楊　梅，陳　紅

(成都市食品藥品檢驗研究院,四川　成都　610045)

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維格列汀有關物質檢查

楊梅，陳紅

(成都市食品藥品檢驗研究院,四川成都610045)

建立了測定維格列汀有關物質檢查方法。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸鹽緩沖液(取磷酸氫二銨2.64 g，溶于1000 mL水中，用稀氨水或磷酸溶液調節(jié)pH值至8.0±0.05)-甲醇(90:10)為流動相A，甲醇為流動相B；進行梯度洗脫。流速1.0 mL·min-1，柱溫40 ℃，檢測波長210 nm。對維格列汀3種雜質進行定量檢查。結果表明：各雜質與主成分能完全分離，雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ檢測限分別為1.1、1.2、1.2 ng(S/N=3)，回收率分別為96.8%、103.6%、107.1%，濃度與峰面積均呈線性(r>0.999)。結論 本法準確、簡便、快速，可用于維格列汀有關物質檢查。

維格列??；有關物質；維格列汀雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ

新型降糖藥維格列汀(Vildagliptin，(S)-1-[2-(3-羥基金剛烷-1-氨基)乙酰基]吡咯烷-2-腈)是一種的選擇性二肽基肽酶-4(DPP-4)抑制劑。通過抑制DPP-4對內源性腸促胰島激素的降解，提高內源性胰高血糖素樣肽(GLP-1)的濃度，促進β細胞釋放胰島素，抑制α細胞分泌胰高血糖素，使胰島素水平升高。該類藥物不引起低血糖或體重增加等不良反應[1-3]。

圖1　維格列汀和雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ結構式

目前，EP8.0、USP38、CHP2015均未收載維格列汀。為此，本文采用高效液相色譜法對其進行有關物質檢查，以控制雜質，提高質量。維格列汀和雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ結構式見圖1。其中，雜質Ⅱ為維格列汀合成的中間體，雜質Ⅰ是維格列汀與雜質Ⅱ的反應產物，雜質Ⅲ是維格列汀合成過程中酰胺脫水不完全或分子中的氰基水解轉化成的[4-5]。

1　實　驗

1.1儀器與試藥

Waters e2695-2998高效液相色譜儀，美國Waters公司；BP211D電子天平，北京賽多利斯公司。

維格列汀原料(批號：1302001667、1402003781、1402003806)，維格列汀對照品(批號：WS/VID/03，含量：99.49%)，雜質Ⅰ(批號：CG-3188/dimer/1767/06-B，含量：91.05%)，雜質Ⅱ(批號：CG-3188/KSM-Ⅱ/1820/08，含量：99.60%)，雜質Ⅲ(批號：CG-3188/Imp/1751/23，含量：98.51%)，均由Alembic Pharmaceuticals Ltd. 提供。

磷酸二氫銨、磷酸、氨水為分析純；乙腈、甲醇為色譜純；水為超純水。

1.2色譜條件

采用Waters Xbridge C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；Thermo BDS HYPERSIL C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；ZORBAX Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱；以磷酸鹽緩沖液(取磷酸氫二銨2.64 g，溶于1000 mL水中，用稀氨水或磷酸溶液調節(jié)pH值至8.0±0.05)-甲醇(90:10)為流動相A，甲醇為流動相B。線性梯度洗脫程序為0 min A 80%，5 min A 80%，20 min A 50%，25 min A 50%，27 min A 80%，32 min A 80%；流速1.0 mL·min-1；檢測波長210 nm；柱溫40 ℃。

1.3溶液的制備

(1)稀釋劑。0.1%磷酸溶液-乙腈(90:10)。

(2)混合對照品溶液貯備液。取維格列汀和雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ對照品適量，加稀釋劑溶解并稀釋制成每1 mL中約含維格列汀和雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各0.02 mg的溶液，作為混合對照品溶液貯備液，見圖2。

圖2　維格列汀及其雜質混合對照色譜圖

(3)對照品溶液。取維格列汀對照品適量，精密稱定，用稀釋劑制成每1 mL中約含2 μg的溶液，作為對照品溶液。

(4)供試品溶液.取維格列汀原料藥適量，精密稱定，用稀釋劑溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含2 mg的溶液，作為供試品溶液，見圖3。

圖3　維格列汀供試品色譜圖

1.4有關物質檢查法

精密量取供試品溶液和對照品溶液各20 μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，雜質Ⅰ、雜質Ⅱ和雜質Ⅲ相對于維格列汀峰(保留時間為約12 min)的相對保留時間分別為1.5、0.3和0.6。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，按外標法以峰面積計算，雜質Ⅰ校正因子為0.7，雜質Ⅱ校正因子為0.4，雜質Ⅲ及其他各雜質校正因子均為1.0。

2　結果與討論

2.1分析方法的驗證

2.1.1專屬性考察

空白無干擾。

為了考察該方法能否有效檢測出本品在生產及貯存過程中可能產生的降解產物，進行適度的強制降解試驗，以驗證分析方法對相關降解產物檢查的專屬性。

加熱、光照和強酸破壞使雜質Ⅲ峰略升高；強堿破壞使雜質Ⅲ峰明顯升高；氧化破壞使雜質峰個數和含量均明顯升高，見圖4～圖8。上述試驗結果表明，該方法具有良好的專屬性，適用于維格列汀在生產及貯存過程中因各種影響因素所產生的雜質檢查。

圖4　維格列汀強堿破壞色譜圖

圖5　維格列汀加熱破壞色譜圖

圖6　維格列汀強酸破壞色譜圖

圖7　維格列汀強氧化破壞色譜圖

圖8　維格列汀強光照破壞色譜圖

2.1.2檢測限、定量限及線性

精密量取混合對照品溶液貯備液適量，用稀釋劑稀釋成一系列不同濃度的混合對照品溶液，以濃度(μg/mL)為橫坐標，峰面積為縱坐標作回歸直線。維格列汀及雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ分別在0.218～5.457、0.184～4.603、0.196～4.895、0.205～5.127 μg/mL范圍內線性良好(r>0.999)。維格列汀及雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的檢出限分別為1.3、1.1、1.2、1.2 ng(S/N=3)；定量限分別為4.4、3.7、3.9、4.1 ng(S/N=10)。

2.1.3回收率試驗

取維格列汀約10 mg，精密稱定，置10 mL量瓶中，分別加混合對照品溶液貯備液0.375、0.75、1.125 mL，按有關物質檢查法測定。雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ回收率分別為95.1%～99.0%、102.3%～105.3%、103.4%～109.4%，均值分別為96.8%、103.6%、107.1%(n=9)。

2.1.4溶液的穩(wěn)定性

供試品溶液室溫放置24 h，雜質峰的個數與含量基本無變化；室溫放置48 h，除雜質Ⅲ峰略升高外，其余雜質峰的個數與含量和0 h基本一致。

2.1.5精密度與重復性

對照品溶液連續(xù)進樣，維格列汀峰面積的RSD為0.4%(n=6)。

取1302001667批樣品重復測定6次，總雜質含量一致(0.02%)，各雜質峰面積的RSD均<10%。

2.1.6耐用性

選用三根不同型號色譜柱試驗，雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ相對保留時間(RRT)與校正因子(f)幾乎一致(偏差<10%)，各色譜峰的效能指標基本一致，雜質之間以及主成分間分離度良好(分離度>3)。三根色譜柱測定的雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ相對保留時間(RRT)均值分別為1.5、0.3、0.6，校正因子(f)均值分別為0.7、0.4、0.9。

2.2測定結果

三批樣品的測定結果如表1所示。

表1　有關物質測定結果

2.3討論

(1)測定波長的選擇

對維格列汀及雜質Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ進行DAD掃描，維格列汀、雜質Ⅰ和雜質Ⅲ均在210 nm的波長處有最大吸收，雜質Ⅱ為末端吸收。隨著測定波長降低，基線噪音增大，因此選擇210 nm波長處測定維格列汀及其雜質，此時基線較平滑，各雜質檢出限較高，能滿足測定要求。

(2)校正因子的確定 根據耐用性實驗結果，以三根不同型號色譜柱測定的均值得出。按照雜質檢查的相關規(guī)定(校正因子在0.9～1.1之間的雜質可以1.0計)，確定“1.4 有關物質檢查法”中各雜質的校正因子，分別為雜質Ⅰ為0.7，雜質Ⅱ為0.4，雜質Ⅲ及其他各雜質均為1.0。

3　結　論

本法準確、簡便、快速，可用于維格列汀原料藥的有關物質檢查。

[1]樊新星,徐珽,盧靜,等. 抗糖尿病新藥維格列汀[J]. 中國新藥雜志, 2008, 17(14):1272-1274.

[2]蔡倩,劉蕾. 新型降糖藥物二肽基肽酶-4抑制劑的研究進展[J]. 中國新藥雜志, 2014, 23(3):302-307.

[3]安富榮,崔嵐,王勤. 治療2型糖尿病新藥——維格列汀[J]. 中國新藥與臨床雜志, 2012, 31(10):574-578.

[4]韓春明,殷劍,王風云,等. 維達列汀的合成工藝改進[J]. 精細化工, 2015, 32(1):69-72.

[5]丁景偉,王秋艷,張勇. 維格列汀降解雜質的合成[J]. 中國醫(yī)藥工業(yè)雜志, 2015, 46(11):1169-1172.

Study on Determination of the Related Substances in Vildagliptin

YANG Mei， CHEN Hong

(Chengdu Institute of Food and Drug Control, Sichuan Chengdu 610045, China)

A method for determination of the related substances in Vildagliptin was established. It was determined on HPLC. The C18was used as analytical column. Phosphate buffer (containing 2.46 g of diammonium hydrogen phosphate in 1 litre of water, adjusted to pH 8.0±0.05 with ammonium hydroxide solution or phosphoric acid) and methanol (90:10) were used as mobile phases A, methanol were used as mobile phases B, with gradient elution. The column temperature was kept at 40 ℃. The flow rate was 1.0 mL·min-1. The detection wavelength was set at 210 nm. Results showed that Vildagliptin and its impurities could be separated with all related substances completely. The limits of detection was 1.1, 1.2, 1.2 ng(S/N=3) for impurity Ⅰ, Ⅱ, Ⅲ. Their linearities were good, with their recoveries 96.8%, 103.6%, 107.1%, respectively. The method is accurate and sensitive, and can be used for the related substances in Vildagliptin.

Vildagliptin; related substance; Vildagliptin impurityⅠ, Ⅱ, Ⅲ

楊梅(1979-)，女，主管藥師，主要從事藥物分析及質量控制。

R917

A

1001-9677(2016)016-0149-03