B群鏈球菌SrtC基因多態(tài)性與定植/侵襲力的相關(guān)性研究△

唐敏兒1鄧志聲1黃冬梅1江新湄2覃麗軍2（1.佛山市南海經(jīng)濟開發(fā)區(qū)人民醫(yī)院檢驗科佛山528222；2.佛山市南海經(jīng)濟開發(fā)區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科佛山528222）

目的：探討B(tài)群鏈球菌SrtC基因多態(tài)性與定植/侵襲力的相關(guān)性。方法：將我院2015年10月～2016年5月收治的500例圍產(chǎn)期女性分為8組，生殖道定植B群鏈球菌有126例，占25.2%，Ⅰ型菌22例，占4.4%，Ⅱ型菌18例，占3.6%，Ⅲ型菌48例，占9.6%，Ⅳ型菌12例，占2.4%，Ⅴ型菌7例，占1.4%，Ⅵ型菌10例，占2%，Ⅶ菌9例，占1.8%。生殖道未定植B群鏈球菌有374名，作為對照組。結(jié)果：在7型菌中，Ⅲ型菌毒力最強，定植/侵襲力最大，7組實驗組和對照組比較，定植/侵襲力最小。結(jié)論：B群鏈球菌StrC基因多態(tài)性與定植/侵襲力有關(guān)。

B群鏈球菌 SrtC基因多態(tài)性 定植 侵襲力

B群鏈球菌（GBS）又稱無乳鏈球菌，屬β溶血性鏈球菌，它的毒力與特異的莢膜多糖抗原、脂磷壁酸、神經(jīng)氨酸酶等有關(guān)，主要通過抗吞噬作用，或增強細菌對組織細胞的黏附發(fā)揮侵襲力，Ⅲ型含脂磷酸和神經(jīng)氨酸酶最多，毒力最強［1～2］。B群鏈球菌是圍產(chǎn)期女性嚴重感染的主要病原菌之一，B群鏈球菌主要定植于陰道和肛門。B群鏈球菌可引發(fā)早產(chǎn)、晚期流產(chǎn)、胎膜早破、胎兒生長受限等一系列母嬰不良結(jié)局，被列為美國圍產(chǎn)期感染的首要原因，長期以來，我國對此并不重視。B群鏈球菌篩查技術(shù)在一定程度上降低了新生兒早發(fā)型B群鏈球菌感染，不過也帶來了一些副作用，比如抗生素濫用、耐藥率增加、新生兒G-感染率上升。現(xiàn)在新研究發(fā)現(xiàn)的生物學(xué)標記為人類的醫(yī)學(xué)發(fā)展帶來了新希望，為孕婦預(yù)防性使用抗生素提供依據(jù)，可通過該方法判定檢出菌珠的定植或侵襲能力，大幅度減少濫用抗生素引發(fā)的不良后果。

1　對象與方法

1.1臨床資料：選擇2015年10月～2016年5月收治的圍產(chǎn)期女性500例，年齡21～39歲，平均年齡29.2歲，孕齡35～37周，詳細記錄每位孕婦的病史，羅列引發(fā)B群鏈球菌定植的危險因素。排除過去2周使用過抗生素的圍產(chǎn)期女性。研究對象均需簽署知情同意書。

1.2研究方法：使用消毒窺陰器，取3mL無菌0.9g/dl生理鹽水反復(fù)沖洗陰道。在陰道取分泌物，并做病理檢查分型。探究各型與定植與侵襲力的相關(guān)性?，F(xiàn)有檢測方法：1.細菌鑒定儀法：它的優(yōu)點是準確度高，缺點是費用較高，不能直接上標本，純菌培養(yǎng)時間長。2.普通培養(yǎng)加生化鑒定法：此法是檢測的金標準。優(yōu)點是特異性好，缺點是需要細菌純培養(yǎng)，鑒定試驗煩瑣。3.分子生物學(xué)方法（PCR法）：它的優(yōu)點是快速敏感，缺點是假陽性較難排除，對人員和設(shè)備要求較高。4.免疫學(xué)方法（層析法）：優(yōu)點是特異性好，缺點是靈敏度低。5.乳膠凝集法：它的優(yōu)點是特異性好，缺點是細菌純化培養(yǎng)時間長。6.顯色培養(yǎng)基：它的優(yōu)點是靈敏度高，特異性好，可直接上標本，使用方法和傳統(tǒng)培養(yǎng)方法相同，無特殊要求，簡便易行［3～4］。

1.3評估指標：B群鏈球菌與定植或侵襲力的相關(guān)性。它的毒力與特異的莢膜多糖抗原、脂磷壁酸、神經(jīng)氨酸酶等有關(guān)，主要通過抗吞噬作用，或增強細菌對組織細胞的黏附發(fā)揮侵襲力，Ⅲ型含脂磷酸和神經(jīng)氨酸酶最多，毒力最強。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法：采用SPSS18.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以均數(shù)±標準差（）表示，采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2　結(jié)果

表1　B群鏈球菌SrtC基因多態(tài)性與定植/侵襲力的相關(guān)性

在7型菌中，Ⅲ型菌毒力最強，定植/侵襲力最大，7組實驗組和對照組比較，定植/侵襲力最小。

3　討論

B群鏈球菌（GBS）又名無乳鏈球菌，屬于β溶血性鏈球菌，它的毒力大小與特異的莢膜多糖抗原、脂磷壁酸、神經(jīng)氨酸酶數(shù)量等有關(guān)，通過抗吞噬作用，或增強細菌對組織細胞的黏附作用發(fā)揮侵襲力，因Ⅲ型含脂磷酸和神經(jīng)氨酸酶最多，所以毒力最強。B群鏈球菌是圍產(chǎn)期女性嚴重感染的主要病原菌之一，研究表明，新生兒早發(fā)型感染的病死率高達50%～80%，圍生期的女性預(yù)防性使用抗生素可有效地減少新生兒早發(fā)型GBS敗血癥的發(fā)?。?～6］，但存在一些缺點，根據(jù)B群鏈球菌在孕婦中的攜帶方式可以分為三種，一過性、間歇性、長期定植。如果圍產(chǎn)期婦女GPS為陽性，并不能代表此婦女長期攜帶B群鏈球菌或是B群鏈球菌感染者，只能代表此時刻攜帶B群鏈球菌，不能下確切得臨床診斷。B群鏈球菌從母嬰傳播途徑來看，傳播率為30% ～50%，帶菌的新生兒的發(fā)病率為1%左右，因此圍產(chǎn)期女性檢查出陽性可能會發(fā)生抗生素濫用，嚴重影響醫(yī)學(xué)事業(yè)的發(fā)展。B群鏈球菌是革蘭氏陽性菌，呈現(xiàn)鏈狀排列方式，常見于人體腸道中，易致新生兒敗血癥。該病有早發(fā)性感染與遲發(fā)性感染兩種，前者是垂直感染，發(fā)病期是新生兒一周內(nèi)，后者發(fā)病期是新生兒一周后，主要是接觸不潔的手所致。GBS感染誘發(fā)圍產(chǎn)期女性多種疾病。圍產(chǎn)期女性感染表現(xiàn)為菌血癥、泌尿系統(tǒng)感染、胎膜感染、子宮內(nèi)膜感染和創(chuàng)傷感染。

胎膜早破的最主要因素是B群鏈球菌感染［7］。由于對絨毛膜較強的吸附和穿透能力，短時間內(nèi)即可吸附于人體內(nèi)，繼而入侵，產(chǎn)生的蛋白水解酶直接侵襲降低胎膜局部張力，致胎膜早破。外國研究報道顯示，尿感染GBS的胎膜早破發(fā)生率高達30%左右。羊膜腔感染也是B群鏈球菌感染的直接結(jié)果。分析表明B群鏈球菌+是引起絨毛膜羊膜炎的重要危險因素。B群鏈球菌+圍產(chǎn)期女性早產(chǎn)合并低出生體重兒的可能性大大增加。產(chǎn)褥感染的主要致病菌是B群鏈球菌。產(chǎn)褥感染定義為圍產(chǎn)期女性分娩時及產(chǎn)褥期生殖道受病原體感染，引起局部和全身的炎性反應(yīng)。B群鏈球菌篩查技術(shù)在一定程度上降低了新生兒早發(fā)型B群鏈球菌感染率，不過也帶來了一些副作用，比如抗生素濫用、耐藥率增加、新生兒G-感染率上升。

不同種類的微生物（細菌）常從不同的環(huán)境入侵人體，并能在人體一定部位停留、生長、繁殖的現(xiàn)象通常稱為“細菌定植”。人體不斷供給營養(yǎng)物質(zhì)給微生物，定植的微生物不斷生長繁殖，感染人體。細菌定植的條件有三，細菌的黏附力是細菌定植的基礎(chǔ)。一旦細菌牢固黏附機體的黏膜上皮細胞，就不會脫落。適宜的環(huán)境是細菌定植的必要條件。電解質(zhì)平衡，酸堿度合適和充足的營養(yǎng)物質(zhì)等提供定植細菌生長需要。大基數(shù)是保證細菌定植成功的重要因素。少量細菌易脫落，大量細菌因為數(shù)量多不易脫落。微生物在人體定植取決于兩方面。一方面是外部條件，另一方面是人體存在定植抵抗力。人體對于外來細菌的定植有一定抵抗力，產(chǎn)生對抗。細菌侵襲力是細菌突破宿主皮膚、黏膜生理屏障等免疫防御機制，進入機體定居，繁殖和擴散的能力。B群鏈球菌主要定植于陰道和肛門。B群鏈球菌可引發(fā)早產(chǎn)、晚期流產(chǎn)、胎膜早破、胎兒生長受限等一系列不良后果，在美國被列為圍產(chǎn)期感染的首要原因，但是長期以來，我國對此并不重視?，F(xiàn)在新研究發(fā)現(xiàn)的生物學(xué)標記為人類的醫(yī)學(xué)發(fā)展帶來了新希望，為孕婦預(yù)防性使用抗生素提供依據(jù)，可通過該方法判定檢出菌株的定植或侵襲能力，大幅度減少濫用抗生素引發(fā)的不良后果。

細菌鑒定儀，即自動微生物鑒定儀，鑒定系統(tǒng)可鑒定包括細菌、酵母和真菌在內(nèi)約2000種微生物，方便應(yīng)用于各個領(lǐng)域的微生物實驗室，用于對微生物的鑒定，是美國Biolog公司微生物鑒定領(lǐng)域的新技術(shù)新產(chǎn)品。B群鏈球菌在顯色培養(yǎng)基上顯示為紅色。細菌鑒定儀法優(yōu)點是準確度高，可作為臨床依據(jù)，缺點是費用較高，不能滿足廣大民眾的要求，不能直接上標本，純菌培養(yǎng)時間長，不能作為急癥檢查方法。普通培養(yǎng)加生化鑒定法是檢測的金標準，臨床應(yīng)用廣泛，優(yōu)點是特異性好，臨床上較易識別，缺點是需要細菌純培養(yǎng)，鑒定試驗煩瑣，操作困難，也不適合急癥檢查。分子生物學(xué)方法（PCR法）優(yōu)點是快速敏感，適用于急癥的檢查，缺點是假陽性較難排除，容易與真陽性混淆，對人員和設(shè)備要求較高。免疫學(xué)方法（層析法）優(yōu)點是特異性好，是醫(yī)者臨床的常用診查方法，缺點是靈敏度低，操作不太方便。乳膠凝集法優(yōu)點是特異性好，缺點是細菌純化培養(yǎng)時間長。顯色培養(yǎng)基優(yōu)點是靈敏度高，特異性好，可直接上標本，使用方法和傳統(tǒng)培養(yǎng)方法相同，無特殊要求，簡便易行。PCR法和顯色培養(yǎng)基的靈敏度高，免疫層析法的靈敏度低。細菌鑒定儀法、普通培養(yǎng)加生化試驗法、乳膠凝集法、顯色培養(yǎng)基的特異性高，PCR法的特異性低。普通培養(yǎng)加生化試驗法、PCR法、免疫層析法、顯色培養(yǎng)基能直接上標本，細菌鑒定儀法與乳膠凝集法不能直接上標本。PCR法、免疫層析法出結(jié)果耗時短，顯色培養(yǎng)基出結(jié)果耗時＜24h，細菌鑒定儀法、乳膠凝集法＞24h，普通培養(yǎng)加生化試驗法＞48h。細菌鑒定儀法、免疫層析法、乳膠凝集法、顯色培養(yǎng)基操作簡單，普通培養(yǎng)加生化實驗法、PCR法操作不簡單，煩瑣，細菌鑒定儀法、PCR法儀器昂貴，普通培養(yǎng)加生化試驗法、免疫層析法、乳膠凝集法、顯色培養(yǎng)基儀器不貴，廣大民眾易于接受。

基因多態(tài)性的定義為在一個物種內(nèi)，共存兩種或兩種以上間斷的變異型或基因型或等位基因，亦名遺傳多態(tài)性?；蚨鄳B(tài)性現(xiàn)象普遍?；蚪M中重復(fù)序列數(shù)、單基因變異、雙等位基因交替均可導(dǎo)致基因多樣性的結(jié)果?；蚨鄳B(tài)性的作用很大，具體有錯義突變、無義突變、同義突變、移碼突變、剪接異常。

4　結(jié)論

通過以上方法，得出結(jié)論：B群鏈球菌StrC基因多態(tài)性與定植/侵襲力有關(guān)。在7型菌中，Ⅲ型菌毒力最強，定植/侵襲力最大，7組實驗組和對照組比較，定植/侵襲力最小。B群鏈球菌（GBS）的毒力大小與特異的莢膜多糖抗原、脂磷壁酸、神經(jīng)氨酸酶數(shù)量等有關(guān)，通過抗吞噬作用，或增強細菌對組織細胞的黏附作用發(fā)揮侵襲力，因Ⅲ型含脂磷酸和神經(jīng)氨酸酶最多，所以毒力最強。

［1］朱艷賓.妊娠期需氧菌性陰道炎與妊娠結(jié)局及母嬰B族鏈球菌感染的相關(guān)性研究［D］.天津醫(yī)科大學(xué)，2013，5（1）：19-20.

［2］吳濤.豬鏈球菌2型revS基因缺失株構(gòu)建及HYL蛋白與宿主互作的研究［D］.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008，6（1）：70-71.

［3］朱宏飛.腦膜炎奈瑟氏菌莢膜抗原基因簇的研究和遺傳分型方法的建立［D］.南開大學(xué)，2012，5（1）：91-92.

［4］鞠愛萍.蘇中地區(qū)豬鏈球菌分子流行病學(xué)調(diào)查及豬鏈球菌2型反應(yīng)調(diào)控因子RevS缺失株的構(gòu)建［D］.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007，5 （1）：218-219.

［5］王彥君.細胞毒性T淋巴細胞相關(guān)抗原4基因微衛(wèi)星多態(tài)性與炎癥性腸病相關(guān)性研究［D］.吉林大學(xué)，2008，4（1）：697-698.

［6］司有輝.谷氨酰胺合成酶GlnA及其轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子GlnR對2型豬鏈球菌致病力影響的研究 ［D］.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009，6（1）：942-943.

［7］王穎童.河北省健康人群腦膜炎奈瑟菌、流感嗜血桿菌、肺炎鏈球菌帶菌情況調(diào)查研究 ［D］.中國疾病預(yù)防控制中心，2013，6 （30）：126-127.

△佛山市衛(wèi)生和計生局醫(yī)學(xué)科研課題立項，編號2015278。

R446.5

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1672-8351（2016）09-0141-03