)應(yīng)避免光線直射，避免與酒精等消毒藥品接觸，避免途中震蕩。

6.3母牛選擇

6.3.1品種選擇

選擇中高產(chǎn)奶牛及其后代作為使用對(duì)象。

6.3.2年齡選擇

后備牛初配牛月齡達(dá)到14～16月齡。

6.3.3營(yíng)養(yǎng)與健康

體況正常，膘情適中，生殖道無異常，發(fā)情周期正常。

6.3.4后備牛體重與體高要求

體重≥375 kg；體高≥127 cm。

6.4發(fā)情鑒定

掌握母牛發(fā)情過程與內(nèi)部生殖器官的變化，目的是確定母牛發(fā)情時(shí)間段，真正做到適時(shí)配種，獲得最佳受胎率。

母牛性成熟后，每經(jīng)過一個(gè)性周期都會(huì)有一次發(fā)情，稱為發(fā)情周期。一般成母牛為18～24 天，平均為21 天，青年母牛平均為20 天。發(fā)情階段可分為4 個(gè)階段：發(fā)情前期、發(fā)情盛期、發(fā)情后期、間情期。

6.4.1發(fā)情前期特點(diǎn)

（1）爬跨：爬跨其它牛，不接受其它牛爬跨。

（2）陰戶：潮紅、略微腫脹。

（3）黏液：少而稀薄，黏性差。

（4）持續(xù)時(shí)間：6～10 h。

6.4.2發(fā)情盛期特點(diǎn)

（1）爬跨：靜立接受爬跨，爬跨其它牛。

（2）陰戶：紅潤(rùn)、腫脹、外陰濕潤(rùn)閃光。

（3）黏液：量多、透明，含有氣泡；強(qiáng)拉絲性，拉絲呈Y狀，兩指牽拉可6～8 次不斷。

（4）持續(xù)時(shí)間：10～12 h。

6.4.3發(fā)情后期特點(diǎn)

（1）爬跨：拒絕其它牛爬跨，爬跨其它牛只。

（2）陰戶：淡紅、腫脹消失。

（3）黏液：少而黏稠，呈膠狀。

（4）持續(xù)時(shí)間：6～8 h。

6.4.4間情期特點(diǎn)

間情期是母牛發(fā)情周期中最長(zhǎng)的時(shí)間，是指母牛排卵后發(fā)情結(jié)束，到下一次發(fā)情開始的時(shí)間。

6.5適時(shí)配種

精子和卵子的受精部位，在輸卵管上1/3壺腹部。只有適時(shí)配種，才能提高受胎率。適時(shí)配種，首先要掌握母牛排卵時(shí)間。母牛發(fā)情持續(xù)時(shí)間一般為18～24 h，開始排卵到發(fā)情結(jié)束后的持續(xù)時(shí)間為6～8 h。精子在輸卵管內(nèi)有4～6 h的獲能時(shí)間，卵子在6 h之內(nèi)具有受精能力。因?yàn)樾钥貎鼍哂谢盍Ω?、密度低、存活時(shí)間短的特點(diǎn)，所以在使用時(shí)，必須掌握這些要點(diǎn)，然后真正做到適時(shí)配種。

6.5.1配種時(shí)間

根據(jù)性控凍精特點(diǎn)，輸精時(shí)間應(yīng)比常規(guī)凍精輸精時(shí)間推遲3～4 h。

6.5.2外部觀察

發(fā)情后期，母牛表現(xiàn)安靜，外陰腫脹消失，陰戶流出半透明牽縷性黏液。

6.5.3直腸檢查

卵泡不再增大，卵泡壁變薄，泡液呈波動(dòng)性，緊張度增加，有一觸即破的感覺，子宮興奮性明顯降低，已感覺不到發(fā)情盛期時(shí)子宮受到刺激后的充實(shí)感和彈性感。

6.6輸精技術(shù)

性控凍精有效精子數(shù)遠(yuǎn)低于常規(guī)凍精，價(jià)格高于常規(guī)凍精，因此如何提高受胎率，節(jié)省成本就顯得非常關(guān)鍵了。在運(yùn)用性控凍精輸精時(shí)，不僅要嚴(yán)格掌握好輸精時(shí)間，而且要有過硬的輸精技術(shù)，才能達(dá)到理想的受胎率。有很多資料表明：性控凍精輸精部位不同，受胎率也不同，而且存在明顯差異。子宮角深部輸精比子宮體輸精受胎率高出很多，效果也更好。但也對(duì)人工授精員提出了更高的標(biāo)準(zhǔn)、更嚴(yán)的要求。在輸精時(shí)要求做到：慢插、輕拉、緩出，輸精完畢，套管口不應(yīng)有血跡，具體如下：

（1）輸精前用紙巾將陰戶擦干凈，嚴(yán)禁用消毒水清洗陰戶；（2）進(jìn)槍時(shí)，以35～40°角向上插入5～10 cm，避開尿道口后，再改為略向前下方進(jìn)入陰道；（3）從直腸把握子宮頸；（4）內(nèi)外兩手協(xié)調(diào)操作；（5）不應(yīng)以外面手強(qiáng)硬操作；（6）輕柔地使輸精槍通過子宮頸，滑向子宮體內(nèi)至子宮體前沿，達(dá)卵泡側(cè)子宮角深部大彎處；（7）輸精槍到達(dá)輸精部位后緩慢注入精液；（8）輸精完畢，緩慢退出輸精槍，按摩子宮直至外陰有強(qiáng)烈收縮最佳；（9）如需促排可在輸精后肌注LRH-A3 25～50 μg。

7　小結(jié)

綜上所述，使用好性控凍精應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：（1）在給奶牛使用性控凍精時(shí)，盡量讓繁殖經(jīng)驗(yàn)較豐富的配種員操作；（2）建議用于營(yíng)養(yǎng)狀況良好、發(fā)情周期正常的青年母牛的前2 次配種；（3）加強(qiáng)牛只發(fā)情觀察和準(zhǔn)確的發(fā)情鑒定；（4）盡量在牛只發(fā)情的后期進(jìn)行配種；（5）從解凍至輸精結(jié)束不超過15 min；（6）性控凍精不建議普遍采用同步排卵方案，但對(duì)于同步排卵處理后發(fā)情明顯的個(gè)別母牛可以使用；（7）性控凍精不建議用于胚胎移植的受體母牛；（8）輸精最佳部位是卵泡發(fā)育側(cè)子宮角深部大彎處。

丁進(jìn)國(guó)（1957-），男，從事奶牛養(yǎng)殖行業(yè)40 多年，奶牛技術(shù)推廣、牧場(chǎng)經(jīng)營(yíng)管理、對(duì)外技術(shù)服務(wù)30 多年。

2016-06-06）