王曉軍

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葛根芩連湯合煎、分煎及共煎對其有效化學成分的影響

王曉軍

平?jīng)鍪腥嗣襻t(yī)院，甘肅平?jīng)?44000

目的：觀察葛根芩連湯合煎、分煎及共煎對其有效化學成分的影響。方法：采用反相高效液相色譜法（RP-HPLC）檢測合煎、分煎及共煎提取下葛根芩連湯有效化學成分包括葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀含量的變化。結果：分煎劑中葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀平均百分含量為1.93％、0.60％、0.14％、0.07％，明顯高于合煎劑及共煎劑，合煎劑與共煎劑中葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀平均含量差別較小。結論：葛根芩連湯分煎劑中有效化學元素（葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬?。┖枯^高，比合煎、共煎質量更優(yōu)，合煎與共煎質量相當。

葛根芩連湯；合煎；分煎；共煎；化學成分

葛根芩連湯出自《傷寒論》，配伍以葛根為君藥，黃連、黃芩為臣藥，炙甘草為輔藥，主治身熱下利，濕熱所致腹瀉、痢疾，是治療急性腹瀉的經(jīng)典方劑。隨著現(xiàn)代醫(yī)學的發(fā)展，葛根芩連湯廣泛應用于內(nèi)、外、婦、兒等各科病證［1］。中藥復方由于多種藥材中含有不同化學成分，在不同的提取方法下可發(fā)生溶解度的改變或產(chǎn)生其他化學反應導致藥效不同［2］。本文主要探究不同提取方式對葛根芩連湯中葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀4種化學成分含量的影響，以期為葛根芩連湯的臨床應用提供實驗數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1 儀器①反相高效液相色譜儀（深圳輝衷機電設備有限公司）、ME155DU萬分之一電子天平（杭州匯爾儀器設備有限公司）、超聲波清洗器（連云港歐倍潔醫(yī)療設備有限公司）。

1.2 材料葛根（產(chǎn)地：安徽）、黃芩（產(chǎn)地：河北）、黃連（產(chǎn)地：四川）、炙甘草（產(chǎn)地：內(nèi)蒙古），均由平?jīng)鲨T康飲片廠提供。

1.3 標準品葛根素（批號：752-200108）、黃芩苷（批號：715-8501）、鹽酸小檗堿（批號：713-8702）、鹽酸巴馬?。ㄅ枺?10732-200907），均由中國藥品生物制品檢定所提供。

1.4 試劑甲醇色譜純（上海振興化工一廠）、乙醇色譜純（上海振興化工一廠）、鹽酸分析純（天津市科密歐學試劑開發(fā)中心）、磷酸分析純（廣東省光華試劑有限公司）。以上各藥均按2010版藥典方法進行含量測定。

1.5 樣品制備

1.5.1 合煎劑（供試品）制備精密稱取葛根8 g，及用400 mL蒸餾水浸泡30 min后先煎20 min，然后加黃連、黃芩、炙甘草各3 g，繼續(xù)加熱至沸騰，沸騰30 min后過濾。藥渣再加300 mL蒸餾水，加熱至沸騰，沸騰20 min后過濾，混合2次濾液，去渣濃縮，加蒸餾水調(diào)整至中藥濃度為0.1 kg/L，精密吸取1 mL樣品置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋，搖勻，離心10 min后分出上清液，即成10 g/L的湯劑。

1.5.2 分煎劑（供試品）制備按1.5.1藥量精密稱取藥材，將4味藥材置于不同燒杯中，分別加100 mL蒸餾水浸泡30 min后煎煮20 min過濾。藥渣再加100mL蒸餾水煎煮20 min，然后將4味藥材2次的煎煮液混合，加蒸餾水調(diào)整至中藥濃度為0.1 kg/L，精密吸取1 mL置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋，搖勻，離心10 min后分出上清液，即成10 g/L的湯劑。

1.5.3 共煎劑（供試品）制備按1.5.1藥量精密稱取藥材，將4味藥材置于同一燒杯中煎煮2次，時間和加水量同1.5.1，混合2次濾液，去渣濃縮，加蒸餾水調(diào)整至中藥濃度為0.1 kg/L，精密吸取1 mL置10 mL量瓶中，用甲醇稀釋，搖勻，離心10 min后分出上清液，即成10 g/L的湯劑。

1.5.4 對照品制備精密稱取葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀標準品適量，分別置于10 mL的燒杯中，加甲醇溶解并稀釋至一定濃度（葛根素0.7 g/L、黃芩苷0.16 g/L、鹽酸小檗堿0.09 g/L、鹽酸巴馬汀0.03 g/L）作為對照品湯劑。

1.6 色譜條件選擇色譜柱：CAPCELL PAK C18 UG120。流動相及檢測波長，葛根素∶甲醇-水（25∶75），250 nm；黃芩苷∶甲醇-水（47∶53），280 nm；鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀∶乙腈-0.02 mol/L磷酸二氫鉀（35∶65），270 nm。流速為1 mL/min，柱溫為25℃，柱壓為90-100 Bar。

2 實驗方法及結果

2.14 種化學成分標準曲線方程及線性方程見表1。精密吸取各對照品溶液，按各成分的色譜條件測定峰面積（RSD），以峰面積值為縱坐標（Y），對照品進樣量（μL）為橫坐標（X），進行線性回歸。

2.2 精密度試驗精密選取葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀對照品湯劑，連續(xù)進樣6次。按各成分的色譜條件測定RSD分別為0.2％～1.7％之間，表明儀器精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性試驗精密選取葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀供試品湯劑，連續(xù)測試6次，每次間隔2 h。按各成分的色譜條件測定穩(wěn)定性RSD在0.4％～0.7％之間，表明在測定時間內(nèi)4種成分穩(wěn)定性良好。

2.4 重復性試驗精密選取葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀供試品湯劑，依照線性關系與標準曲線連續(xù)測定6次，以RSD計算，重現(xiàn)性RSD在0.5％～0.8％之間，表明重復性良好。

2.5 加樣回收試驗精密選取葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀供試品湯劑，精密加入對照品適量，按供試品溶液制備方法處理，按各成分的色譜條件，并依照線性關系與標準曲線連續(xù)測定6次，其加樣回收率分別為99.99％（RSD為0.49）、100％（RSD為0.13）、99.96％（RSD為0.20）、99.87％ （RSD為0.34）。

表14 種化學成分標準曲線方程及線性方程

2.6 葛根芩連湯合煎劑、分煎劑及共煎劑4種有效成分含量比較見表2。分煎劑中葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀平均含量高于合煎劑及共煎劑。合煎劑與共煎劑中4種成分含量差別不大。

表2 葛根芩連湯合煎劑、分煎劑及共煎劑4種有效成分含量比較％

3 討論

葛根芩連湯在《傷寒論·太陽篇》中有“以水八升，先煮葛根，減二升，納諸藥，煮取二升，去渣，分溫再服”的配制方法記載，也有“葛根解肌于表，芩、連清熱于里，甘草則合表里而并和之耳。蓋風邪處中，病位在表，一入于里，則變?yōu)闊嵋印９手伪碚?，必以葛根之辛涼，治里者，必以黃連之苦寒也”的藥效描述。已有研究證實，該方治療糖尿病、急性腸炎、細菌性痢疾等疾病療效顯著［3］。

本研究采用RP-HPLC，選用葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀4種指標性成分對葛根芩連湯進行含量測定。在其色譜條件下，這4種成分與其他成分間均有很好的分離度。方法學考察提示此方法在較大范圍內(nèi)線性關系良好，葛根芩連湯中葛根素、黃芩苷等指標成分含量均在線性范圍之內(nèi)。結果顯示，分煎劑中葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀平均含量明顯高于合煎劑及共煎劑，合煎劑與共煎劑中葛根素、黃芩苷、鹽酸小檗堿、鹽酸巴馬汀平均含量差別較小。因此，臨床上推薦分煎制備葛根芩連湯，以便更好地保留其有效化學成分，從而達到提高葛根芩連湯內(nèi)在質量的目的。另外，葛根芩連湯不同煎劑制備過程中各藥物有效化學成分是否會產(chǎn)生拮抗作用，以及煎制方式是否會影響藥效的吸收仍有待研究。

［1］張啟云，徐良輝，李冰濤，等.復方葛根芩連湯多效應成分分類整合藥代動力學研究［J］.中國臨床藥理學與治療學，2011，16（1）：51-56.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部［M］.北京：化學工業(yè)出版社，2000：273-274.

［3］趙林華，姬航宇，冀博文，等.葛根芩連湯治療糖尿病理論探討［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2012，27（2）：280-283.

（責任編輯：吳凌，劉迪成）

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0256-7415（2016）08-0218-02

10.13457/j.cnki.jncm.2016.08.095

2016-04-15

王曉軍（1970-），男，副主任中藥師，研究方向：中藥學。