陳　敏, 王飛鵬, 黃響珠, 黃恩炯

(1.福建國(guó)際旅行衛(wèi)生保健中心，福建 福州 350001；2.福建農(nóng)林大學(xué)教育部生物農(nóng)藥與化學(xué)生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350002;3.三明出入境檢驗(yàn)檢疫局，福建 三明 365000)

?

5種常用殺蟲劑對(duì)尖喙庫(kù)蠓的毒性測(cè)定

陳敏1, 王飛鵬2, 黃響珠3, 黃恩炯1

(1.福建國(guó)際旅行衛(wèi)生保健中心，福建 福州 350001；2.福建農(nóng)林大學(xué)教育部生物農(nóng)藥與化學(xué)生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，福建 福州 350002;3.三明出入境檢驗(yàn)檢疫局，福建 三明 365000)

以野外采集的尖喙庫(kù)蠓成蟲為試驗(yàn)對(duì)象，通過濾紙接觸法，測(cè)定了毒死蜱、敵敵畏、溴氰菊酯、高效氯氰菊酯和高氯·甲維鹽等5種常用殺蟲劑對(duì)尖喙庫(kù)蠓的毒殺效果.結(jié)果表明：5種殺蟲劑對(duì)蠓的毒性差異顯著，毒力大小依次為溴氰菊酯>毒死蜱>高效氯氰菊酯>高氯·甲維鹽>敵敵畏，試蟲接觸藥劑1 h的LC50分別為0.060、0.588、1.741、99.670和600.496 mg·L-1；試蟲經(jīng)藥劑處理1 h后在恢復(fù)筒觀察24 h，其在各種藥劑不同處理濃度下增加的死亡數(shù)不同；以溴氰菊酯為標(biāo)準(zhǔn)藥劑，其相對(duì)毒力指數(shù)最大.

尖喙庫(kù)蠓; 殺蟲劑; 毒力

尖喙庫(kù)蠓(Culicoidesoxystoma)是一種常見的吸血蠓，在我國(guó)各地廣泛分布，可傳播多種人獸共患疾病，其與原野庫(kù)蠓(C.homotomus)、日本庫(kù)蠓(C.nipponensis)在我國(guó)藍(lán)舌病疫區(qū)中的作用應(yīng)引起重視，予以重點(diǎn)防治[1].但目前有關(guān)吸血蠓對(duì)殺蟲劑的敏感性測(cè)定方法僅有少數(shù)報(bào)道[2-4]，尚無標(biāo)準(zhǔn)可依.本試驗(yàn)采用濾紙接觸法，測(cè)定不同殺蟲劑對(duì)尖喙庫(kù)蠓的毒殺效果，探討不同殺蟲劑在其田間防治中的適用性，以期為蠓媒疾病的預(yù)防控制奠定理論基礎(chǔ).

1　材料與方法

1.1供試?yán)ハx

供試尖喙庫(kù)蠓于2014年6～8月采自福建省三明市寧化縣(N25°58′- 26°40′，E116°22′-117°02′)，宿主為耕牛和家豬.早晨(6:00-9:00)和黃昏(16:30-18:30)采用60目絹紗制成的口徑20 cm、深60 cm、末端鈍圓的圓錐形捕蟲網(wǎng)捕獲蠓蟲，將蠓蟲集中于網(wǎng)底后帶回室內(nèi)，供測(cè)定用.待生物測(cè)定結(jié)束后，將供試?yán)ハx保存于95%乙醇溶液中，進(jìn)行形態(tài)及分子鑒定.試驗(yàn)條件：溫度(26±1) ℃，相對(duì)濕度(RH)(60±5)%.

1.2試驗(yàn)材料

器材：204.7 cm2(11.5 cm×17.8 cm)無菌濾紙若干張，無菌脫脂棉，量筒(100 mL)，刻度燒杯(100 mL)，移液槍及無菌槍頭(10、100、200、1 000 μL)，吸蟲管，定時(shí)器，計(jì)數(shù)器，藥劑接觸筒(圖1)，藥劑恢復(fù)筒(圖2).

試劑：選用近年來市面上應(yīng)用較為廣泛的毒死蜱(45%，華北制藥集團(tuán)愛諾有限公司)、敵敵畏(80%，陜西皇牌作物科技有限公司)、溴氰菊酯[25 g·L-1，拜耳作物科學(xué)(中國(guó))有限公司]、高效氯氰菊酯(4.5%，華北制藥集團(tuán)愛諾有限公司)和高氯·甲維鹽(2%，廣西安泰化工有限責(zé)任公司)等5種殺蟲劑作為供試藥劑.其中，2%高氯·甲維鹽是由1.8%高效氯氰菊酯+0.2%甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽混配而成.

1.3毒力測(cè)定

因目前尚無蠓類對(duì)殺蟲劑敏感性程度的生物學(xué)測(cè)定相關(guān)規(guī)范，本試驗(yàn)參照WHO[5]推薦的成蚊濾紙接觸法[6]進(jìn)行測(cè)定.

1.3.1試驗(yàn)藥紙的制備將殺蟲劑用蒸餾水稀釋成5～6個(gè)不同質(zhì)量濃度的工作液(表1).分別吸取2.04 mL供試藥劑均勻滴于不同的濾紙上，制備成約 0.01 mL·cm-2的藥劑接觸濾紙，并標(biāo)明殺蟲劑種名及其質(zhì)量濃度.用無菌水制備對(duì)照濾紙.制成的接觸濾紙?jiān)谑覝叵伦匀涣栏珊蠹纯墒褂?，并? h內(nèi)使用完畢.

表1　供試殺蟲劑質(zhì)量濃度

1.3.2試蟲與藥紙的接觸試驗(yàn)打開接觸筒螺紋蓋，將藥膜濾紙襯貼于筒中并將筒直立，紗網(wǎng)一端朝上為宜，用吸蟲管吸取試驗(yàn)所需吸血蠓并從膜處小心移入接觸筒中.因蟲體微小，操作困難，每個(gè)接觸筒設(shè)(30±5)只試蟲，每個(gè)處理和空白對(duì)照重復(fù)3次.分別記錄各組首只蠓蟲被擊倒時(shí)間和20、40、60 min的死亡蟲數(shù)，分別測(cè)定同一質(zhì)量濃度不同時(shí)間和同一時(shí)間不同質(zhì)量濃度下蠓的死亡情況.

1.3.3恢復(fù)觀察試蟲接觸藥紙1 h后，將接觸筒內(nèi)的蠓蟲移至恢復(fù)筒內(nèi)，并在紗網(wǎng)一端放置一團(tuán)浸有5%葡萄糖水的棉球，恢復(fù)飼養(yǎng)24 h后觀察蠓蟲死亡數(shù)，記錄和計(jì)算各處理組及對(duì)照組的蠓蟲死亡率.蟲體側(cè)躺或6足抽搐皺縮成團(tuán)，用毛筆尖輕觸蠓腹部后，不能翻身或爬行者則判定為死亡.

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

1.4.1統(tǒng)計(jì)公式根據(jù)公式(1)計(jì)算各處理組的死亡率.

P1=M/N×100

(1)

式中：P1為試蟲死亡率/%，M為死亡蟲數(shù)，N為供試蟲數(shù).

若對(duì)照組死亡率<5%，處理組的死亡率無需校正；若對(duì)照組死亡率為5%～20%時(shí)，處理組的死亡率用Abbott公式[7]校正，求出校正死亡率；對(duì)照組死亡率超過20%時(shí)，則該組試驗(yàn)作廢并重做.校正死亡率按照公式(2)計(jì)算.

P2=(P1-P0)/(1-P0)×100

(2)

式中：P2為校正死亡率/%；P1為處理死亡率；P0為對(duì)照死亡率.

1.4.2數(shù)據(jù)分析采用OriginLab 9.0分別繪制每種殺蟲劑的“濃度—首只蠓擊倒時(shí)間”圖，繪柱狀圖和折線圖比較試蟲接觸藥劑1 h至恢復(fù)24 h后的死亡率變化趨勢(shì)；通過SPSS 16.0單因素ANOVA分析各個(gè)處理的死亡率，對(duì)死亡總體情況做Prohit(概率單位回歸)模塊分析[8]，并計(jì)算毒力回歸方程、致死中濃度(LC50)、LC90、相關(guān)系數(shù)(R2)及95%置信區(qū)間(CI)，繪制不同藥劑濃度對(duì)數(shù)所對(duì)應(yīng)的概率單位曲線圖(LC-p)，通過比較95%置信區(qū)間下LC50、LC90的大小和是否重疊分析不同藥劑間的毒力差異.

1.4.3相對(duì)毒力指數(shù)計(jì)算以衛(wèi)生害蟲常用的殺蟲劑溴氰菊酯對(duì)蠓的LC50為標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)相對(duì)毒力指數(shù)為100，與其他藥劑的LC50比較，用公式(3)計(jì)算相對(duì)毒力指數(shù).

I=D/K×100%

(3)

式中：I為相對(duì)毒力指數(shù)；D為溴氰菊酯的LC50；K為其他各藥劑的LC50.

2　結(jié)果與分析

2.1供試?yán)ハx

經(jīng)形態(tài)及分子鑒定，共捕獲2 891只試蟲，包含2屬5種蠓.其中，尖喙庫(kù)蠓占97.56%，日本庫(kù)蠓占1%，琉球庫(kù)蠓(C.actoni)占0.67%，撫須庫(kù)蠓(C.palfier)占0.67%，拜氏鋏蠓(F.bikanni)占0.1%.

2.25種殺蟲劑對(duì)蠓的室內(nèi)毒性

由于各種殺蟲劑的擊倒活性不同，導(dǎo)致首只試蟲的死亡時(shí)間不同.試驗(yàn)表明：5種試劑在最高質(zhì)量濃度的擊倒時(shí)間順序?yàn)殇迩杈挣?敵敵畏<高效氯氰菊酯<高氯·甲維鹽<毒死蜱，提示溴氰菊酯對(duì)試蟲的擊倒活性最強(qiáng)，敵敵畏次之；而對(duì)于同一殺蟲劑，質(zhì)量濃度越高則擊倒活性越強(qiáng)(表2～6).

表2　不同質(zhì)量濃度毒死蜱在不同作用時(shí)間對(duì)蠓的毒力1)

1)同一質(zhì)量濃度不同作用時(shí)間、同一時(shí)間不同質(zhì)量濃度下的死亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).

表3　不同質(zhì)量濃度敵敵畏在不同作用時(shí)間對(duì)蠓的毒力1)

1)同一質(zhì)量濃度不同作用時(shí)間、同一時(shí)間不同質(zhì)量濃度下的死亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).

單因子方差分析表明，各個(gè)組分中P值均小于0.05(表2～6)，說明組內(nèi)重復(fù)性良好.就同一殺蟲劑而言，濃度與死亡率、作用時(shí)間呈現(xiàn)一定的梯度，同一濃度下死亡率隨作用時(shí)間的延長(zhǎng)而上升，不同濃度間高濃度效果優(yōu)于低濃度；就不同殺蟲劑而言，各個(gè)殺蟲劑間防治效果不盡相同，藥效的持續(xù)時(shí)間也有區(qū)別，總體來說，溴氰菊酯效果較好，敵敵畏和高氯·甲維鹽效果較不理想.

表4　不同質(zhì)量濃度溴氰菊酯在不同作用時(shí)間對(duì)蠓的毒力1)

1)同一質(zhì)量濃度不同作用時(shí)間、同一時(shí)間不同質(zhì)量濃度下的死亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).

表5　不同質(zhì)量濃度高效氯氰菊酯在不同作用時(shí)間對(duì)蠓的毒力1)

1)同一質(zhì)量濃度不同作用時(shí)間、同一時(shí)間不同質(zhì)量濃度下的死亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).

表6　不同質(zhì)量濃度高氯·甲維鹽在不同作用時(shí)間對(duì)蠓的毒力1)

1)同一質(zhì)量濃度不同作用時(shí)間、同一時(shí)間不同質(zhì)量濃度下的死亡率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05).

2.3試蟲接觸藥劑1 h至恢復(fù)24 h內(nèi)死亡率的變化

試驗(yàn)結(jié)果表明：隨著質(zhì)量濃度的增大，毒死蜱和高氯·甲維鹽處理組中試蟲的死亡數(shù)量增多，且高濃度的死亡蟲數(shù)多于低濃度(表2、表6)；溴氰菊酯和高效氯氰菊酯擊倒性較強(qiáng)，試蟲在接觸最高濃度(分別為250和450 mg·L-1)藥劑1 h后已基本死亡，因此，恢復(fù)24 h內(nèi)試蟲死亡數(shù)增加不多(表4～5)；而敵敵畏質(zhì)量濃度為100 mg·L-1時(shí)試蟲死亡率的增量(4.49%)略高于200 mg·L-1時(shí)的死亡率增量(3.43%)，移至恢復(fù)筒后仍有蠓相繼死亡(表3)，這可能是由于試蟲對(duì)該藥劑的短期分解和代謝能力有限，殺蟲劑在體內(nèi)滯留積累.

2.4毒力測(cè)定回歸分析

從表7可以看出，回歸方程線性良好.LC50大小順序?yàn)殇迩杈挣?毒死蜱<高效氯氰菊酯<高氯·甲維鹽<敵敵畏；LC90大小順序與LC50一致；LC50下的相對(duì)毒力指數(shù)(I)大小順序?yàn)殇迩杈挣?毒死蜱>高效氯氰菊酯>高氯·甲維鹽>敵敵畏.可見，采用接觸濾紙法測(cè)定時(shí)，試蟲對(duì)溴氰菊酯最敏感.

表7　5種殺蟲劑對(duì)蠓成蟲的毒力回歸方程

3　討論

本試驗(yàn)采用自制吸蟲管將蠓轉(zhuǎn)移至一定體積的接觸筒內(nèi)進(jìn)行生測(cè)，減小了試驗(yàn)操作對(duì)試蟲的傷害，有效減少了人為誤差，降低了試驗(yàn)成本.飽血的雌蠓在生測(cè)中容易掉落，死亡率偏高，因此不宜用于生測(cè)[4]；而用吸蟲管從捕蟲網(wǎng)中吸取供試蠓蟲時(shí)便于肉眼觀察試蟲是否飽血，從而大大減少了飽血對(duì)生測(cè)結(jié)果的影響.但由于蠓體型微小，每次試驗(yàn)的試蟲數(shù)量難以統(tǒng)一，只能控制在一個(gè)范圍內(nèi)，因此本試驗(yàn)每個(gè)重復(fù)的試蟲數(shù)量為(30±5)只.

實(shí)驗(yàn)室繼代飼養(yǎng)吸血蠓存在較大難度，卵和幼蟲也較難獲得，因此實(shí)驗(yàn)室開展蠓對(duì)藥劑的敏感性測(cè)定時(shí)主要選用成蟲.而在田間試驗(yàn)中，可采用施撒粉劑或顆粒劑的方式對(duì)蠓的孳生地進(jìn)行處理以毒殺其蛹和幼蟲[9].目前，室內(nèi)測(cè)定的殺蟲劑中毒死蜱[10]和溴氰菊酯[2]可有效用于蠓的田間防治，而其他殺蟲劑在野外的適用性有待進(jìn)一步驗(yàn)證.

本研究嘗試從有機(jī)磷殺蟲劑(2種)、擬除蟲菊酯類殺蟲劑(2種)和混配殺蟲劑(1種)中篩選出有效的殺蠓藥劑.結(jié)果表明，常用衛(wèi)生殺蟲劑溴氰菊酯對(duì)蠓的防治效果最佳(LC50=0.060 mg·L-1)，毒死蜱次之(LC50=0.588 mg·L-1)，而敵敵畏的LC50高達(dá)600.496 mg·L-1，提示田間不宜選用敵敵畏對(duì)蠓進(jìn)行防治；混配殺蟲劑高氯·甲維鹽的效果(LC50=99.670 mg·L-1)不及單配劑高效氯氰菊酯(LC50=1.741 mg·L-1)，這可能是由于高效氯氰菊酯是主要?dú)⑾x成分，其在混配殺蟲劑中含量較低.殺蟲活性隨著質(zhì)量濃度的增大而增強(qiáng)，但當(dāng)死亡率達(dá)到一定程度后隨著作用時(shí)間的延長(zhǎng)，殺蟲活性有所降低.擬除蟲菊酯類殺蟲劑對(duì)蠓的毒殺活性優(yōu)于有機(jī)磷殺蟲劑，且更為環(huán)保、安全；但不同品種的擬除蟲菊酯類殺蟲劑活性存在差異，在控制使用劑量的情況下，溴氰菊酯可作為蠓類防治的首選藥劑.

在害蟲防治中，藥劑使用劑量越高，安全系數(shù)就越低.隨著害蟲對(duì)藥劑抗性的增強(qiáng)，盲目加大用藥量不僅增加防治成本，而且可能污染環(huán)境和傷害天敵.因此，在蠓類的防治中，只有正確選擇殺蟲劑，并采用合理的施藥方式(如輪用和混用)，才能取得最佳防治效果.

[1] 王飛鵬,黃恩炯,蔡亨忠,等.吸血蠓及其傳播的疾病[J].昆蟲知識(shí),2010,47(6):1 270-1 273.

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(責(zé)任編輯:楊郁霞)

Toxicity of 5 insecticides toCulicoidesoxystomaKieffer (Diptera: Ceratopogonidae)

CHEN Min1, WANG Feipeng2, HUANG Xiangzhu3, HUANG Enjiong1

(1.Fujian International Travel Healthcare Center, Fuzhou, Fujian 350001, China; 2.Key Laboratory of Biopesticide and Chemical Biology, Ministry of Education, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou, Fujian 350002,China; 3.Sanming Entry-Exit Inspection & Quarantine Bureau, Sanming, Fujian 365000, China)

Field-collectedCulicoidesoxystomawere exposed to different concentrations of commercial insecticides, including chlorpyrifos, DDVP, deltamethyrin, beta-cypermethrin and beta-cypermethrin·emamectin benzoate via filter paper method, so that the toxicity effects of different insecticides onC.oxystomawere determined. Results showed that toxicities varied significantly among insecticides. Biting midges were the most susceptible to deltamethyrin (0.060 mg·L-1), and followed by chlorpyrifos (0.588 mg·L-1), beta-cypermethrin (1.741 mg·L-1), beta-cypermethrin·emamectin benzoate (99.670 mg·L-1), DDVP (600.496 mg·L-1) in a descending order. After exposed to insecticides for 1 h, tested midges were transferred to recovery chamber and observed for another 24 hours, increased mortality within this period was different under the different concentrations of each insecticide. Relative toxicity index was maximal when using deltamethrin as standard reagent.

Culicoidesoxystoma; insecticide; toxicity

2015-10-14

2016-04-06

福建省科技重點(diǎn)項(xiàng)目(2014I0001)；國(guó)家質(zhì)檢總局科技計(jì)劃項(xiàng)目(2015IK036).

陳敏(1977-)，女，副主任醫(yī)師，碩士.研究方向：流行病學(xué).Email：345868027@qq.com.通訊作者黃恩炯(1981-)，男，副主任技師.研究方向：媒介生物學(xué)及控制.Email：enjiong@163.com.

Q96

A

1671-5470(2016)03-0247-05

10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2016.03.002