彭志華，韓霞，楊麗霞，徐娟，謝宇鋒，金素芳深圳市福田區(qū)中醫(yī)院，廣東深圳518034

針灸配合中藥干預(yù)輸卵管炎性阻塞性不孕癥sICAM-1蛋白表達(dá)的研究

彭志華，韓霞，楊麗霞，徐娟，謝宇鋒，金素芳
深圳市福田區(qū)中醫(yī)院，廣東深圳518034

目的：觀察針灸配合中藥對輸卵管阻塞炎性不孕癥sICAM-1蛋白表達(dá)的影響。方法：選取Wistar雌性大鼠68只，將其隨機(jī)分成空白對照組、模型組、通孕方組、針灸組、通孕方加針灸組和頭孢呋辛加甲硝唑組共6組，造模成功后連續(xù)治療30天，然后采用免疫組化方法檢測各組大鼠輸卵管sICAM-1蛋白的表達(dá)。結(jié)果：與空白組比較，造模后各組大鼠sICAM-1蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)均增高，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），通孕方加針灸組sICAM-1蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)較其他對照組降低，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論：針灸聯(lián)合中藥治療輸卵管炎性阻塞性不孕癥可抑制sICAM-1蛋白的表達(dá)，促進(jìn)炎癥吸收與消散，為臨床上針灸配合中藥治療輸卵管阻塞炎性不孕癥提供了實(shí)驗(yàn)理論依據(jù)。

輸卵管炎性阻塞性不孕癥；針灸；通孕方；sICAM-1蛋白；動物實(shí)驗(yàn)；大鼠

輸卵管炎性阻塞性不孕是指因致病菌作用于輸卵管使之發(fā)生肥大、增粗、滲出、狹窄、粘連以致卵子不能正常運(yùn)送，而導(dǎo)致不孕的一種病癥，是女性不孕癥的重要原因之一，急慢性炎癥均能導(dǎo)致輸卵管組織功能的降低，約占女性不孕癥的25％～50％，且呈逐年上升趨勢，嚴(yán)重影響女性身心健康［1～3］。針灸治療不孕癥歷史悠久且療效肯定，尤其在對促排卵的治療方面有其獨(dú)特的優(yōu)勢［4］。本研究建立了大鼠模型，造模成功后連續(xù)治療30天，然后采用免疫組化方法檢測各組大鼠輸卵管sICAM-1蛋白的表達(dá)，以期闡明針灸聯(lián)合中藥干預(yù)輸卵管炎性阻塞性不孕癥的作用機(jī)理，結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物70日齡的Wistar雌性大鼠58只，重量180～240 g，采用顆粒飼料常規(guī)飼養(yǎng)。大鼠由廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)室提供，動物合格證號SCXK（粵）2013-0020，SPF動物實(shí)驗(yàn)室：廣州中醫(yī)藥大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心SPF級動物室，環(huán)境許可證號：SYXK（粵）2013-001。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物通孕方組方：赤芍、丹參各15 g，當(dāng)歸、黃芪、牡丹皮、白術(shù)、桂枝、桃仁、三棱、莪術(shù)各10 g，甘草6 g。水煎30 min后，濾取煎液，消毒，滅菌，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 造模方法［5～6］從68只Wistar雌性大鼠中隨機(jī)選取10只作為空白對照組，其他58只按照以下方法進(jìn)行造模：用體積分?jǐn)?shù)為10％烏拉坦（劑量按10 mL/kg）腹腔注射麻醉大鼠，待麻醉生效后，將大鼠固定于操作臺上，無菌消毒后，在下腹部正中切開長約0.8～1 cm的切口，開腹尋找大鼠子宮雙角，分別在子宮角近輸卵管處進(jìn)針，向輸卵管-卵巢方向注射細(xì)菌懸液0.15 mL（細(xì)菌溶液組成如下：大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌按2∶1∶1用無菌生理鹽水稀釋，配成濃度為3.0×109mL-1混合菌），手術(shù)過程盡量避免傷到其他組織，縫合切口后，恢復(fù)飲水，正常清潔飼養(yǎng)。

1.3.2 分組及處置方法空白對照組10只大鼠，另外58只造模大鼠，在造模術(shù)后第5、10、15、20天分別隨機(jī)處死2只進(jìn)行病理學(xué)觀察，確認(rèn)模型復(fù)制成功后，取剩余造模組大鼠50只（剔除個體差異過大者）隨機(jī)均分為5組。①模型組：標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)，造模后第2天開始連續(xù)生理鹽水灌胃30天，每次10 mL，每天2次；自制大鼠固定器將大鼠束縛固定20 min，每天1次，連續(xù)30天。②通孕方組：標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)，造模后第2天開始連續(xù)中藥通孕方煎液灌胃30天，每次10 mL，每天2次；自制大鼠固定器將大鼠束縛固定20 min，每天1次，連續(xù)30天。③針灸組：標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)，造模后第2天開始連續(xù)生理鹽水灌胃30天，每次10 mL，每天2次；自制大鼠固定器將大鼠束縛固定。取穴：關(guān)元、血海（雙側(cè)，瀉法）、三陰交（雙側(cè)，瀉法）、太沖（雙側(cè)，瀉法）；按照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［7］標(biāo)準(zhǔn)取穴，局部用75％酒精常規(guī)消毒后，選用環(huán)球牌0.3 mm× 25 mm毫針，刺入約0.5 cm，針刺得氣后留針20 min，每天1次，連續(xù)治療30天。④通孕方加針灸組：標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)，造模后第2天開始連續(xù)中藥通孕方煎液灌胃30天，每次10 mL，每天2次，針灸干預(yù)方案同針灸組。⑤頭孢呋辛加甲硝唑組：標(biāo)準(zhǔn)飼養(yǎng)，造模后第2天開始連續(xù)頭孢呋辛加甲硝唑混合液（頭孢呋辛0.175 g/kg加甲硝唑0.02 g/kg）灌胃30天，每次10 mL，自制大鼠固定器將大鼠束縛固定20 min，每天1次，連續(xù)30天。

1.3.3 免疫組化法檢測處死各組大鼠后迅速解剖，觀察輸卵管色澤、形狀，及其與周圍組織粘連、積液等情況，取出雙側(cè)輸卵管，常規(guī)石蠟切片，免疫組化法檢測sICAM-1蛋白的表達(dá)。采集圖像、分析數(shù)據(jù)。

2 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)資料的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以（±s）表示，當(dāng)數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布且方差齊時，采用單因素方差分析進(jìn)行比較，組間兩兩比較采用SNK檢驗(yàn)；若方差不齊時，采用Tambane法進(jìn)行兩兩比較。

3 研究結(jié)果

各組大鼠sICAM-1蛋白陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)比較，見表1。造模后大鼠sICAM-1蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)均增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。與模型組比較，經(jīng)過干預(yù)后通孕方組、針灸組、通孕方加針灸組、頭孢呋辛加甲硝唑組sICAM-1蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)降低，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與頭孢呋辛加甲硝唑組比較，通孕方組、針灸組sICAM-1蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)相當(dāng)，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；但通孕方加針灸組sICAM-1蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)降低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與通孕方加針灸組比較，通孕方組、針灸組sICAM-1蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)降低幅度較小，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

表1 各組大鼠sICAM-1蛋白陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)比較（±s）

表1 各組大鼠sICAM-1蛋白陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)比較（±s）

注：各組數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)性檢驗(yàn)及方差齊性檢驗(yàn)提示正態(tài)分布但方差不齊，故采用Tambane法進(jìn)行方差分析，F(xiàn)=795.31，P=0.000；與空白組比較，①P=0.000＜0.05；與模型組比較，②P=0.000＜0.05；與頭孢呋辛加甲硝唑組比較；③P=1.000＞0.05；④P=0.000＜0.05；與通孕方加針灸組比較，⑤P=0.000＜0.05

組別空白組模型組通孕方組針灸組通孕方加針灸組頭孢呋辛加甲硝唑組n 10 10 10 10 10 10 sICA M-1蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞-85.90±3.78①20.40±3.86①②③⑤19.2±4.29①②③⑤11.5±2.95①②④19.70±3.59①②

5 討論

輸卵管炎性阻塞性不孕散見于中醫(yī)學(xué)不孕、癥瘕、無子、絕嗣、斷續(xù)等疾病中［8］。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病因沖任空虛，外邪乘虛而入所致，若邪氣內(nèi)聚久而不去，則易致氣滯血瘀、瘀血阻滯胞宮，氣血運(yùn)行不暢，胞絡(luò)閉塞精卵運(yùn)行受阻，兩精不能結(jié)合而導(dǎo)致不孕，發(fā)病機(jī)制均與瘀滯有關(guān)，正如《婦人良方》指出：“婦人病皆由沖任勞損而致”，《景岳全書·婦人規(guī)》曰：“瘀血留滯作，唯人有之，其證或由經(jīng)期，或由產(chǎn)后，凡內(nèi)傷生冷，或外受風(fēng)寒，或憤怒傷肝，氣逆而血留……總有血動之時，余血未凈，而一有所逆，則留滯日積，而漸以成”。氣血瘀滯可影響沖任及臟腑功能，影響經(jīng)脈暢通，妨礙精卵結(jié)合。因此，行氣活血、化瘀通絡(luò)應(yīng)是治療此類不孕癥的總則［9］。我國古代醫(yī)籍記載著豐富的針灸治療不孕癥的遣方用穴經(jīng)驗(yàn)，《針灸大成》云：“關(guān)元主月經(jīng)不通，絕嗣不生”，現(xiàn)代臨床實(shí)驗(yàn)研究顯示，針灸治療不孕癥療效確切［10］，故用關(guān)元能調(diào)理沖任，血海是足太陰脾經(jīng)的穴位，能活血祛瘀，祛瘀有利于炎癥消除；太沖為足厥陰肝經(jīng)原穴，可行氣通絡(luò)，活血化瘀。三陰交是足三陰經(jīng)交會穴，也是婦科疾病經(jīng)驗(yàn)用穴，臨床廣泛用于各類婦產(chǎn)科病癥。

通孕方由《醫(yī)林改錯》中的少腹逐瘀湯化裁而來，為本院中醫(yī)婦科經(jīng)驗(yàn)用方，臨床應(yīng)用多年，取得較好療效，方中丹參與赤芍共為君藥以活血祛瘀，赤芍有活血通經(jīng)、散瘀消癥的作用，配伍桃仁應(yīng)用可增強(qiáng)活血化瘀之功，三棱辛散，既能破血逐瘀，又能行氣止痛，與莪術(shù)相須為用，其中，三棱偏于破血，莪術(shù)偏于破氣，四君藥相須為用，增強(qiáng)活血化瘀療效，丹參能活血調(diào)經(jīng)，為活血化瘀之要藥，當(dāng)歸補(bǔ)血和血，調(diào)經(jīng)止痛，牡丹皮活血散瘀。黃芪大補(bǔ)元?dú)?、扶正固本；黃芪、白術(shù)相配，既健脾清熱，又助孕安胎，治愈后不影響服藥當(dāng)月受孕，且有安胎功用，桂枝升發(fā)陽氣，溫通經(jīng)絡(luò)。甘草為使，具有調(diào)和諸藥之功效，諸藥合用，共奏活血化瘀、通經(jīng)活絡(luò)、助孕安胎之效，是理想的治療輸卵管阻塞性不孕的中藥方劑。

sICAM-1是免疫球蛋白基因超家族成員［6］，位于多種細(xì)胞表面，可介導(dǎo)細(xì)胞間黏附和信號傳遞，參與細(xì)胞間，及細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間、效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞的相互作用，參與感染、炎癥、變態(tài)反應(yīng)等過程，多種炎癥均有sICAM-1蛋白表達(dá)增加現(xiàn)象。本研究結(jié)果表明：針灸配合中藥通孕方治療本病可顯著降低sICAM-1蛋白表達(dá)陽性細(xì)胞計(jì)數(shù)，抑制炎癥引起的sICAM-1蛋白表達(dá)異常升高，從而發(fā)揮其抗炎作用，療效優(yōu)于西藥治療組，且無西藥的毒副作用，是治療本病的較好方法，值得在臨床進(jìn)一步研究。

［1］宋素艷，唐玉紅.自擬中藥分期治療輸卵管阻塞性不孕50例［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，18（11）：108.

［2］樂杰.婦產(chǎn)科學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2008：351.

［3］楊曉梅，張奕，張淑華.輸卵管阻塞性不孕的中西醫(yī)治療進(jìn)展［J］.中醫(yī)學(xué)報(bào)，2010，25（3）：595-596.

［4］常福麗，李淑玲.針灸治療不孕癥臨床研究概況［J］.中醫(yī)雜志，2008，49（8）：754-757.

［5］趙廣興，王春田，馬寶璋，等.大鼠輸卵管炎性不孕癥模型的建立［J］.中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2004，14（1）：23-26.

［6］邱宇清.活血助孕方對輸卵管炎性不孕大鼠sICAM-1表達(dá)的研究［J］.中醫(yī)學(xué)報(bào)，2012，27（2）：185.

［7］李忠仁.實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)［M］.2版.北京：中國中醫(yī)藥出版社，2007.

［8］楊新鳴，侯麗輝，吳效科.妍婷顆粒對輸卵管炎性不孕大鼠模型ICAM-1的影響［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)：中醫(yī)臨床版，2006，13（2）：1-4.

［9］羅亞萍，馬惠榮，杜惠蘭，等.逍遙丸對雄激素致無排卵大鼠卵巢功能的影響［J］.河北中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，2009，24 （3）：33-34.

［10］吳茗玉，鄧小娟.中藥配合針灸治療輸卵管阻塞性不孕癥40例臨床觀察［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，19（6）：61-62.

（責(zé)任編輯：劉淑婷）

Study of Acupuncture Therapy Combined with Chinese Medicine Intervening sICAM-1 Protein Expression of Salpingemphraxis Inflammatory Infertility

PENG Zhihua，HAN Xia，YANG Lixia，XU Juan，XIE Yufeng，JIN Sufang

Objective：To observe effect of acupuncture therapy combined with Chinese medicine（CM）on soluble intercellular cell adhesion molecule（sICAM-1）protein expression of salpingemphraxis inflammatory infertility.Methods：Selected 68 cases of Wistar female rats and divided them into blank group，model group，Tongyun fang group，acupuncture group，Tongyun fang+acupuncture group，cefuroxime+metronidazole group randomly，total 6 groups.Continues treat for 30d after molding successfully，then detected sICAM-1 protein expression of rats'oviduct in every group by immunohistochemicalmethod.Results：After molding，counting of sICAM-1 protein expression positive cell of rats in every molding group were increased obviously，counting of sICAM-1 protein expression positive cell in Tongyun fang+acupuncture group was lower than that in other groups，difference being significant（P＜0.05）.Conclusion：Acupuncture therapy combined with CM for salpingemphraxis inflammatory infertility can inhibit sICAM-1 protein expression，promote absorption and disappearance of inflammation.It provides experimental theory basis for acupuncture therapy combined with CM for salpingemphraxis inflammatory infertility clinically.

Acupuncture；Tongyun fang；Salpingemphraxis inflammatory infertility；soluble Intercellular cell adhesion molecule（sICAM-1）protein

R285.5

A

0256-7415（2016）08-0306-03

10.13457/j.cnki.jncm.2016.08.134

2016-03-28

廣東省中醫(yī)藥局科研項(xiàng)目（20131035）；深圳市科技計(jì)劃基礎(chǔ)研究項(xiàng)目（JCYJ20140414145007219）

彭志華（1976-），女，醫(yī)學(xué)碩士，主治醫(yī)師，主要從事針灸臨床工作。

韓霞，E-mail：957848451@qq.com。